测定同种异体反应中分泌细胞因子的T淋巴细胞及其临床意义初探(英文)

本研究目的是测定同种异基因外周血单个核细胞 (PBMNCs)刺激后分泌不同细胞因子的T淋巴细胞水平并对其临床意义进行研究 ,以建立一种监测同种异体反应性T淋巴细胞的新方法。首先 ,利用新颖的细胞因子分泌检测方法 (CKSA)从单细胞水平定量测定了人混合淋巴细胞反应后分泌IFN γ ,IL 4和IL 10的T淋巴细胞水平 ;然后根据上述实验结果 ,分析 2例接受异基因骨髓移植后发生急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的患者外周血中分泌IFN γ的T细胞水平。结果表明 :经同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN γ的T淋巴细胞水平显著升高 [(1.12± 0 .13) % ],而分泌IL 4和IL 10的T淋巴细胞则无升高 ,分别为 (0 .12± 0 .0 3) %和 (0 .10± 0 .0 3) %。患者外周血分泌IFN γ的T淋巴细胞水平和aGVHD的发生及严重程度有一定的相关性。结论 :利用CKSA从单细胞水平定量测定同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN γ的T淋巴细胞水平的技术具有临床应用价值 ,可以应用于对aGVHD的识别。

酶联免疫斑点法研究小鼠急性移植物抗宿主病模型中产生干扰素γ细胞的水平

目的:探讨异基因小鼠混合淋巴细胞反应(M LR)和急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型中,供者针对受者细胞反应后产生干扰素-γ细胞(IFN-γPC)的水平。方法:在近交系MHC不合的异基因小鼠脾细胞M LR和aGVHD模型中,用酶联免疫斑点法(EL ISPOT)对供者针对受者细胞反应后IFN-γPC的水平及其影响因素进行了研究。结果:在异基因小鼠脾细胞M LR后,用EL ISPOT检测到IFN-γPC显著升高,具有针对受者细胞的特异性。在异基因小鼠aGVHD模型中,重度aGVHD小鼠脾细胞与未移植的异基因受鼠脾细胞在M LR后,IFN-γPC较中度aGVHD明显升高,无aGVHD药物预防组较预防组IFN-γPC明显升高,并具有针对受者细胞的特异性,与aGVHD的临床评分相一致。结论:用EL ISPOT可以快速而敏感地检测异基因小鼠脾细胞M LR中的同种异体反应,并和aGVHD的程度以及病程具有相关性。

基于细胞因子对介导同种异体反应的T淋巴细胞的测定和富集及扩增

目的：对同种异体外周血单个核细胞（PBMNCs）刺激后分泌细胞因子的T淋巴细胞进行测定、富集和扩增，为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径。方法：利用细胞因子分泌检测方法（CKSA），从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌干扰素-γ（IFN-γ）的T淋巴细胞；并对其进行磁性富集、扩增，再用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测其对原抗原的特异性。结杲：同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ的T淋巴细胞水平较对照组明显升高[（1．12±0．13）%vs（0．23±0．07）%，P〈0．05]，进一步富集达（67．3±10．5）%，相对倍数为（93．8±22．1）倍。经过富集的细胞能够通过OKT3、抗CD28单抗和IL-2组合，在21～28d扩增〉600倍，扩增后的细胞保留与原相关异基因刺激细胞特异性反应，并具分泌IFN-γ的能力。结论：利用CKSA从单细胞水平定量测定到显著升高的由同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞。这些细胞可以被有效地富集和扩增，并保留针对原抗原的特异反应性。

急性白血病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ型水平及其临床意义

目的了解急性白血病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ型（ｓＴＮＦＲⅠ）水平及其临床意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测了急性白血病５７例（其中初发未治３１例，包括急性非淋巴细胞白血病２１例和急性淋巴细胞白血病１０例；复发难治１１例；骨髓缓解１５例）血清ｓＴＮＦＲⅠ水平。结果初发未治和复发难治者血清ｓＴＮＦＲⅠ浓度〔分别为（１．９２±１．８０）μｇ／Ｌ和（１．２９±０．３１）μｇ／Ｌ〕显著地高于正常对照和骨髓缓解者〔分别为（０．６２±０．３４）μｇ／Ｌ和（０．７３±０．４４）μｇ／Ｌ〕。且初发未治患者治疗前血清ｓＴＮＦＲⅠ＜２．０μｇ／Ｌ者治疗后的骨髓缓解率（６８．２％）显著较高。结论提示测定血清ｓＴＮＦＲⅠ有助于了解急性白血病患者异常的免疫状况并对预测和了解其治疗效果有一定的临床实用价值。

