大鼠子宫异位症模型建立方法的比较

目的将自体子宫内膜组织同时种植于大鼠体内三个不同部位,建立的子宫内膜异位症模型进行比较评估。方法取30只雌性未交配性成熟大鼠,将自体子宫内膜组织种植于左侧腹壁、子宫卵巢韧带和右侧皮下筋膜层与腹壁肌层间,术后第21天取出异位组织,进行组织形态学观察。结果异位内膜可以在大鼠不同部位同时生长,体积和重量均无显著性差异,其种植成功率差异不显著(93%～100%),且种植物组织形态相似。结论此手术方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型异位内膜病理改变与EMs患者类似,但皮下种植更简单,更直观,可减小损伤,便于反复实验及连续性观察研究。

人胎盘造血干细胞对非致死辐射小鼠造血功能的重建研究

目的:观察人胎盘造血干细胞对非致死辐射小鼠移植模型造血功能重建的作用。方法:采用机械处理联合酶解法提取人胎盘来源造血干细胞(PHSC),利用流式细胞术和细胞集落形成实验进行胎盘HSC鉴定。选取25只NOG小鼠随机分为空白对照组(n=5),辐照组(n=4),低剂量PHSC组(n=8)和高剂量PHSC组(n=8)。在无菌条件下对辐射组、低剂量PHSC组和高剂量PHSC组小鼠分别进行X-射线照射,每只1 Gy(100cGy/min)。给予低剂量PHSC组和高剂量PHSC组小鼠尾静脉注射0.1 ml人胎盘HSC,数量分别为2×10^6/ml和1×10^7/ml,空白对照组和辐射组小鼠给予等体积生理盐水注射。每周对小鼠进行称重并计算相对体重变化,分别于第4、8和12周抽取各组小鼠外周血进行人CD45+和髓系、淋巴系血细胞流式细胞术检测。结果:流式细胞术检测和细胞集落培养鉴定显示,人胎盘HSC占人胎盘单个核细胞的比例达到0.75%以上且具有造血干细胞的分化能力。与空白对照组小鼠比较,辐照组、低剂量PHSC组和高剂量PHSC组小鼠相对体重增长幅度显著下降;与辐照组小鼠比较,低剂量PHSC组和高剂量PHSC组小鼠相对体重增长幅度显著升高。流式细胞术结果显示,在移植后12周,高剂量PHSC组小鼠中人血液免疫系统开始长期重建,而低剂量PHSC小鼠人CD45+细胞的比例非常低。结论:将人胎盘HSC移植入非致死辐射小鼠体内,能够获得人血细胞短期重建和长期重建,证明人胎盘HSC能够在辐射小鼠体内多向分化并重建造血功能。

EGFR/HER2联合多肽表位疫苗的构建及体液免疫学分析

构建以乙肝病毒核心抗原(HBcAg)为载体的带有1个EGFR和2个HER2的模拟B细胞表位多肽的融合表达质粒pET28a/HBcAg-△n,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫BALB/c小鼠获得抗目的蛋白的抗体。采用PCR法将3个模拟表位插入HBc序列的第78～79位,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建重组表达质粒,用大肠杆菌BL21(DE3)作宿主菌表达出融合蛋白HBHE,纯化后免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫应答。测序结果表明,重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体。以HBcAg为载体的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与3个B表位结合的抗体,为进一步研究HER家族成员联合多肽表位疫苗的广谱抗肿瘤作用奠定了基础。