直视下袖套法加套入式吻合大鼠全血供肝移植模型建立

目的 直视下应用套入式吻合方法重建大鼠移植肝的动脉血供。 方法 SD- SD大鼠肝移植30只,SD- Wistar大鼠肝移植5 0只。供体从腹腔干动脉开始分别结扎脾动脉、胃左动脉、胃右动脉及胃十二指肠动脉,保留肝固有动脉。以8- 0无损伤缝线作袖套法加套入式方法行供体的腹腔干动脉和受体的右肾动脉吻合,恢复移植肝动脉血供。 结果 无肝期最短13min,最长2 1min。套入式吻合肝动脉时间平均4 .0 0±1.31min;手术成功率96 .3% ;SD- SD大鼠成功2 9只,术后不使用免疫抑制剂均健康存活,最长目前已超过2个月。SD- Wistar大鼠成功4 8只,一般术后3～5 d出现急性排斥反应,不用免疫抑制剂于9d后死于排斥反应所致的肝功能衰竭。 结论 直视下袖套法加套入式吻合方法重建大鼠移植肝的动脉血供是一种稳定。

大鼠原位肝移植术后急性排斥反应中Fractalkine的表达及意义

目的利用直视下套入式吻合肝动脉加袖套法吻合门静脉建立的大鼠全血供肝移植模型,研究同种异体大鼠肝移植术后早期急性排斥反应中Fractalkine(Fkn)的表达情况。方法制备SD-Wistar大鼠全血供肝移植模型,随机分为两组,每组20只。对照组:于移植术后第1天开始腹腔内注射生理盐水(3ml/kg);实验组:于移植术后第1天开始腹腔内注射环孢素A(3mg/kg)。术后观察大鼠一般情况,并于第3、5及7天分别处死5只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织排斥反应强度(rejection activity index,RAI)及Fkn表达情况;余大鼠观察生存时间。结果对照组存活18只,实验组存活19只。实验组较对照组术后一般情况好,存活时间为19.50±4.51d,与对照组7.60±1.60d比较,差异有统计学意义(P<0.05)。组织学观察:对照组移植肝小叶结构清楚,汇管区增大,大量淋巴细胞浸润;实验组移植肝组织RAI明显降低。术后第3、5及7天,对照组RAI为3.80±0.35、5.90±0.87及7.50±1.30,实验组为3.10±0.21、3.90±0.41及4.50±0.52。两组术后第7天RAI比较差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组织化学观察:两组移植肝组织中均见细胞浆或细胞膜有棕色颗粒的Fkn表达,但实验组表达较弱。术后第3、5及7天,对照组Fkn细胞数为8.20±0.57、21.30±3.30及25.70±4.91,实验组分别为8.30±0.56、10.30±0.67及11.70±1.23;两组第5、7天比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Fkn参与了同种异体大鼠肝移植急性排斥反应,可作为诊断大鼠肝移植急性排斥反应发生的指标之一。环孢素A可以通过抑制Fkn表达来抑制排斥反应发生的强度。

大黄素对大鼠原位肝移植术后急性排斥反应的干预

目的:目前国外已有少量报道证实中药大黄素具有极强的免疫抑制效应。实验拟进一步验证大黄素对同种异体大鼠肝移植术后早期急性排斥反应的干预效果。方法:实验于2004-01/2005-02在西安交通大学第一附属医院肝胆外科实验室完成。制备SD→Wistar大鼠全血供肝移植模型(n=80),按随机数字表法分为4组,每组20只。模型对照组、大黄素组、环孢素A组及环孢素A+大黄素组分别腹腔注射给予9g/L生理盐水、1.5mg/(kg·d)大黄素、3mg/(kg·d)环孢素A及3mg/(kg·d)环孢素+1.5mg/(kg·d)大黄素。术后观察大鼠一般情况,并于第7天各组分别处死10只大鼠,取肝脏标本及血清,观察移植肝组织排斥反应强度、Fractalkine(Fkn)阳性表达情况及大鼠血清中白蛋白含量及谷丙转氨酶活性,余受体继续应用药物干预直至死亡,记录其生存时间。结果:各组受体手术成功数量分别为模型对照组17只、大黄素组18只、环孢素A组18只、环孢素A+大黄素组18只。①与模型对照组相比,各用药组大鼠术后存活时间明显延长(P<0.05),以环孢素A+大黄素组存活时间最长。②与模型对照组相比,各用药组大鼠术后第7天移植肝排斥反应强度明显降低(P<0.05),血清中白蛋白含量明显升高,而谷丙转氨酶活性明显降低(P均<0.05),肝组织中Fkn表达阳性率明显降低(P<0.05),以环孢素A+大黄素组表现最为显著。结论:大黄素具有抑制同种异体大鼠肝移植急性排斥反应发生、发展的作用,与环孢素A联用具有协同作用。