造血干细胞移植中的肝脏损害问题

肝脏损害是造血干细胞移植的常见并发症,发生原因多样,临床表现类似,与移植是否成功关系密切。本文讨论了造血干细胞移植前肝炎病毒检测、移植后常见的病毒相关性肝损和非病毒性肝损的特点及诊治等方面问题。

基于细胞因子分泌对人混合淋巴细胞反应中的T淋巴细胞进行测定和纯化(英文)

目的对同种异体外周血单个核细胞(PBMNCs)刺激后分泌细胞因子的T淋巴细胞进行测定和纯化,为研究介导同种异体反应的T淋巴细胞提供新的途径。方法利用新颖的细胞因子分泌检测方法(CKSA)从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌IFN-γ,IL-4和IL-10的T淋巴细胞;对分泌IFN-γ的T细胞进行磁性纯化。结果同种异体PBMNCs刺激后检测到分泌IFN-γ的T淋巴细胞水平明显升高(112%±013%),而分泌IL-4和IL-10的T淋巴细胞则无升高(分别为012%±003%和010%±003%);分泌IFN-γ的T淋巴细胞可以被进一步纯化(938±221)倍。结论利用CKSA从单细胞水平定量测定同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞水平显著升高,这些细胞可以被有效地纯化。

马利兰和环磷酰胺预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征

目的:评估以马利兰和环磷酰胺(Bu-CY2)为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效。方法:对6例MDS患者进行非亲缘异基因骨髓移植术,以Bu-CY2为预处理方案,Bu 4 m g.k-g 1.d-1,-7 d^-4 d,CY 60 m g.k-g 1.-d 1,-3 d^-2 d。输入单个核细胞数(MNC)为3.38×108/kg(2.4×108/kg^4.6×108/kg),CD 34+细胞数5.81×106/kg(1.2×106/kg^8.5×106/kg),粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)数2.88×105/kg(1.61×105/kg^4.56×105/kg)。以霉酚酸酯加环孢素A(C sA)和短程氨甲蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病,前列腺素E1脂质微球预防肝静脉阻塞病。结果:6例患者中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为18 d(13~21 d),血小板≥20×109/L的中位时间为21 d(13~24 d)。经DNA短串联重复序列多态性分析和染色体检查,均为供者骨髓植活。早期死亡率为0,移植后随访时间为27个月(6~60个月)。目前实际无病生存6例,缓解期实际生存率100%。结论:以Bu-CY2为预处理方案的非亲缘异基因骨髓移植是治疗MDS的有效方法。

恶性淋巴瘤患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及临床意义

目的 探讨恶性淋巴瘤 (ML )患者血清肿瘤坏死因子 (TNF)的两种可溶性受体 (s TNFR 和 s TNFR )水平及其与临床及 TNFα水平的关系。方法 用 EL ISA法检测 32例 ML及 31名正常人血清中 s TNFR 、s TNFR 及 TNFα水平。结果 活动期 ML患者两种 s TNFR 和 s TNFR 水平均高于正常对照组 (P值均 <0 .0 0 1)及缓解期 ML (P值均 <0 .0 0 1) ;临床有症状 ML患者 s TNFR 和 s TNFR 水平高于无症状 ML患者 (P值分别 <0 .0 5和 <0 .0 1) ;活动期 ML患者的 s TNFR 和 s TNFR 水平与肝、脾、淋巴结肿大及脏器浸润程度呈正相关 (P值分别 <0 .0 5和 <0 .0 0 1) ,其中 s TNFR 水平与血红蛋白呈负相关 (P<0 .0 5 ) ;活动期 ML血清 TNFα水平与 s TNFR 均呈正相关 (P值分别 <0 .0 0 1和 <0 .0 1) ;5例活动期 ML治疗达缓解时 ,血清 s TNFR 和 s TN-FR 均显著下降 (P值均 <0 .0 1)。结论 ML血清 s TNFRs高水平其与疾病状态有关 ,是预测预后因子之一。

