基于便秘模型小鼠相关差异蛋白表达探讨中医“肺与大肠相表里”理论

【目的】从"肠病及肺"角度,研究便秘模型小鼠肺组织差异表达蛋白质,寻找肺与大肠的病理联系,为阐明中医"肺与大肠相表里"理论实质提供物质基础。【方法】运用蛋白质组学技术,对正常对照组和便秘模型组小鼠肺组织总蛋白质进行双向凝胶电泳(2-DE),选择差异蛋白质斑点,进行基质辅助激光解吸电离—串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析和生物信息学分析。【结果】筛选出3个差异表达蛋白质点,其中细胞色素c氧化酶亚基5A(COX5A)、过氧化物氧化还原酶2(Prdx-2)蛋白在便秘组表达下调,肌球蛋白调节轻链2(MLC-2)蛋白表达上调。【结论】便秘小鼠"肠病及肺"的机制可能与肺细胞发生氧化应激损伤有关。

肿瘤的中医姑息治疗

1中医姑息治疗的涵义 中医姑息疗法的定义为：以中医整体辨证治疗为主的晚期肿瘤的综合对症治疗。在中医辨证论治思想的指导下，运用中医中药，采用多种治疗方法以达到改善患者的全身症状，减轻患者的痛苦，提高其生活质量为目的。WHO为晚期癌症患者姑息治疗所提出的定义是：“对所患疾病已经治疗无效患者的积极的、全面的医疗照顾。对疼痛、其它症状以及心理、社会和精神的问题控制是首要的。姑息治疗的目的是使患者和家属获得最佳生存质量。姑息治疗的很多方面也可与抗癌治疗一起应用于疾病过程的早期”。并进一步解释：“姑息治疗肯定生命并把死亡视为一正常过程；既不加速也不延缓死亡；提供疼痛和其它痛苦症状的缓解；结合心理和精神方面的医疗照顾；提供一支持系统以帮助患者尽可能积极地生活直到死亡；提供一支持系统以帮助家属在患者患病期间和他们居丧期间能应付面对一切”。

基于咳嗽模型小鼠相关差异蛋白表达探讨中医“肺与大肠相表里”研究

【目的】研究与分析"肺病及肠"——咳嗽模型小鼠结肠组织差异表达蛋白质,探讨肺与大肠病理上的相关性,以进一步提供中医"肺与大肠相表里"的物质基础。【方法】运用蛋白质组学技术,对正常对照组和咳嗽模型组小鼠结肠组织总蛋白质进行差异双向电泳(2D-DIGE),选择差异表达蛋白质斑点,进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物信息学分析。【结果】筛选取出5个差异表达蛋白点,其中3个蛋白点在咳嗽组表达下调,2个蛋白点表达上调。经鉴定分别为肌动蛋白、血小板活化因子乙酰水解酶IBβ亚基、谷胱甘肽过氧化物酶1、5’(3’)-脱氧核糖核苷酸酶、过氧化物氧化还原化酶-6(Prdx-6)。【结论】肺病及肠咳嗽模型小鼠大肠组织可能存在氧化应激,Prdx-6基因或蛋白可能是肺与大肠之间沟通的"信号"。

膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及其机制

目的:观察中药复方膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及其相关机制。方法:实验于2005-09/2006-07在南方医科大学细胞生物实验室完成。膈下逐瘀汤(按《医林改错》方组成:五灵脂6g,当归9g,川芎6g,桃仁9g,丹皮6g,赤芍6g,乌药6g,延胡索3g,甘草9g,香附5g,红花9g,枳壳5g。均购自南方医院中药房)经研粉、煮沸、离心、过滤配成质量浓度为25,50,100,200mg/L的药液;顺铂配制成质量浓度为0.5,1.0,1.5,2.0mg/L的药液(作为阳性对照),均作用于Bel-7402细胞,并设空白对照(未加任何药物)。采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazoly ltetrazolium,MTT)比色法检测膈下逐瘀汤各组对Bel-7402细胞生长的影响,用酶标仪测定培养细胞在600nm处吸光度值,并计算细胞抑制率,抑制率(%)=(实验组吸光度值-对照组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。用蛋白印迹试验检测不同质量浓度药物作用48,72h时第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因蛋白的表达水平。结果:①中药复方膈下逐瘀汤对Bel-7402细胞增殖的影响:膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞有明显的生长抑制作用,呈良好的剂量-效应关系。膈下逐瘀汤质量浓度在200mg/L时其48h细胞生长抑制率介于0.5mg/L顺铂组与1.0mg/L顺铂组之间(分别为41.27%,34.01%,47.49%);膈下逐瘀汤质量浓度在50,25mg/L时,其细胞抑制率明显低于顺铂组,72h细胞抑制率结果基本相同。②药物作用肝癌Bel-7402细胞48h后第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因蛋白的表达:第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因蛋白的表达增多,200mg/L膈下逐瘀汤组介于0.5mg/L顺铂组和1.0mg/L顺铂组之间。结论:中药复方膈下逐瘀汤抑制Bel-7402细胞的增殖机制可能是第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因表达增多的原因。

周福生教授从脾胃论治慢性咽炎经验介绍

慢性咽炎是临床常见病、多发病。主要分为慢性单纯性咽炎、慢性肥厚性咽炎、萎缩性或干燥性咽炎。临床主要表现为咽部不适感，如干燥、发痒、灼热、微痛及异物感等。由于咽后壁常有较黏稠分泌物刺激，部分病人出现晨起刺激性咳嗽，尤以晨起及刷牙时为著，且常伴有恶心。局部病理变化为咽黏膜层充血，黏膜下结缔组织及淋巴组织增生，黏液腺肥大，分泌亢进。

周福生教授治疗男性更年期综合征经验介绍

周福生是广州中医药大学教授，博士研究生导师，兼任广州中医药大学脾胃研究所主任。从事临床教学、科研30余年，擅长治疗疑难杂症，对男性更年期综合征的认识和治疗颇具独到之处，现将其治疗经验总结介绍如下。

膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究

目的：观察膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究。方法：膈下逐瘀汤配成浓度分别为：膈下逐瘀汤(C1)：0．25×10^(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G2)：0．5×10^(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G3)：1．0×10^(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G4)：2．0×10^(-4)g/mL；顺铂配制成浓度分别为：顺铂(S1)：0．5μg/mL,顺铂(S2)：1．0μg/mL,顺铂(S3)：1．5μg/mL,顺铂(S4)：2．0μg/mL,作用于Bel-7402细胞,用噻唑兰(MTT)比色法检测膈下逐瘀汤各组对Bel-7402细胞生长的影响,并且与顺铂各组相对照,用蛋白印迹试验(Western blot- ting analysis)检测不同浓度药物作用48h、72h时磷酸化AKT的表达水平。结果：膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞的增殖及磷酸化AKT的表达均有显著的抑制作用,膈下逐瘀汤浓度在2．0×10^(-4)g/mL时其48h细胞生长抑制率介于S1组与S2组之间。结论：膈下逐瘀汤抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制可能是通过抑制了细胞内磷酸化AKT这一途径而起作用。

膈下逐瘀汤对肝癌防治的机理研究

目的:研究膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞和大鼠肝癌组织中PTEN编码蛋白表达的影响,试图进一步阐明膈下逐瘀汤抗肝癌的可能机制。方法:体外实验:采用蛋白印迹试验(Western blotting analysis,WB)检测Bel-7402细胞不同时间PTEN蛋白的表达水平,各治疗组对PTEN蛋白表达水平的影响。体内实验:采用Western blotting analysis检测正常对照组、肝癌模型组、顺铂组、膈下逐瘀汤组、联合治疗组肝癌组织中PTEN蛋白的表达水平。结果:膈下逐瘀汤组作用Bel-7402细胞3 h时PTEN蛋白达到最高水平;与正常对照组、顺铂组、联合治疗组相比,膈下逐瘀汤组药物作用肝癌Bel-7402细胞3h后PTEN蛋白的表达均有明显差异,而联合治疗组治疗作用较膈下逐瘀汤组更为明显。与正常对照组相比,肝癌模型组、顺铂治疗组、膈下逐瘀汤组和联合治疗组PTEN蛋白表达均增高,顺铂治疗组较膈下逐瘀汤组有明显增高PTEN蛋白表达的作用,联合治疗组作用最显著。结论:PTEN蛋白水平的增高可能是膈下逐瘀汤抗肝癌的主要作用机制之一,膈下逐瘀汤与抗肿瘤药顺铂有协同作用。

