酒蒸桑寄生的炮制工艺优化及质量表征研究

目的 优化桑寄生酒蒸炮制工艺,并对其质量进行表征。方法 以扁蓄苷、槲皮苷、槲皮素含量和外观性状评分为评价指标,采用层次分析法-熵权法确定各指标权重,并以各指标综合评分为响应值,采用Box-Behnken响应面法考察料液比(g/mL)、闷润时间、蒸制时间对酒蒸桑寄生炮制工艺的影响,优化最佳炮制工艺,并进行验证。将15批不同产地桑寄生饮片按最佳炮制工艺制备酒蒸桑寄生,并对其质量进行表征。结果 酒蒸桑寄生最佳炮制工艺为取桑寄生饮片100 g,加入黄酒20 mL密封闷润2 h,常压蒸制1 h,取出,于50℃条件下干燥即得。以最佳炮制工艺制得的酒蒸桑寄生表面呈红褐色或棕褐色,其粉末呈深棕色,质地坚硬或脆,易折断,略有酒香气,味涩;茎横切面显微鉴别和薄层色谱鉴别结果同生桑寄生;水分、总灰分、酸不溶性灰分含量分别为3.92%~8.75%、2.27%~5.08%、0.19%~0.82%,水溶性浸出物含量为11.28%~18.56%,醇溶性浸出物含量为3.36%~8.58%,扁蓄苷、槲皮苷和槲皮素的含量分别为0.22~1.64、0.26~2.45、0.01~0.38 mg/g。结论 本研究成功优化了酒蒸桑寄生的炮制工艺,并对其质量进行了表征,可为该饮片的规范化炮制及质量标准建立提供参考。

基于网络药理学和药效学探讨扶阳解表颗粒抗病毒性肺炎的作用机制

目的:本研究旨在探究扶阳解表颗粒(FYJBKL)对病毒性感染肺炎的治疗作用机制。方法:利用网络药理学所建立的网络模式,研究FYJBKL病毒性肺炎的目标表达点,从而确定治疗病毒性肺炎的主要靶点和重要的信号传递途径。其次,将药品中的主要组成部分和主要靶点进行对接;然后,建立发热、发汗和炎症大鼠模型以探索FYJBKL的解热、发汗和抗炎作用机制;最后,采用ELISA法分析大鼠的血液样本IL‐17、IL‐1β、TNF‐α和IL‐6的含量;HE染色观察肺组织形态的变化。结果:173个节点、456条边,其中发挥成分有槲皮素、木犀草素、山奈酚等,主要机制靶点有IL‐17、IL‐1β、TNF‐α、IL‐6等。KEGG富集分析发现了30条信号路径(P<0.05),涵盖了白细胞介素17信号路径、人类巨细胞病毒感染路径、卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感/染路径等。经过分子对接的研究,发现活性物质和可能的关键目标的联系效率良好。FYJBKL的高、中浓度组明显减少了炎症模式下大鼠血液中IL‐17、IL‐1β、TNF‐α、IL‐6的表达(P<0.05)。显著减轻蛋清所致的大鼠足肿胀,明显抑制酵母所致大鼠升高的体温;与正常组相比,FYJBKL使大鼠足跖部汗点数显著增高(P<0.05);HE染色显示FYJBKL均不同程度地改善肺组织纤维化及炎症渗出现象。结论:推测扶阳解表颗粒在抗病毒、抗免疫、抗炎症的相关信号通道以及生物细胞过程中的作用,很可能是由槲皮素、木犀草素、山奈酚等活性成分与其共享靶点的结合所引起的;扶阳解表颗粒可以改善病毒性肺炎引起的相关症状,其机制可能与炎症调节的多个靶点TNF、IL‐17以及IL‐6等相关通道的活性有关。

