口腔癌及癌前病变中MLH-1与PTEN的表达及相关性研究

目的:通过检测口腔癌及癌前病变中错配修复基因MLH-1与抑癌基因PTEN的蛋白表达并分析二者之间的相关性及意义.方法:用免疫组织化学SP法检测48例口腔鳞状细胞癌、上皮单纯增生11例及上皮异常增生10例,而正常口腔黏膜10例中错配修复基因MLH-1与抑癌基因PTEN的蛋白表达水平,并对结果进行统计分析.结果:口腔鳞状细胞癌中MLH-1的阳性表达率为47.9%(23/48),明显低于其他各组;PTEN蛋白的阳性表达率为47.9%(23/48),明显低于其他各组,与正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生对比均有显著性差异(P<0.05).经直线相关分析和Spearman等级相关分析,MLH-1与PTEN之间存在正相关的关系(r=0.548,P=0.018).结论:MLH-1与PTEN在口腔鳞状细胞癌发生过程中均起作用,MLH-1与PTEN可能存在正相关的关系.

水飞蓟宾联合5-FU抑制胃癌MGC-803细胞增殖及机制

目的:研究水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制胃癌MGC-803细胞增殖,探讨其协同增效作用及机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的水飞蓟宾对人胃癌MGC-803细胞,人正常肝L02细胞的增殖抑制作用,并计算IC20,IC50;采用IC20浓度的水飞蓟宾联合不同浓度的5-氟尿嘧啶,观察对人胃癌MGC-803细胞增殖抑制作用;水飞蓟宾单独或联合5-FU作用于胃癌MGC-803细胞,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达.结果:MTT法检测显示,水飞蓟宾对胃癌MGC-803细胞有增殖抑制作用,且呈剂量-效应关系,对人正常肝L02细胞增殖抑制作用较弱.水飞蓟宾作用于胃癌MGC-803细胞48 h的IC20、IC50浓度分别为144.6、214.7μmol/L;水飞蓟宾与不同浓度的5-氟尿嘧啶联合作用于MGC-803细胞48 h,可提高MGC-803细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性,增敏5.73倍.流式结果显示,无论是单独使用水飞蓟宾、5-氟尿嘧啶还是水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用都能使细胞抑制在G0/G1期和出现凋亡细胞群;Western blotting结果显示,水飞蓟宾与5-氟尿嘧啶联合使用,能使细胞的细胞周期相关蛋白P15表达升高,CDK6表达下降,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,Casepase-9,Caspase-3活化降解.结论:水飞蓟宾提高胃癌MGC-803细胞对5-FU的敏感性,水飞蓟宾在联合5-FU之后能够使MGC-803细胞抑制在G0/G1期,并通过线粒体凋亡途径使细胞发生凋亡.

脂磷壁酸诱导人成牙本质样细胞炎症微环境的机制研究

目的研究脂磷壁酸(LTA)诱导的体外培养人成牙本质样细胞(hOB)炎症反应及其上游信号通路的作用机制。方法从人牙髓组织中分离并培养hOB,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测成牙本质细胞标志物,对hOB进行鉴定,结果采用独立样本t检验;采用Western blot和免疫荧光法检测hOB中TLR2的表达,结果采用t检验;以10μg/ml LTA刺激hOB,炎性因子蛋白芯片检测42种炎性因子蛋白的表达,实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附法(ELISA)对白细胞介素6(IL-6)和IL-8的表达进行验证,Western blot检测不同时间点LTA刺激下TLR2的表达情况,结果采用单因素方差分析;Western blot检测LTA对核转录因子(NF-κB)和活化的丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白IKKα/β、IκBα、p65、ERK、JNK及p38磷酸化程度的影响,结果采用方差分析。结果分离培养获得的hOB中牙本质基质蛋白1(DMP1;t_(mRNA)=6.206,P_(mRNA)=0.0024;t_(蛋白)=11.48,P_(蛋白)=0.001)、牙本质涎磷蛋白(DSPP;t_(mRNA)=4.284,P_(mRNA)=0.0155;t_(蛋白)=34.93,P_(蛋白)<0.0001)和巢蛋白(Nestin;t_(mRNA)=6.397,P_(mRNA)=0.0021;t_(蛋白)=19.04,P_(蛋白)=0.0001)的表达均较人牙髓细胞(hDPC)高,提示已成功获得hOB。炎性因子蛋白芯片结果显示,LTA刺激后14种炎性因子均升高(P<0.05),其中IL-6和IL-8升高最为明显且经实时荧光定量PCR(FIL-6=40.62,PIL-6<0.0001;FIL-8=1768,PIL-8<0.0001)和ELISA(FIL-6=380.9,PIL-6<0.0001;FIL-8=252.5,PIL-8<0.0001)验证。10μg/ml LTA刺激16 h后,hOB中TLR2蛋白表达显著性升高,差异具有统计学意义(F=3.175,P=0.0469)。LTA刺激可使NF-κB和MAPK信号通路关键蛋白IKKα/β(F=28.7,P<0.0001)、IκBα(F=106.3,P<0.0001)、p65(F=44.58,P<0.0001)、ERK(F=45.49,P<0.0001)、JNK(F=12.43,P=0.0007)及p38(F=28.28,P<0.0001)磷酸化程度升高。结论 LTA可能通过TLR2/NF-κB/MAPK信号通路促进hOB释放炎性因子。

成牙本质细胞在牙髓免疫防御中的作用研究进展

成牙本质细胞是牙髓牙本质复合体中的特征性细胞,主要功能是合成、沉积和矿化胶原基质从而形成牙本质。成牙本质细胞的功能不仅局限于牙本质的形成,作为牙髓的第一道细胞防线,可通过模式识别受体(PRR)识别多种病原相关分子模式(PAMP),启动免疫防御反应。本文就成牙本质细胞的组织生理学特点及其在牙髓炎症免疫防御中的作用作一综述。