大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应中肝细胞凋亡的影响

背景:抑制急性排斥反应的高效免疫抑制剂为器官移植所必需,较多的中药成分具有免疫调节作用。课题组在前期实验成功建立全血供大鼠肝移植模型基础上,初步发现大黄素对大鼠肝移植后急性排斥反应具有抑制作用,而且这种抑制作用可以通过多途径达到。目的:观察大黄素对同种异体大鼠肝移植后早期急性排斥反应过程中肝细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-04/09在西安交通大学第一附属医院肝胆外科实验室完成。材料:供体选用SD大鼠80只,雌雄不限;受体选用雄性Wistar大鼠80只,制备SD→Wistar大鼠全血供肝移植模型。方法:将制备的80只大鼠模型按随机数字表法分为4组,每组20只。于移植后第1天开始按分组设计行腹腔内药物注射,模型对照组仅给予生理盐水,大黄素组给予大黄素1.5mg/(kg·d),环孢素A组给予环孢素A3mg/(kg·d),环孢素A+大黄素组给予环孢素A3mg/(kg·d)+大黄素1.5mg/(kg·d)。主要观察指标:移植后第7天各组处死10只大鼠,取肝脏标本,观察移植肝组织急性排斥反应强度、肝细胞凋亡指数、Bcl-2蛋白的表达。余受体继续应用药物干预直至死亡,记录其生存时间。结果:与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植后存活时间明显延长(P<0.05),以环孢素A+大黄素组存活时间最长。移植后第7天,与模型对照组相比,大黄素组、环孢素A组、环孢素A+大黄素组大鼠移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);大黄素+环孢素A组大鼠的移植肝排斥反应强度、肝细胞凋亡指数显著低于其他3组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著高于其他3组(P<0.05)。结论:大黄素具有抑制同种异体大鼠肝移植急性排斥过程中肝细胞凋亡程度,改善肝功能的作用,与环孢素A具有一定的协同作用,同时又能减轻环孢素A引起的肝功能损害。

原发性肝癌伴阻塞性黄疸的诊断及根治性手术治疗

目的探讨原发性肝癌致阻塞性黄疸的诊断和外科根治性手术治疗的方法及疗效。方法自1991年1月至2001年12月间对17例原发性肝癌致阻塞性黄疸的患者进行了诊断和外科根治性手术治疗。其中行肝叶切除及胆总管切开取癌栓者14例,行同种异体原位肝移植术3例。结果患者平均生存时间为8个月,最长存活时间为24个月。结论明确的诊断和根治性手术治疗是治疗伴阻塞性黄疸的原发性肝癌关键。

一种新型的心脏移植模型的应用体会

采用 cuff技术及 sleeve方法建立大鼠对大鼠 ,大鼠对豚鼠的同种或异种心脏腹部移植模型。方法 :切除左肾行供体左颈总动脉对受体左肾动脉 ,供体左肺动脉对受体左肾静脉建立心脏血管通路。结果 :共进行 116次 ,成功 10 9例 ,成功率94% (同种 6 6例 ,异种 5 0例 )。移植后同种平均存活 (90± 0 .8) d,异种存活时间由 15 m in至 5 2 h不等。结论 :该方法应用方便、简单可靠 ,是研究同种或异种器官移植的急、慢性排斥反应机制及免疫药物筛选的一种理想模型。