周福生教授从脾论治慢性咽炎

慢性咽炎的病因非常复杂,但其根本的原因却是脾胃虚损。因此,补脾益胃是治疗慢性咽炎的根本原则。周福生教授从脾胃辨证治疗慢性咽炎(脾胃失调型),尽显独到。

黄帝内经养生论探微

《黄帝内经》是我国现存最早的医学百科全书，全面系统地总结了养生的理论和方法。养生，又称摄生、保生，即保养生命之意。养生就是根据人类生命的发展规律．针对衰老产生的机理，采取各种方法保养身体，增强体质，预防疾病，延缓衰老，以期达到防病延衰的目的。从人体固有的精、气、神立论到人与自然的整体运动观，指出养生应法于阴阳，和于术数，调于四时，内外安和，恬淡虚无，合同于道。同时强调道德性格涵养，动静结合，防正饮食劳倦，六淫外侵，七情内伤，七损八益，做到形神统一，内外统一，达到延年益寿的目的。本文从以下几个方面探讨养生论的理念及方法。

从“谷气过旺”到“热郁痰瘀”论非酒精性脂肪性肝炎的病机演变

从血脂代谢紊乱起始到非酒精性脂肪性肝炎的进展中存在着一定的病机演变规律,即谷气过旺,消耗不足,是血脂增高及脂质代谢紊乱形成的始动病机环节;气化失司,膏脂凝结,是胰岛素抵抗、高脂血症及单纯性非酒精性脂肪肝形成的病理基础;脂浊壅滞,聚结肝胞,是高脂血症及单纯性非酒精性脂肪肝形成主要病机;脾运失健,痰瘀互结,是非酒精性脂肪性肝炎形成的病理基础和病机关键;痰瘀郁热,积损肝络,是非酒精性脂肪性肝炎形成病理关键及其预后转折点。其中脾失运化是非酒精性脂肪肝病程进展的关键因素,而气化失司则贯穿与整个疾病过程。

脾虚证本质研究的困惑与出路

从脾虚证本质研究取得的成果和存在的问题出发,结合现代系统生物学的代谢组学理论和技术,提出中医脾虚证本质研究应及时纳入代谢组学方法,以期为中医脾虚证的客观化、量化研究提供新的思路和方法。

从肝脾相关理论论治肝硬化

肝硬化是一种以肝组织弥漫性纤维化和再生结节形成为特征的慢性肝病,临床上表现为多系统受累,并以肝功能损害和门静脉高压为主,晚期常出现消化道出血、肝性脑病、继发感染等严重并发症。早期肝硬化多属中医学积聚、癥瘕等范畴,晚期属臌胀范畴。临床上以肝脾相关理论为指导,运用健脾益气方法治疗肝硬化，取得了较好的临床效果。故从肝脾相关角度阐明肝硬化的证治机理是有其必要性及临床意义的。

肝硬化腹水之中医思辨

肝硬化腹水是肝硬化的失代偿期表现，是多种慢性肝损害动态发展的严重阶段。肝硬化早期，中医学将之归属于瘕瘕、积聚范畴；肝硬化晚期产生腹水，中医学则将之归属于单腹胀、臌胀范畴，以“腹大如鼓，皮色苍黄，腹部青筋显露”为特征，因腹部膨如鼓而命名。笔者就肝硬化腹水临床辨治规律略陈己见，不足之处，望同道斧正。

应用比较蛋白质组学探讨中药干预肝癌机制的思路与方法

通过分析比较蛋白质组学在肝癌中的应用现状及其在新药研究中的作用,探讨其在揭示中药干预原发性肝癌的机制的思路。认为比较蛋白质组学有别于以往筛选疾病治疗前后比较"有效"(靶点)蛋白的方法,采用逆向思维模式,锁定筛选相对"无效"(非靶点)的候选蛋白,以新的视角揭示中药方剂"不能治愈"和"能够治疗"肝癌的分子生物学机制,以期发现肿瘤的"逃逸"蛋白机制。

