狐源豚鼠气单胞菌M12的鉴定及致病性分析

为了鉴别豚鼠气单胞菌M12并研究其致病性,本试验利用管家基因gyrB鉴定菌种,然后采用家兔回肠体外器官培养(IVOC)和腿部肌肉注射两种方式探究该病原菌的致病机制,运用光学显微镜、电子显微镜、扫描电镜等多种手段从微观视角去研究M12的菌体结构、致病过程和感染组织的病理变化。结果显示,M12为两端钝圆的革兰氏阴性短杆菌,在电镜下观察发现该菌除鞭毛外细菌大小为(0.6~1.6)μm×(0.6~0.7)μm,鞭毛长度是菌体长度的2~3倍。该菌与GenBank上豚鼠气单胞菌的相似性高达100.0%。IVOC试验在扫描电镜下观察可以看到M12黏附在肠上皮细胞聚集成团,形成生物膜结构,肠上皮细胞破损;病理切片观察发现M12对家兔肠、肝脏、肺脏、肾脏、肌肉组织都有损伤。本试验结果可为豚鼠气单胞菌致病性的深入研究提供参考依据。

狐源豚鼠气单胞菌M12胞外产物特性研究

本研究提取、浓缩狐源豚鼠气单胞菌M12的胞外产物,并测定其蛋白含量、主要成分、对Vero细胞的毒性;通过肌肉注射和肠攀试验,探究其对家兔的致病性。结果表明,该菌浓缩的胞外产物浓度为0.67 g/mL,具有酯酶、蛋白酶、淀粉酶、明胶酶和脲酶活性;可致Vero细胞发生变圆、脱落等病变,且具有肠毒性;豚鼠气单胞菌M12对温度和pH较敏感,最适酶活性温度37℃,最适pH7.0;SDS-PAGE图谱发现36ku、42ku、68ku 3条蛋白条带;用浓缩豚鼠气单胞菌M12的胞外产物注射家兔腿部发现,肌肉组织溶解;回肠注射后肠道内容物含量显著增多。综上所述,豚鼠气单胞菌M12具有多种毒力因子,与该菌的致病性紧密相关。

狐源豚鼠气单胞菌的分离鉴定

2015年辽宁鞍山某狐狸养殖场偶发病原菌感染。病死狐狸后肢肌肉液化,出现溃疡。为查明致死原因进行了实验室诊断,从病灶部位分离到1株优势菌株,命名为M12。综合细菌形态观察、生理特性研究、传统生化试验和VETEK 2全自动生化分析,结果显示,该株菌为豚鼠气单胞菌,革兰阴性短杆状,最适生长温度30℃,最佳p H 7~8,细菌生长曲线比较显示,M12在相同条件下增殖速度明显高于豚鼠气单胞菌模式菌株。通过测定M12的16S r RNA和管家基因gyr B进行了气单胞菌属种内分子水平鉴定,BLAST结果显示,16S r RNA和gyr B基因与Gen Bank上的豚鼠气单胞菌同源性达到100%。将16S r RNA测序结果提交到Gen Bank,获得登录号KX170836。M12含有细胞毒性肠毒素（cytotoxic enterotoxin,act）和热敏感细胞肠毒素（heat-Labie cytotonic enterotoxin,alt）两种毒力基因。小鼠感染试验得到M12的LD_（50）为8×10~8,具有很强的致病性。药敏试验结果显示,该菌对大部分的抗生素具有很强的敏感性,从而为该菌的防治提供依据。