近第二肝门部肝脏肿瘤行肝切除时不同控制出血方法的应用体会

目的 探讨靠近第二肝门处的肝肿瘤的不同手术方法及血管损伤的处理措施。方法 选择 3 6例肝脏肿瘤靠近第二肝门处的病人 ,分别应用常温下全肝血流阻断 (简易法 ,NHVE)、PTC法 ( Portal triad clamping)、选择性半肝血流阻断术 ( Alternatehemihepatic vascularexclusion)进行非规则性肝切除。从阻断肝血流的时间、出血量、术后并发症、肝肾功能及住院天数等项指标分析三种不同手术方法的优缺点。结果 NHVE出血量少、阻断血流时间短 ,而并发症、肝肾功能、住院天数方面无差异性。结论 在处理靠近尤其部分侵及肝静脉、下腔静脉处的肝肿瘤切除时 。

胰十二指肠切除术后胰瘘的预防

目的：观察改进的胰十二指肠切除术手术方法及术后应用乌司他丁及奥曲肽对术后胰瘘的防治。方法：67例胰十二指肠切除术后病人随机分为两组：1组单独应用奥曲肽38例。2组：应用乌司他丁+奥曲肽29例。观察两组病人术后胰瘘发生率，住院天数，术后胰液量，胰淀粉酶值方面是否存在差异。结果：奥曲肽组胰瘘的发生率为5．3％。乌司他丁+奥曲肽组无胰瘘发生，在住院天数，术后胰液量，胰淀粉酶值方面两组统计学方面有明显差异(P均<0．01)。结论：改进的胰十二指肠切除术手术方法及乌司他丁联合应用奥曲肽对于胰十二指肠切除术术后胰瘘的防治有着明显疗效，值得进一步研究、推广。

原发性肝癌致阻塞性黄疸的手术治疗体会

目的 探讨外科手术治疗原发性肝癌致阻塞性黄疸的方法及疗效。方法 自1991年1月至2001年12月期间我院对17例原发性肝癌致阻塞性黄疸的患者进行外科手术治疗,其中行肝叶切除及胆总管切开取癌栓者14例,行同种异体原位肝移植术3例。结果 患者平均生存时间为8个月,最长24个月。结论 外科治疗原发性肝癌致阻塞性黄疸明显改善了患者生活质量,延长了生存时间。

一种犬肝移植大血管快速重建的新方法

目的探讨肝移植术中大血管重建方法的改进,提高吻合速度,缩短无肝期时间,减少其对机体的损害。方法选用杂种犬32只,随机分为供、受体两组,每组16只,再将受体组按血管重建方式不同随机分为两组A组10只（磁环吻合非转流组,使用不同口径的氧化钛涂层磁环）,B组6只（手工吻合被动静脉转流）。对术中各组的手术时间、血液动力学、血管吻合情况及术后存活情况分别进行观察。结果1手术时间A组手术时间为3.24±0.49h,无肝期为5.89±2.27min,肝下下腔静脉吻合时间为3.89±0.73min;B组手术时间为4.12±0.51h,无肝期为28.33±6.04min,肝下下腔静脉吻合时间12.16±3.72min;两组比较有统计学差异（P〈0.01）。2血流动力学A组血流动力学稳定,不用升压药,补液730.56±150.56ml;B组无肝期血压偏低,持续时间长,肝脏复流后需要大量升压药维持血压,补液量2241.67±390.78ml。3血管吻合口情况A组吻合口均无渗血,少数扭曲吻合口通过轻度旋转磁环予以纠正,术后无血栓形成;B组有4只因肝素化导致吻合口持续渗血,其中1只门静脉血栓,1只门静脉扭曲。4术后存活情况A组存活7d以上3只,3-6d6只,12h1只;B组存活3-6d2只,1-2d3只,12h1只。结论使用磁环进行犬肝移植大血管重建,吻合过程简便,无肝期明显缩短。但磁环需要留置腹腔内,有待进一步改进。

