重组GFP-VEGF6a融合肽的构建表达及其抗肿瘤活性

为了探讨血管内皮生长因子6a(VEGF6a)的抗肿瘤及其抑制外周血管生成活性,采用两次加端PCR技术,将VEGF6a片段的基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因通过GGGS柔性片段融合,连接至pET28a载体,构建GFP-VEGF6a(GFP6a)融合肽E.coli表达菌。GFP6a融合肽通过乳糖诱导表达和肝素亲和树脂精制得到。建立皮内和皮下移植型肝癌ICR小鼠模型,验证了VEGF6a抑制肿瘤外周血管及抗肿瘤活性。结果表明,与阴性对照GFP比较,GFP6a 200 mg/kg组和20 mg/kg组均明显抑制肿瘤外周血管生成,抑制H22肝癌细胞体内生长,瘤重抑制率分别为70.9%和56.1%(P<0.01)。本研究显示,VEGF6a具有潜在的抗肿瘤活性。

基因工程方法用于抗生素增产的研究进展

本文结合国内外文献,综述了应用基因工程方法获得抗生素高产菌株,增加抗生素产量的理论方法和研究动向,总结了该领域的研究成果和研究进展。分别从广义基因工程范畴下的4种技术——改造代谢途径、改造抗生素生物合成基因簇、核糖体改造技术和原生质体融合技术具体阐述,并展望基因工程方法获得抗生素高产菌株的前景。

重构新型血管内皮生长因子在毕赤酵母中的表达、纯化与功能鉴定

血管内皮细胞生长因子为内皮细胞特异的刺激因子,在缺血治疗中具有应用前景.本文通过PCR的方法将VEGF165纤溶酶酶切位点突变并将肝素结合域融合到VEGF165的C末端,且将其进行了酵母表达,并纯化了酵母表达产物,对它的生物活性进行了初步鉴定.结果表明,改构的VEGF可形成蛋白二聚体,且仍保留体外刺激血管生成的能力.VEGF的重构成功与表达产物的获得,为进一步研究其功能奠定了基础.

数理统计在胰岛素类似物生物活性测定中的应用

创新实验大学生利用数理统计学的相关知识,按照《中国药典》2010年版附录Ⅻ中的要求,测定胰岛素类似物的生物活性。通过交叉设计的方差分析及假设检验,评判胰岛素标准品与胰岛素类似物供试品引起小鼠血糖下降的作用,对实验中同批小鼠的给药时间间隔、胰岛素类似物母液储备时间进行探索,并计算胰岛素类似物的效价。创新实验大学生通过此次胰岛素类似物生物活性测定实验增强实验技能,合理利用数理统计解决了实际问题,并培养了严谨求实的科学态度。

基于CRISPR/Cas9构建小鼠UOX基因敲除模型

目的通过CRISPR/Cas9获得UOX基因敲除的小鼠纯合品系,为建立高尿酸血小鼠动物模型奠定基础。方法根据小鼠UOX基因第三外显子前后两个位点设计双sgRNA,通过PCR、体外转录和纯化获得sgRNA和Cas9 mRNA。将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射进小鼠原核胚后,体外培养至二细胞胚阶段,进行胚胎移植至代孕母鼠。F0代小鼠出生后,提取其DNA进行电泳分析和测序分析。F0代交配繁殖至F2代获得UOX缺失的小鼠纯合品系。结果显微注射sgRNA和Cas mRNA至原核胚,成功获得50枚囊胚。移植后生育17只幼鼠。其中,有8只小鼠UOX基因缺失突变,突变率为47.06%。成功构建了UOX缺失的小鼠纯合品系。结论利用CRISPR/Cas9,成功获得UOX缺失的小鼠胚胎和纯合品系,为CRISPR/Cas9获得高尿酸血的小鼠动物模型奠定基础。

VEGF183(132-158)肽段作为蛋白缓释药物载体的细胞外基质结合研究

人血管内皮生长因子VEGF183(132-158)肽段含有细胞外基质结合序列与纤溶酶、基质金属蛋白酶以及uPA酶裂解位点,研究该肽段作为一种蛋白药物的缓释载体,在体内既可和细胞外基质结合,又可在体内的相应酶作用下,缓慢释放。该研究以绿色荧光蛋白GFP为指示分子,进一步采用加端PCR方法将VEGF183(132-158)肽段连到GFP的C端,原核表达并纯化该融合蛋白,通过与琼脂糖肝素柱结合实验与冷冻切片的荧光显微镜观察,发现该肽段赋予了GFP蛋白结合琼脂糖肝素柱与细胞外基质的功能,GFP融合蛋白的获得为下一步的体内释放研究打下了基础。