温阳解郁颗粒对抑郁模型大鼠行为学和血清中单胺类神经递质水平的影响

目的:研究温阳解郁颗粒的抗抑郁作用及可能机制。方法:将60只行为、体质量接近的大鼠随机分为空白对照组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、氟西汀阳性对照组(2.10 mg/kg)和温阳解郁颗粒低、中、高剂量组(1.89、3.78、7.56 g/kg),每组10只;灌胃给药,每天1次,连续28 d。除空白对照组外,其余各组大鼠均在给药同时采用慢性不可预见性温和刺激配合孤养法复制抑郁模型。在给药第0、7、14、21、28天,测定大鼠体质量变化,通过糖水偏好实验和旷场实验测定大鼠的糖水偏好率和4 min内行径总路程、四角路程;末次给药1 h后,通过强迫游泳实验测定大鼠4 min内挣扎状态时间和漂浮状态时间,并采用高效液相色谱法测定大鼠血清中5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)含量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠体质量(给药第7、14、21、28天)、糖水偏好率(给药第14、21、28天)显著降低(P<0.05或P<0.01),4 min内行径总路程、四角路程(给药第21、28天)显著减少,4 min内挣扎状态时间显著缩短、漂浮状态时间显著延长(P<0.01),血清中5-HT、DA含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,温阳解郁颗粒各剂量组大鼠体质量(低剂量组在给药第28天,中、高剂量组在给药第21、28天)和糖水偏好率(给药第28天)显著升高(P<0.05或P<0.01),4 min内行径总路程、四角路程(给药第21、28天)显著增加(P<0.01),4 min内挣扎状态的时间显著延长、漂浮状态时间显著缩短(P<0.01),血清中5-HT、DA含量显著升高(P<0.05或P<0.01)。与氟西汀阳性对照组比较,温阳解郁颗粒各剂量组大鼠上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:温阳解郁颗粒对抑郁模型大鼠具有明显的抗抑郁作用,且其作用与氟西汀相当;其机制可能与降低血清中5-HT、DA含量有关。

温阳解郁颗粒薄层鉴别方法学研究

目的:制定温阳解郁颗粒的薄层色谱鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对处方中桂枝、附子、甘草药味进行定性鉴别,并对其进行方法学验证。结果:桂枝、附子、甘草的薄层色谱方法,具有斑点清晰、分离度好、阴性无干扰的特点。结论:本法操作简便、结果可靠、重复性好,可作为桂枝、甘草、附子的薄层鉴别方法,并用于温阳解郁颗粒的质量控制。

HPLC-ELSD测定归芪洋参丸中人参皂苷Rb_1的含量

目的:建立一种HPLC-ELSD测定复方制剂归芪洋参丸中人参皂苷Rb1含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定。色谱条件:Diamonsil C1(84.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水(30∶70);流速:1.0 mL/min。ELSD参数:漂移管温度110℃,载气流量2.1 L/min。结果:人参皂苷Rb1在1.832μg^18.32μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.70%,RSD=1.90%(n=6)。结论:所建立的方法简便可行,专属性强,重复性好,可用于归芪洋参丸的质量控制。

浮小麦与小麦的止汗作用及5-二十一烷基间苯二酚等化合物含量比较研究

目的:研究浮小麦与小麦的止汗作用以及其5-二十一烷基间苯二酚等化合物含量的差异。方法:以大鼠体重差值、大鼠足趾部位汗点数、大鼠足趾部位肉垫皮肤汗腺的空泡发生率为指标,观察浮小麦与小麦止汗作用的差异。采用HPLC法测定浮小麦与小麦中5-二十一烷基间苯二酚等化合物的含量,比较其含量差异。结果:浮小麦组大鼠体重减少值不显著,汗点数增加不显著,光镜下足趾汗腺导管扩张不明显,而小麦组大鼠体重显著减少,汗点数增多,光镜下大鼠足趾汗腺细胞发生明显空泡样变化,汗腺导管扩张明显。HPLC法测得浮小麦与小麦所含5-二十一烷基间苯二酚等化合物的含量有一定的差别。结论:浮小麦有明显的止汗作用,小麦止汗作用不明显。

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制。方法:取人结肠癌HT-29细胞,随机分为空白组和低、中、高剂量伪士的宁组(125、250、500μmol/L),加入不含药培养基或含相应浓度伪士的宁的培养基培养48 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况和线粒体跨膜电位;采用Western blotting法检测细胞中P53、Caspase-3、Caspase-9、兔源DNA修复酶(c-PARP)、Bcl-2的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,低、中、高剂量伪士的宁组细胞凋亡率显著升高,线粒体跨膜电位均显著降低(P<0.01),且均呈现浓度依赖趋势。中、高剂量伪士的宁组细胞中P53、Caspase-3、Caspase-9、c-PARP蛋白表达水平较空白组均显著升高,低、中、高剂量伪士的宁组细胞中Bcl-2蛋白表达水平则显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:伪士的宁可能通过上调P53蛋白、下调Bcl-2蛋白的表达,改变线粒体膜电位,然后激活Caspase-3、c-PARP、Caspase-9的表达,进而激活内源性线粒体通路,发挥促进HT-29细胞凋亡的作用。