应用磁性吻合技术进行犬肝移植的大血管重建

目的:改进经典式肝移植术中大腔静脉及门静脉重建方法,观察该方法对提高吻合速度与质量、缩短无肝期、减少无肝期对机体的严重影响及缩短手术时间的效果。方法:实验于2005-02/2006-03在西安交通大学第一医院动物外科完成。①32只杂种犬随机分为供受体各16只,进行经典式原位肝移植。②在不使用静脉转流的情况下,利用氧化钛涂层磁环进行大血管的快速重建,在供肝修整时选用相应口径的磁环将血管断端外翻套入磁环,然后荷包缝合固定。③在受体肝脏游离切除以后,将相应口径的磁环套入血管断端,使用尖镊子外翻固定。④检查血管方向,然后快速对合,开放血流。⑤如果发现吻合口扭曲,可以轻度旋转磁环进行调整,至最佳位置。⑥观察受体总手术时间及肝上、肝下下腔静脉及门静脉吻合时间、术中血流动力学变化、吻合口情况及肝移植术后存活情况。结果:预实验选用犬12只,正式实验20只,进入结果分析20只。①手术时间:受体犬总手术时间(3.24±0.49)h,其中无肝期(5.89±2.27)min,肝下下腔静脉吻合时间约(3.89±0.73)min。②血流动力学:受体犬在不使用静脉转流的情况下术中血流动力学稳定,不用升压药,平均补液(730.56±150.56)mL。③吻合口情况:血管吻合口通畅无狭窄,均无渗血,少数扭曲吻合口通过轻度旋转磁环予以纠正,术后均无血栓形成,术后27d愈合良好。④术后存活情况:正式实验手术10例,存活9例。结论:使用磁环进行犬肝移植大血管重建,吻合过程简便,无肝期明显缩短。但是有异物存留体内的缺点,临床应用有待进一步研究。

中华眼镜蛇蛇毒因子在豚鼠-大鼠异种心脏移植中的作用

目的 应用中华眼镜蛇蛇毒因子 (CVF)消耗补体 ,观察豚鼠心脏在移植入 Wistar大鼠腹腔内后对超急性排斥反应的变化。方法 按 0 .2 μg/ g体重 CVF大鼠腹腔内分两次间隔 6小时注射 ,18小时后进行心脏移植。脾切除及腹腔内注射环磷酰胺 (Cy)均在移植前一天进行。设计分为四组 :A组为对照组 ,不用任何药物 ;B组仅用 CVF;C组应用 CVF+ Cy+脾切除 ;D组为 Cy+脾切除。Cy的用量为 6 0 m g/ kg体重腹腔内注射。检测各组受体的供心存活时间 ,并在供心停跳后取出行光镜、电镜检查。结果 A、B、C、D各组供心存活时间分别为 15～3 12 0分钟。供心存活时间的统计学分析 :A组与 B、C两组比较 P值 <0 .0 1,A组与 D组比较 ,B组与 C组比较 P值 >0 .0 5 ,B组与 D组比较 ,C组与 D组比较 P值 <0 .0 1。光镜、电镜结果提示 :B、C组与 A、D组有明显不同。结论 CVF能明显抑制补体活性 ,减轻或延缓超急性排斥反应的发生 ,使供体器官存活时间延长。

改良协调性金黄地鼠到大鼠的异位腹腔异种心脏移植模型的建立

目的:建立一种改良的异位腹部异种心脏移植模型,解决模型建立中的技术问题. 方法:利用袖套法和cuff套管法完成从金黄地鼠到大鼠的异种心脏移植模型. 将供心的颈总动脉与受者左肾动脉进行袖套式吻合,将供心右肺动脉与受者左肾静脉利用套管法吻合. 每日通过对受体进行左侧腹壁触诊完成对供心功能的评价. 结果:共实施105例异位腹部异种心脏移植模型,95例成功. 异种移植物生存期为移植后3～4 d,并且发生经典急性血管性排斥反应. 结论:建立了一种简便、实用、稳定的用于研究协调性异种移植免疫排斥反应发生机制的动物模型.

乙酰肝素酶在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌组织中乙酰肝素酶(HPSE)的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SABC法检测45例胰腺癌组织、20例癌旁组织、20例正常胰腺组织中HPSE的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。结果胰腺癌组织中HPSE的阳性表达率明显高于癌旁及正常胰腺组织(χ2=22.35、29.79,P<0.05)。淋巴结转移组HPSE蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移组(χ2=4.60,P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ期组HPSE蛋白阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期组(χ2=6.91,P<0.05)。结论在胰腺癌组织中HPSE高表达,且与肿瘤的浸润、转移有关。HPSE可以作为判断胰腺癌浸润、转移的参考指标之一。