双次自体外周血干细胞移植联合序贯大剂量CHOEP方案治疗中高度恶性淋巴瘤

为了评价CHOEP方案对外周血干细胞的动员效果、序贯化疗联合双次移植的远期疗效和患者的耐受性,对5例复发、难治中高度恶性淋巴瘤在双次自体外周血干细胞(PBSC)移植联合序贯大剂量CHOEP方案的临床结果进行了回顾性分析。5例恶性淋巴瘤患者的动员方案为CHOEP联合G-CSF5μg/(kg.d),两次移植预处理均为大剂量CHOEP,第二次移植与第一次移植的中位间隔时间为9(5~31)周,两次移植回输单个核细胞数(MNC)分别为3.05(1.91~4.14)×108/?和3.55(2.23~6.0)×108/?;CD34+细胞分别为4.11(2.59~4.94)×106/?和5.70(2.77^-10.6)×106/?;CFU-GM分别为2.97(2.01~4.54)×105/?和2.44(1.78~2.9)×105/?。研究结果表明,回输外周血造血干细胞后,所有患者的造血均快速重建,中性粒细胞(ANC)≥0.5×109/L时间为10(8~12)天和10.5(9~12)天,血小板≥20×109/L分别为11(10~14)天和12.5(10~15)天。双次移植后5例次并发Ⅲ-Ⅳ度口腔粘膜炎,无肝肾功能损害,无移植相关死亡。随访时间46(9~88)月,4例存活,其中3例无病生存,总体生存率80%,无病生存率60%。结论:双次自体外周血干细胞移植联合序贯大剂量CHOEP化疗方案是治疗复发、难治中高度恶性淋巴瘤的有效手段,动员方法简便安全,预处理方案耐受性好,值得临床进一步研究探索。

TGF-β1 treated murine dendritic cells are maturation resistant and down-regulate Toll-like receptor 4 expression

Objective: To explore the effects of transforming growth factor β1(TGF-β1) on dendritic cells (DC). Methods: Murine bone marrow cells were cultured with GM-CSF and TGF-β1 to develop TGF-β1-treated DC (TGFβ-DC). Then they were stimulated by lipopolysaccharide (LPS). Their phenotypes were assessed by flow cytometry (FCM). The allogeneicstimulating capacity of DC was measured by mixed lymphocyte reaction (MLR) using BrdU ELISA method and IL-12p70 protein was detected by ELISA. The expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) was analyzed by semi quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and FCM. Results: Compared to immature DC (imDC) cultured by GM-CSF alone, the TGFβ-DC express lower CD80, CD86, I-A^b and CD40. The TGFβ-DC were resistant to maturation with LPS. Maturation resistance was evident from a failure to up-regulate co-stimulatory molecules (CMs), to stimulate larger T cells proliferation and to enhance secretion of IL-12p70. We also found that TGF-β1 could down-regulate TLR4 expression on TGFβ-DC. Conclusion: TGFβ-DC are resistant to maturation stimulus (LPS) and might have some correlation with the down-modulation of TLR4 expression.

受者特异性产生干扰素γ细胞与急性移植物抗宿主病的关系

目的 研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中针对受者特异性产生干扰素γ细胞（IFN-γPC）与急性移植物抗宿主病（aGVHD）的关系。方法 以37例HLA相合的同胞allo-HSCT患者为研究对象，将移植前供者、移植后患者外周血单个核细胞（PBMNC）分别作为反应细胞（RC），移植前受者PBMNC作为异基因刺激细胞（allo-SC），在混合淋巴细胞反应后用酶联免疫斑点法检测针对受者特异性IFN-γPC，分析其与aGVHD的关系。结果 allo-HSCT前检测受者特异性IFN-γPC水平，移植后发生aGVHD组显著高于无aGVHD组（P〈0．01）；供者针对受者特异性IFN-γPC≥20／2×10^5RC时，发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的比例显著高于〈20／2×10^5RC组（P〈0．05）。aGVHD发生时患者针对移植前受者特异性IFN-γPC水平显著高于移植前相应供者针对受者的水平（P〈0．05）；亦显著高于aGVHD患者针对移植前供者的水平（P〈0．01）。移植后14天（＋14天）和＋28天时，aGVHD组受者特异性IFN-γPC水平均显著高于无aGVHD组（P值均〈0．01）。aGVHD患者经过免疫抑制剂治疗7d后，受者特异性IFN-γPC较aGVHD发生时显著降低（P〈0．05）。结论 受者特异性IFN-γPC的水平能够反映allo-HSCT前后的同种异体反应，有助于临床aGVHD的预测、诊断和监测。