逍遥蒌贝胶囊的质量标准研究

目的建立逍遥蒌贝胶囊的质量控制方法。方法采用薄层色谱法(TLC)对处方中白术、当归、浙贝母和柴胡进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定处方中芍药苷的含量,色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(30∶70,v/v);流速:1.00 mL.min-1;检测波长:232 nm;进样量10μL。结果薄层鉴别的色谱斑点清晰,特征斑点对应性强,阴性对照无干扰;芍药苷进样量在65～1 300 ng范围内与峰面积具有良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为99.43%(n=6),RSD为1.97%。结论所建立的方法简便、准确、重现性好,可作为逍遥蒌贝胶囊的质量控制标准。

温阳解郁汤对肾阳虚型抑郁大鼠PI3K/Akt信号通路及神经递质的影响

目的探讨温阳解郁汤对肾阳虚抑郁症大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及神经递质的影响。方法将雄性SD大鼠分为空白组、模型组、氟西汀组(西药阳性对照,4.17 mg/kg)、逍遥散组(中药阳性对照,1.88 g/kg)和温阳解郁汤低、中、高剂量组(1.25、2.50、5.00 g/kg),每组15只。除空白组外,其余各组均皮下注射皮质酮20 mg/kg以复制肾阳虚型抑郁大鼠模型,并同时灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察大鼠的一般情况,检测其糖水偏好率、强迫游泳静止不动时间,计算其脏器指数,检测其血清中神经递质水平/含量,检测其海马组织中PI3K/Akt通路相关蛋白的表达量和树突棘数量。结果与空白组比较,模型组大鼠出现了掉毛、畏冷扎堆、蜷缩等症状,糖水偏好率,肾上腺、胸腺、脾指数,血清环磷酸腺苷(cAMP)、脑源性神经营养因子、γ氨基丁酸水平,cAMP与环磷酸鸟苷比值,去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺含量,PI3K、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达量,以及海马组织中树突棘数量均显著降低(P<0.01);静止不动时间、谷氨酸水平、糖原合成酶激酶3β蛋白的表达量均显著延长或升高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组大鼠的抑郁症状有所改善,上述指标大部分逆转(P<0.05或P<0.01)。结论温阳解郁汤可改善大鼠的抑郁样行为和肾阳虚状态,调节神经递质的分泌,并可激活PI3K/Akt信号通路,从而起到保护海马神经元的作用。

电子商务税收法律政策初探

随着网络贸易的飞速发展 ,相关税收法律问题已经摆在我们面前。目前 ,电子商务是否具有可税性 ,各国政府对此持有不同态度。美国正在全力推行电子商务免税主张 ,欧盟各国却倾向于征税 ,我国政府要结合自身特点 ,慎重制定电子商务税收法律政策。

风湿宁胶囊对RA兔关节滑膜组织MMP-3、MMP-9表达的影响

目的观察风湿宁胶囊对类风湿关节炎滑膜组织基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨风湿宁胶囊治疗类风湿关节炎的机制。方法将120只雄性新西兰白兔随机分为正常组、模型组、风湿宁低剂量组、风湿宁中剂量组、风湿宁高剂量组、甲氨蝶呤组,每组20只。除正常组外,其余各组建立类风湿关节炎风寒湿痹病证结合模型,造模成功以后,风湿宁低、中、高剂量组分别给予0.33 g/kg、0.66 g/kg、1.32 g/kg的风湿宁胶囊水溶液,甲氨蝶呤组给予1.0 mg/kg的甲氨蝶呤片水溶液,正常对照组灌胃生理盐水,各组按4 ml/kg体重灌胃,1次/d,连续7 d。应用免疫组织化学法(IHC)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测各组兔关节滑膜组织MMP-3、MMP-9蛋白和mRNA的相对表达量。结果与正常组比较,模型组MMP-3、MMP-9蛋白与mRNA表达明显增高,有显著性差异(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,风湿宁高剂量与风湿宁中剂量给药后可明显降低RA兔滑膜组织MMP-3、MMP-9蛋白与mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),作用与阳性对照药物甲氨蝶呤无明显差异(P>0.05)。结论风湿宁胶囊能够降低关节滑膜组织中与关节软骨基质降解和滑膜血管翳的生成相关的重要蛋白酶MMP-3、MMP-9蛋白与mRNA的表达,这可能是其治疗类风湿关节炎的重要机制。