乙酰肝素酶和核转录因子κB在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的检测乙酰肝素酶(heparanase)和核转录因子κB(NF-κB p65)在胰腺癌中的表达,分析其与预后的关系并探讨NF-κB对调节heparanase的可能机制。方法用免疫组化方法检测48例胰腺癌和26例癌旁组织中heparanase和NF-κB p65蛋白的表达,并分析与临床病理因素以及预后之间的关系。结果heparanase和NF-κB在48例胰腺癌中的阳性表达率分别为62.5%和45.9%,显著高于癌旁组织。heparanase阳性表达与TNM分期(P=0.031)、淋巴结转移(P=0.003)呈正相关,与3年生存率呈负相关(20.0%vs0%,P=0.001);NF-κB p65与淋巴结转移(P=0.017)、远处转移(P=0.031)正相关,与预后无相关。heparanase与NF-κB p65有较高的共同阳性表达率(P=0.018)。多因素分析显示heparanase和NF-κB均非影响预后的独立因素。结论heparanase在胰腺癌中表达增高且与预后不良相关,NF-κ可能上调heparanase表达水平,促进heparanase介导的肿瘤浸润转移。

NF-κB及其相关炎性因子致大鼠移植肝冷保存损伤的机制

目的通过大鼠移植肝在不同冷保存时间再灌注后核因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)及其相关炎性因子的激活情况,判断冷保存时间、NF-κB激活以及移植肝功能损伤三者之间的联系。方法用Wistar大鼠建立原位肝移植模型,假手术组(A组)作为对照组,观察大鼠移植肝在4℃UW液中保存45 min(B组)、120 min(C组)1、80 min(D组)以及再灌注3 h后肝组织、血清中NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肝损伤指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和肝细胞凋亡的变化情况。结果随着移植肝冷保存时间的延长NF-κB逐渐激活(P<0.05),并使肝组织内TNF-αI、L-1β水平上调(P<0.05);再灌注后,NF-κB近一步激活(P<0.05),肝组织中TNF-αI、L-1β进一步上调(P<0.05),ALT、AST和肝细胞凋亡指数明显升高(P<0.05),肝功能损害加重。结论NF-κB在供肝的冷保存阶段随时间的延长呈诱导性激活,再灌注后呈爆发式激活,并通过上调其靶基因TNF-α、IL-1β的转录产生肝脏损伤,这可能是肝脏冷保存再灌注损伤发生的重要机制。

Fractalkine在大鼠肝硬化中全肝血流阻断致肺损伤中表达

目的探讨趋化因子Fractalkine(Fkn,CX3CL1)在大鼠肝硬化模型中全肝血流阻断致肺损伤中表达及意义。方法选择80只雄性成年SD大鼠,鼠龄2.0～2.5个月,体质量160～200 g。随机分为4组(n=20),即对照组(A组),阻断肝门、肝上下腔静脉及肝下下腔静脉15 min(B组)、30min(C组)、45 min(D组);制作肝硬化大鼠全肝血流阻断模型。取右肺下叶肺组织常规苏木精-伊红(HE)染色病理检查,留取肺及肝组织检测Fkn的表达,并切取肺组织及血浆检测核因子-κB(NF-κB)及白细胞介素21(IL-21)水平变化。结果各组成功建模后,D组肺损伤病理评分[(12.25±1.52)分]明显高于A组[(2.05±1.00)分]、B组[(7.90±1.62)分]及C组[(8.25±1.55)分](P<0.001),A组无明显病理改变。在各组肝、肺组织中Fkn的表达测定中,D组Fkn表达明显高于B组、C组及A组(P<0.05)。血清中NF-κB、IL-21表达在A组[(11.67±2.11) ng/L,(633.30±42.03) ng/L]最低(P<0.05),D组[(18.13±1.83) ng/L,(801.96±54.38) ng/L]明显高于B组[(14.72±2.56) ng/L,(712.67±53.63) ng/L]及C组[(15.23±2.26) ng/L,(713.59±61.60) ng/L](P<0.05)。肺组织中NF-κB、IL-21表达A组[(14.48±2.07) ng/L,(590.89±55.38) ng/L]最低(P<0.05),D组[(19.66±1.53) ng/L,(910.85±87.63) ng/L]明显高于B组[(16.65±1.75) ng/L,(696.23±51.91) ng/L]及C组[(17.02±1.47) ng/L,(697.22±41.24)ng/L](P<0.05)。结论 Fkn在肝硬化大鼠全肝血流阻断致肺组织损伤时表达增加,且阻断时间超过30 min后更加明显。