荒漠甲虫小胸鳖甲胞外信号调节激酶ERK基因的克隆与低温表达谱分析

昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路在荒漠甲虫小胸鳖甲耐寒机制中的作用,从小胸鳖甲4℃转录组数据中筛选出胞外信号调节激酶(ERK)基因的全长c DNA,命名为Mp ERK。生物信息学分析表明,Mp ERK全长1125 bp,编码374个氨基酸。Mp ERK的理论分子量是43 k Da,含有ERK激酶所共有的磷酸化位点,属于MAPK超家族,与其它物种ERK的一致性达80%以上。实时定量PCR检测Mp ERK基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的7.5倍,5 h时达到高峰,为对照的15倍。-4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的8.4倍,5 h时达到高峰,为对照的13.75倍。研究结果表明Mp ERK基因是冷响应的,可能在小胸鳖甲应对低温时发挥信号转导作用。

β-actin基因在荒漠昆虫光滑鳖甲和小胸鳖甲中表达的稳定性研究

为检测生活习性截然相反的两种荒漠昆虫光滑鳖甲和小胸鳖甲的β-actin基因在不同温度下的表达是否稳定,对不同温度处理和不同季节采集的昆虫提取总RNA反转录合成cDNA后,进行荧光实时定量PCR检测。以Ct值作为β-actin基因表达水平的测定值。通过方差分析显示:光滑鳖甲的β-actin基因在不同季节无显著差异,而小胸鳖甲则表现出β-actin基因表达的季节性差异;在不同温度处理条件下,光滑鳖甲β-actin基因表达比小胸鳖甲的要稳定。研究认为β-actin可作为研究光滑鳖甲不同温度下基因表达的内参基因,而β-actin则不适合用做研究小胸鳖甲在不同温度下基因表达的内参基因。

荒漠昆虫小胸鳖甲Ras GTP酶激活蛋白基因MpRasGAP的克隆及低温表达分析

【目的】丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)级联是细胞的重要信息传递系统之一,Ras GTP酶激活蛋白(Ras GTPase-activating protein,Ras GAP)基因Ras GAP和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)基因JNK分别是MAPK信号转导途径的上、下游基因。本研究旨在确定荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis Ras GAP及JNK基因对低温的响应情况。【方法】从荒漠甲虫小胸鳖甲中克隆获得Ras GAP基因的c DNA序列,利用生物信息学分析软件分析其氨基酸序列并构建进化树,利用实时荧光定量PCR检测低温胁迫条件下Ras GAP和JNK基因的表达情况。【结果】小胸鳖甲Ras GAP c DNA的开放阅读框2 523 bp,命名为MpRas GAP(Gen Bank登录号:KM677930),编码840个氨基酸,分子量96.594 k Da,编码蛋白MpRas GAP属于Ras GAP超家族。MpRas GAP与赤拟谷盗Tribolium castaneum Ras GAP的氨基酸序列一致性达89%。小胸鳖甲在4℃和-4℃低温胁迫1 h后,MpRas GAP的mRNA水平都显著高于室温对照(25℃)。小胸鳖甲在4℃处理3 h或-4℃处理1 h后,Mp JNK的mRNA水平也显著升高。【结论】本研究结果表明小胸鳖甲MpRas GAP和Mp JNK的mRNA水平受低温诱导。研究结果有助于深入研究荒漠昆虫在低温下MAPK信号转导途径的作用机制。

标准物质在环境监测工作中的应用与实践

可靠的分析测量结果对于各个行业的正确决策都是至关重要的,环境标准物质不仅仅是环境监测工作中传递准确度的基准物质,还在实验室的认证认可、质控考核、方法验证、技术仲裁等工作中广泛应用。本文围绕标准物质在环境监测工作中的应用和实践展开讨论,以期对环境保护工作提供一定帮助。

达芬奇机器人手术器械清洗质量控制的研究进展

随着外科手术技术的不断发展,达芬奇机器人手术量逐年增多,机器人手术器械被广泛应用于外科领域。此类器械因其结构特殊,污染后清洗难度大,给消毒供应中心护士的清洗技术提出了挑战。目前达芬奇机器人手术器械的清洗质量管理仍存在预处理不到位、手工清洗流程不规范、清洗质量评价方法不统一等问题,给患者医疗安全带来了隐患。科学、有效的清洗质量控制对预防医院感染和保障患者生命安全至关重要。该文通过查阅、筛选、整理和归纳国内外达芬奇机器人手术器械清洗质量管理的相关文献,并结合消毒供应中心临床实际工作对其清洗现状、质量控制进行综述,旨在为今后指南的制订和消毒供应中心人员的临床实践提供理论参考。

近58 a巴音郭楞蒙古自治州沙尘天气气候特征分析

利用巴音郭楞蒙古自治州(以下简称巴州)境内各气象站1961—2019年统计的逐日天气气象资料,分析巴州沙尘天气的地理分布、时空分布及年际变化。结果表明:沙尘天气的分布受地形地貌影响较大,在巴州南、北部较高海拔山区基本无沙尘天气,巴州南部平原地区若羌县、且末县沙尘天气最多;巴州平原地区全年都有沙尘天气出现,其中,春季(3—5月)沙尘天气最多,冬季沙尘最少;自1961年以来库尔勒市沙尘、浮尘、扬沙、沙尘暴天气表现为减少的趋势。但2010年以来,浮尘天气日数有明显反弹,产生这种反弹现象的主要原因是近几年气候变暖,气温冷暖变幅加大,极端灾害性天气事件频发等。

荒漠甲虫小胸鳖甲抗冻蛋白的酵母表达及应用

昆虫抗冻蛋白(Antifreeze protein,AFP)的抗冻活性很高,可应用于生物组织和细胞的低温保存。为了在酵母中表达荒漠甲虫小胸鳖甲Microdera punctipennis抗冻蛋白Mp AFP698,并确定其在低温下的保护作用,本文通过构建真核表达载体p PIC9K-Mpafp698,转化巴斯德毕赤酵母GS115,诱导表达小胸鳖甲抗冻蛋白Mp AFP698。利用免疫印迹(Western blotting)分析Mp AFP698蛋白的特异性表达,结果显示Mpafp698基因可整合到酵母基因组中并分泌表达,且酵母自身蛋白很少分泌表达。检测抗冻蛋白的低温保护作用,结果发现,小胸鳖甲抗冻蛋白可显著改善冷冻小鼠肝脏等器官的细胞形态,降低血细胞在4℃的溶血率,提高SF9细胞冻融后的存活率。本研究表明,小胸鳖甲AFP可以在毕赤酵母中分泌表达,便于纯化,有良好的低温保护效果。