黄芪普洱饮料制备工艺研究

目的:确定黄芪普洱饮料的制备工艺。方法:以黄芪甲苷提取率为指标,单因素试验和正交试验优化黄芪药材提取工艺;以普洱茶膏得率为指标,通过考察浸提温度、浸提时间、浸提次数和茶水比优化普洱茶提取工艺;以感官评分为指标,考察黄芪和普洱茶水提液比例、冰糖含量、柠檬酸含量对黄芪普洱饮料的影响,并选择合适的稳定剂。结果:黄芪药材最佳提取工艺为加12倍水,煎煮提取3次,每次1 h,合并水煎液,减压浓缩干燥至黄芪水提液料水比为1∶20;普洱茶的最佳提取工艺为浸提温度65℃,加入10倍量水,提取3次,每次30 min,合并水提液,减压浓缩至普洱茶水比为1∶10;黄芪普洱饮料的最佳制备工艺为黄芪水提液含量10%、普洱茶水提液含量25%、冰糖含量8%、柠檬酸含量0.15%、CMC-Na含量0.10%和海藻酸钠含量0.10%。结论:优选的制备工艺合理可行,口味佳,可作为黄芪普洱饮料的制备工艺。

丝瓜子药材的质量标准研究

目的建立了丝瓜子药材的质量标准。方法生药学研究,水分测定法,灰分测定法,浸出物测定法,薄层色谱法及HPLC色谱法。结果对丝瓜子药材的性状、显微特征进行了描述;对10批丝瓜子药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物进行了测定;同时进行了薄层鉴别和HPLC法的定量研究。结论通过研究制定了丝瓜子药材的质量控制标准。

东风痤康凝胶的质量标准研究

目的建立东风痤康凝胶的质量控制研究。方法采用薄层色谱法(TLC)对处方中夏枯草、黄芩、黄连和羌活进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定处方中熊果酸的含量,色谱柱:Phenomenex Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-2%磷酸二氢钠溶液(67:33,v/v);检测波长:210 nm;流速:1.0 m L·min-1;进样量:10μL。结果薄层鉴别的色谱斑点清晰,特征斑点对应性强,阴性对照物干扰;熊果酸进样量在0.6~4.8μg范围内与峰面积具有良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为100.37%(n=6),RSD=1.76。结论所建立的方法简便、准确、重现性好,可作为东风痤康凝胶的质量控制标准。

“词缺现象”的教学策略探析

在日常的英语教学活动中,教师对学生语言知识的学习与语言知识的输出十分重视,但是学生在实际交流过程中还是会出现＂词缺现象＂。因此,教师应结合具体的教学实例,从英语词汇量的提升、课堂对话效率的提升、课堂情境实效的提高三个方面,共同探寻＂词缺现象＂的教学策略。

玉屏风散配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷含量的比较

目的比较玉屏风散配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷的含量。方法采用高效液相色谱-蒸发光检测法测定。色谱条件:Waters C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水(32:68);流速:1.0 m L/min。ELSD参数:漂移管温度110℃,载气流量2.1L/min。结果配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷的含量分别为2.12%,2.00%。结论玉屏风散传统汤剂与配方颗粒的含量相当。

酒五味子的指纹图谱建立及化学模式识别分析

目的:建立酒五味子的指纹图谱,并进行聚类分析和主成分分析。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法。以Diamonsil C18(2)为色谱柱,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为250 nm,流速为1 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL。以五味子醇甲为参照峰,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》绘制15批酒五味子饮片样品的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,确定共有峰。采用SPSS 22.0软件进行聚类分析、主成分分析。结果:15批酒五味子饮片样品共有20个共有峰,相似度为0.983~0.999;共指认出其中8个共有峰,分别为5-羟甲基糠醛、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素。聚类分析结果显示,15批酒五味子饮片可聚为4类,其中S1~S4、S14聚为一类,S9~S11聚为一类,S5、S7~S8、S12~S13聚为一类,S6、S15聚为一类。主成分分析结果显示,前4个主成分的累计方差贡献率为85.381%,分类结果与聚类分析结果基本一致。与生五味子比较,酒制后的五味子中新增了5-羟甲基糠醛,且含量较高,而其余色谱峰未见明显差异。结论:所建HPLC指纹图谱简便、易行,结合聚类分析和主成分分析可用于酒五味子饮片的质量控制。

