酵母SUP4-o突变检测系统及铬遗传毒性分析

目的:应用酵母SUP4-o突变检测系统来评价两种价态铬(Cr^(3+),Cr^(6+))的遗传毒性。方法:用电转化法将YCpMP2质粒转入MKP-o(SJPt576)得到SJR576-p菌株。用相同浓度(150μmol/L)三氯化铬和重铬酸钾(Cr^(3+),Cr^(6+))分别处理酵母SJR576-p细胞74 h,取适量培养细胞均匀涂布刀豆氨酸抗性筛选平板和尿嘧啶缺陷合成培养基(SC-Ura),计数克隆数。结果:150μmol/L三氯化铬和重铬酸钾处理导致SUP4-o正向突变频率分别为2.6×10^(-5)和2.3×10^(-5),比对照提高约5倍,两种价态铬之间无显著性差异(P>0.05)。结论:真核酵母SUP4-o突变检测系统对可疑遗传毒性化合物的分析具有多个可筛选的性状和遗传操作的简便性。三价铬也能够造成酵母细胞遗传物质的损伤,具有一定的遗传毒性。

酿酒酵母总蛋白的提取及其耐核苷类药物表达特性分析

建立了一种简便适用于从真核细胞酿酒酵母菌中提取总蛋白的方法,应用该方法探索了两株对核苷类药物5-FC高耐受菌株的蛋白表达特性。实验中以细胞破碎率和总蛋白浓度为主要检测指标,对比分析了6种酵母细胞破碎方法,即液氮研磨、超声波破碎、酸洗玻璃珠法、酶法、反复冻融法、TNBIO高压细胞破碎,通过比色法测定了总蛋白的含量,发现改进后的酸洗玻璃珠法的细胞破碎率为81.25%,总蛋白含量152.67 mg/m L,效果明显优于其他几种方法.实验表明,在裂解液中添加适量的PMSF等蛋白酶抑制剂,可以有效防止蛋白的降解。经过SDSPAGE对核苷类药物高耐药性菌株酵母总蛋白表达特性分析,酸洗玻璃珠法提取的蛋白含量高,所含杂质少,条带比较多且清晰,其中相对分子质量约为21 kDa和43kDa的蛋白有明显的表达差异,可能与菌株细胞的耐药性相关。