同种异体反应中分泌细胞因子T淋巴细胞的测定及其临床初探

目的 测定同种异体反应中分泌细胞因子的T淋巴细胞水平并初步探讨其临床意义。方法 利用细胞因子分泌检测方法 (CKSA)从单细胞水平定量测定人混合淋巴细胞反应中分泌γ干扰素 (IFNγ) ,白细胞介素 4 (IL 4 )和IL 10的T细胞 ;分析 2例患者外周血分泌IFNγ的T细胞和急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的关系。结果 经同种异体外周血单个核细胞 (PBMNC)刺激后分泌IFNγ的T细胞水平 (1 12± 0 13) %明显高于对照组 (0 2 3± 0 0 7) % ,P <0 0 1。而分泌IL 4和IL 10的T淋巴细胞则无升高 ,分别为 (0 12± 0 0 3) %、(0 10± 0 0 3) % ,P >0 0 5。 2例患者外周血分泌IFNγ的T细胞水平和aGVHD有一定的相关性。结论 利用CKSA测定同种异体PBMNC刺激后分泌IFNγ的T细胞水平显著升高 。

HLA基因位点全相合和1～2个位点不合无血缘关系异基因骨髓移植的临床疗效比较

目的 比较HLA基因位点全相合与HLA 1～ 2个基因位点不合无血缘关系供者异基因骨髓移植 (URD BMT)的临床疗效。方法 病例包括急性白血病 2 2例 ,慢性髓系白血病慢性期 32例 ,骨髓增生异常综合征 (MDS) 6例。其中HLA基因位点全相合URD BMT 39例 ,1～ 2个位点不合URD BMT 2 1例。预处理方案均为Bu Cy2方案 ,急性移植物抗宿主病 (aGVHD)预防方案均为霉酚酸酯(MMF)、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤 (MTX)联合方案。结果 HLA基因位点全相合组造血重建 38例 ,中位随访时间 11(2 .5～ 5 2 .0 )个月 ,3年无病生存率 (79.2± 7.1) % ,HLA 1～ 2个位点不合组造血重建18例 ,中位随访时间 9(2～ 4 6 )个月 ,3年无病生存率 (45 .8± 15 .5 ) % (P <0 .0 5 )。Ⅱ～Ⅳ度aGVHD发生情况 :HLA基因位点全相合组 10例 (2 6 .3% ) ,HLA 1～ 2个基因位点不合组 6例 (33.3% ) (P >0 0 5 )。结论 URD BMT是治疗白血病和MDS的有效方法 ,HLA基因学配型技术可提高URD BMT的疗效。

急性白血病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及其临床意义

目的探讨急性白血病（ＡＬ）患者血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的两种可溶性受体（ｓＴＮＦＲⅠ和ｓＴＮＦＲⅡ）水平及其与临床状况，化疗效应及ＴＮＦα水平的关系。方法用ＥＬＩＳＡ法检测５７例ＡＬ及３１名正常人血清中ｓＴＮＦＲⅠ、ｓＴＮＦＲⅡ及ＴＮＦα水平。用ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归法分析６种可能影响ＡＬ疗效的参数。结果①３１例初发未治者两种ｓＴＮＦＲｓ浓度均高于正常对照组（ｕ值分别为４５８１和３．２０３，Ｐ分别＜０．００１和＜０．００５）及１５例已获骨髓缓解（ＢＭＲ）者（ｕ值分别为３．０８１和２２０１，Ｐ分别＜０．００５和＜０．０５）。１１例复发难治者血清ｓＴＮＦＲⅠ及ｓＴＮＦＲⅡ水平均高于正常对照组（ｕ值分别为４．０７７和２．５０３，Ｐ分别＜０．００１和＜０．０５），与初发末治者比较，差异不显著（ｕ值为０４５７和０．６３９，Ｐ均＞０．０５），而其ｓＴＮＦＲⅠ水平高于ＢＭＲ组（ｕ值为２．３９２，Ｐ＜０．０５）。ＢＭＲ组与正常对照组的两种ｓＴＮＦＲｓ水平的差异均不显著（ｕ值为１．０６６和０．７８５，Ｐ均＞０．０５）。②１０例初发未治急性淋巴细胞白血病患者血清ｓＴＮＦＲⅠ浓度高于２１例急性非淋巴细胞白血病患者（ｕ值为２?