E-cadherin在白血病细胞的表达及机制

目的:检测E-cadherin在白血病细胞的表达并探讨其机制,最终阐明E-cadherin介导的造血细胞与骨髓基质间的黏附改变在白血病发生中的作用。方法:应用半定量RT-PCR方法检测98例白血病患者和23例正常骨髓移植供者骨髓单个核细胞的E-cadherin相对表达水平,应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各种类型白血病细胞系E-cadherin的表达。用去甲基化试剂5-Aza-CdR处理E-cadherin完全甲基化的白血病细胞系U937,MSP、RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光标记法检测诱导后的E-cadherin表达水平。结果:和正常人相比,98例白血病患者E-cadherin表达降低或缺失,非配对t检验进行统计学分析,P<0.05,差异显著;所有白血病细胞系E-cadherin表达缺失或降低,并且其基因处于完全甲基化状态或以甲基化为主的不完全甲基化状态。在合适的5-Aza-CdR作用浓度诱导下,部分细胞在mRNA和蛋白水平恢复E-cadherin表达。结论:白血病细胞E-cadherin表达降低或缺失,其基因的甲基化是重要机制,去甲基化处理可以使部分细胞重新表达E-cadherin。

E-cadherin表达缺失在白血病细胞行为中的作用

目的:确定上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)表达缺失在白血病细胞行为中的作用,最终阐明E-cadherin介导的骨髓微环境与造血细胞相互作用改变在白血病发生中的作用。方法:细胞黏附实验测定HL-60细胞经5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导E-cadherin表达后细胞黏附能力的改变,MTT法测定细胞增殖能力,细胞迁移实验确定细胞的迁移能力。结果:HL-60细胞经5-Aza-CdR诱导E-cadherin表达后,其对E-cadherin-Fc的黏附能力增加,细胞在E-cadherin-Fc上的增殖能力下降,细胞黏附导致细胞迁移能力下降。结论:白血病细胞中由于E-cadherin表达丧失,引起细胞黏附降低,增殖能力增强,细胞迁移活跃,表明E-cadherin表达缺失与白血病细胞行为的获得有关。

细胞老化相关信号途径

细胞老化是正常细胞在受到各种类型的压力刺激后引发的一种程序性反应,表现为永久性细胞周期停滞。细胞老化可能促进生物衰老,并且与肿瘤发生受抑密切相关。至今已知的细胞老化相关信号途径主要有两条,分别是:p53-p21-pRb途径和p16-pRb途径。肿瘤抑制物p53和pRb分别是这两条途径的核心,二者突变在介导细胞老化逃逸、肿瘤发生中起着关键作用。

pig7基因在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的检测 pig7基因在急性白血病(AL)细胞中的表达水平及其临床意义,在基因甲基化调控方而探讨 pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)方法对138例 AL 患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了 pig7转录本的检测,并在全反式维甲酸(ATRA)作用下观察 NB4细胞分化效应及 pig7基因表达情况。进行限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的 pig7转录剪接体。通过甲基化特异性 PCR(MSP)检测白血病细胞 pig7基因启动子区域是否存在过度甲基化。结果 AL 进展期(包括初治、复发/难治)患者骨髓细胞 pig7 mRNA 相对表达水平与正常骨髓细胞相比明显降低(RQ 中位数分别为0.62和18.30,P<0.01),其中急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)差异无统计学意义,而初治组与复发/难治组比较 pig7mRNA 水平差异有统计学意义,前者明显高于后者(RQ 中位数分别为1.43和0.16,P<0.05)。pig7低表达患者完全缓解率也较低(P<0.05)。NB4细胞经 ATRA 诱导分化后 pig7表达水平由1.61±0.72增至44.75±3.93(P<0.01)。酶切结果提示白血病细胞中仅存在 SIMPLE 剪接体。在 K562、HL-60及 Nalm-6细胞 pig7启动子区域存在过度甲基化,而 U937、NB4和 kasumi-1细胞中该区域非甲基化状态占优势。结论 pig7基因在 AL 的表达下调为白血病发病机制的探讨和疗效预测提供了新的思路。

E—cadherin在白血病细胞膜表面的表达及与β-catenin细胞膜定位的关系

目的研究E-cadherin在白血病细胞膜表面的表达并确定与其下游信号分子β-catenin细胞膜定位的关系。方法通过免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜观察46例白血病患者和17名正常人骨髓细胞膜表面E-cadherin的表达，并分析其与β-catenin在细胞内分布的相关性。结果白血病患者E-cadherin表达水平（中位平均荧光强度16．78）显著低于正常人（26．03）；进一步随机选取14份标本测定细胞膜表面E—cadherin的表达及β—catenin的细胞膜分布并分析二者的相关性，结果显示E—cadherin的表达与β-catenin的细胞膜分布明显相关（r=0．74，P=0．002）；5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza—CdR）诱导白血病细胞中E—cadherin表达后，β—catenin在细胞膜的分布增加，而细胞核内的β—catenin定位减少，初步证实E-cadherin表达后可募集β-catenin到细胞膜。结论白血病细胞中E—cadherin表达降低或缺失可引起β＇-catenin从细胞膜释放并进入细胞核，最终可能会引起β—catenin靶基因的转录。