抗除草剂bar基因植物表达载体的构建与抗性功能的检测

根据GenBank上发表的抗除草剂bar基因序列设计引物,通过高保真DNA聚合酶进行PCR扩增,获得bar基因片段,连接在pMD18-T中间克隆载体上,用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ酶切后连接到pBI121上获得pBI121-bar。用HindⅢ内切酶切含Bt-4AB基因的质粒并与pBI121-bar重组,重组质粒命名为pBI121-bar/Bt。重组质粒导入农杆菌LBA4404工程菌中,转化新海24号棉花胚性愈伤组织。PPT抗性实验证明,构建的pBI121-bar/Bt载体获得抗除草剂抗性,并筛选出PPT临界筛选浓度为3.0mg/L。

农杆菌介导的bar基因和Bt基因的遗传转化研究

【目的】探讨不同基因对不同棉花品种的遗传转化差异。【方法】以新海14号、新海16号、新海24号和新海30号四个不同基因型海岛棉胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法分别将pBI121-bar/Bt和pBI121-Bt转化至四个品种中,对遗传转化体系中的PPT浓度和Cef浓度进行筛选,观察比较不同浓度下不同基因型胚性愈伤的生长状况,并对单价表达载体和双价表达载体转化不同基因型胚性愈伤的生长状态进行比较。【结果】转化体系的筛选确定双价表达载体的PPT筛选浓度为3.0 mg/L,Cef的筛选浓度为800 mg/L;转化单价表达载体LBA4404/pBI121-Bt的Cef的筛选浓度为600 mg/L。转化单价表达载体后,新海14号的出愈率最高,新海30号的出愈率最低;转化双价表达载体后,新海14号的出愈率最高,新海24号的出愈率最低。【结论】不同基因型对PPT的敏感性有差异;转化不同基因后,胚性愈伤对抗生素的敏感度有所不同;转化相同基因后,不同品种的胚性愈伤生长存在差异。

农杆菌介导海岛棉胚性愈伤组织遗传转化影响因素分析

以3个栽培海岛棉品种新海30、新海24、新海16诱导而来的胚性愈伤组织为受体材料,分析了3种农杆菌菌株EHA105、LBA4404、GV3101和3种已构建质粒pCAMBIA1301、pCAMBIA1304、pBI121对已建立的农杆菌介导海岛棉外源基因转化体系的影响。研究结果表明,菌种和质粒对转化率有极其显著的影响,而两者之间的互作关系也比较显著。最终得到农杆菌介导转化海岛棉胚性愈伤组织的最佳菌种和质粒是GV3101和pBI121。

海岛棉与陆地棉激素诱导胚性愈伤组织的研究

以新疆主栽品种新海25号、新海16号、新陆早39号和新陆早42号下胚轴为外植体,通过不同浓度两种激素的4种组合进行诱导,获得了胚性愈伤组织,并进一步发育成苗,为拓宽海岛棉与陆地棉再生基因型和转基因研究奠定了基础。研究结果得出:所用的4种激素组合均能有效诱导愈伤组织;0.05 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT为陆地棉愈伤组织最佳诱导条件,0.1 mg.L-12,4-D+0.1 mg.L-1KT为海岛棉愈伤组织最佳诱导条件;诱导出的愈伤组织继代于无激素且KNO3含量加倍的培养基中可产生胚性愈伤组织,铺滤纸有利于胚状体的成熟,并产生发达根系;陆地棉的分化速度和胚胎发生的速度快于海岛棉。4个品种在10～12个月内都成功得到再生苗。