助阳开郁方对抑郁症大鼠行为及海马神经可塑性的影响

目的:研究助阳开郁方对慢性应激抑郁大鼠抑郁行为和海马神经可塑性的影响。方法:将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀(3.33 mg/kg)阳性对照组及助阳开郁方高(46.8 g/kg)、中(23.4 g/kg)、低(11.7 g/kg)剂量组,每组12只。除正常对照组外其余各组在灌胃同时接受慢性不可预知温和刺激并孤养28 d。采用强迫游泳实验、悬尾实验、旷场实验对各组大鼠进行行为学评价;各组大鼠脑组织HE染色,光镜下观察海马组织CA3区和齿状回区神经元形态变化,免疫印迹法检测大鼠海马组织突触素(SYP)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达。结果:与模型组比较,助阳开郁方中、高剂量组大鼠游泳实验和悬尾实验的不动时间显著缩短,助阳开郁方高剂量组大鼠在旷场实验中穿格次数显著增多(P<0.01),助阳开郁方中、高剂量组大鼠海马组织形态学明显改善,海马组织突触素和脑源性神经营养因子的表达均显著上调(P<0.05或P<0.01)。结论:助阳开郁方能改善慢性应激抑郁大鼠的抑郁症状,保护海马神经元,改善海马神经可塑性从而发挥抗抑郁效应。

基于网络药理学及实验验证探讨复方茴芹颗粒治疗前列腺增生的作用机制

目的利用网络药理学、分子对接技术结合实验验证探讨复方茴芹颗粒治疗前列腺增生的作用机制。方法利用网络药理学建立复杂网络模型,观察复方茴芹颗粒对前列腺增生靶标表达的影响,筛选出治疗前列腺增生的关键靶点以及关键信号传导通路,并对药物核心成分与关键靶点进行分子对接预测。皮下注射丙酸睾酮注射液诱导建立去势大鼠前列腺增生模型,计算前列腺指数,HE染色观察前列腺组织形态的变化,采用ELISA法检测大鼠血清中睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)水平,Western blot法检测验证关键蛋白表达。结果共筛选出复方茴芹颗粒活性成分67个,靶点548个,前列腺增生靶点3733个,映射后得到346个药物治疗前列腺增生的潜在靶点,208条GO富集条目,156条KEGG通路,包括PI3K-Akt、HIF-1、MAPK、癌症等信号通路。分子对接显示,Akt1蛋白受体与异鼠李素、槲皮素等配体亲和力良好,EGFR蛋白受体与芹菜素-7-O-β-D葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷等亲和力良好。与空白组比较,模型组大鼠前列腺湿质量及前列腺指数,血清T、DHT水平,前列腺组织PI3K、Akt、Bcl-2、VEGFA、ERK1/2、EGFR关键蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,复方茴芹颗粒剂量组能改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论复方茴芹颗粒通过多靶点、多通路参与抑制前列腺细胞的增殖,促进前列腺细胞的凋亡来达到治疗前列腺增生的目的。

复方茴芹颗粒的指纹图谱建立、化学模式识别及多成分含量测定

目的建立复方茴芹颗粒的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱并结合化学模式识别技术进行分析,同时测定该颗粒剂中8种有效成分的含量。方法采用HPLC法,以葛根素的色谱峰为参照峰,绘制10批复方茴芹颗粒样品的指纹图谱;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价,并指认共有峰;采用SPSS 22.0、SIMCA 14.0软件进行聚类分析和主成分分析。采用HPLC法测定样品中8种有效成分绿原酸、葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异绿原酸A、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异绿原酸C的含量。结果10批复方茴芹颗粒的指纹图谱中共有26个共有峰,相似度均大于0.900;共指认出11个共有峰,分别为没食子酸、新绿原酸、绿原酸、葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、木犀草素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、异绿原酸A、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异绿原酸C及大豆苷元。聚类分析和主成分分析结果显示,10批复方茴芹颗粒可聚为4类,其中S2、S3、S6为一类,S4、S8、S10为一类,S7为一类,S1、S5、S9为一类。10批复方茴芹颗粒中8种有效成分的平均含量分别为1.30、17.42、3.51、3.57、0.75、0.41、0.31、0.32 mg/g。结论本研究成功建立了复方茴芹颗粒的指纹图谱及多成分含量测定方法,可为该颗粒剂的质量控制提供依据。