瘦素诱导HSC增殖的信号转导通路及保肝宁调控作用的实验研究

目的:观察中药复方保肝宁对外源性瘦素(leptin)诱导的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的影响及其对JAK-STAT信号转导通路中相关信号因子磷酸化JAK2、STAT3蛋白(P-JAK2、P-STAT3)的影响,试图进一步阐明保肝宁抗肝纤维化的可能机制。方法:用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolylium,MTT)检测保肝宁对leptin刺激的HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹实验(West-ern blotting analysis)检测P-JAK2,P-STAT3的表达水平。结果:与秋水仙碱组比较,保肝宁组能明显降低P-JAK2、P-STAT3表达水平。结论:中药复方保肝宁有阻断leptin诱导HSCs-LX2增殖的作用,而降低磷酸化JAK2、STAT3蛋白的表达,阻断JAK2-STAT3通路,可能是其主要的机制之一。

重组瘦素诱导HSC增殖及保肝宁调控作用的实验研究

目的:探讨中药复方保肝宁对外源性瘦素(leptin)诱导的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的影响及其保肝宁调控作用的可能机制。方法:给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7天,制备含药血清,用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolylium,MTT)检测保肝宁对leptin刺激HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹实验(Western blotting analysis)检测的P-JAK2蛋白表达水平。结果:保肝宁组作用HSC-LX2 6小时后,P-JAK2蛋白的表达水平开始降低,P-JAK2处于最低水平。与正常血清组比较,保肝宁组较秋水仙碱组更能降低P-JAK2蛋白表达水平。结论:中药复方保肝宁有阻断leptin诱导HSCs-LX2增殖的作用,而抑制P-JAK2蛋白的表达水平可能是其主要的机制之一。

经方治验3则

谭某，女，72岁，2006年10月18日初诊。口苦、口干3月，伴右侧胸胁胀闷。患者诉口苦难以忍受，用牙刷刷舌面后方感好些，尤以凌晨3～4点为甚，腹胀、腹痛，进食后更明显，小便量少、次数少、难解，即使饮水足量，2小时后行B超检查膀胱仍无尿，不能充盈，无腰酸、腰痛，纳少，大便每天1次、稍烂，双下肢轻度凹陷性水肿，舌苔水滑，脉细。行血常规、肝肾功能、小便常规检查均正常；B超检查肝、胆、脾、胰、双。肾、输尿管、膀胱、子宫及附件均未发现器质性病变。证属少阳不和，水饮内停，兼太阴脾虚，治以和解少阳，健脾行水。方用柴胡桂枝于姜汤加减。处方：茯苓30g，

四君子汤对脾虚大鼠骨骼肌细胞色素c氧化酶Ⅰ、ⅣmRNA及蛋白表达的影响

【目的】探讨脾虚证中线粒体能量代谢障碍机制及健脾益气方药的干预作用。【方法】采用皮下注射利血平法构建脾虚大鼠模型,将造模成功后的大鼠分为脾虚模型组和四君子汤组,每组各7只,另取正常组7只。四君子汤组给予四君子汤1.0 g·mL^(-1)·kg^(-1)灌胃,脾虚模型组和正常组灌胃等体积生理盐水,每日1次,持续21 d。给药期间记录大鼠一般情况。给药结束后,采用对溴苯胺法测定尿D-木糖排泄率,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察骨骼肌病理改变,采用聚合酶链反应(PCR)法检测大鼠骨骼肌细胞色素c氧化酶(COX)Ⅰ、COXⅣmRNA表达,采用免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法检测大鼠骨骼肌COXⅠ、COXⅣ蛋白表达。【结果】与正常组比较,脾虚模型组大鼠骨骼肌肌纤维排列紊乱、间隙增大,细胞核分布不均,胞质染色不匀;与脾虚模型组比较,四君子汤组骨骼肌纤维排列较整齐。脾虚模型组大鼠骨骼肌COXⅠ、COXⅣmRNA和蛋白表达水平较正常组降低(P<0.05或P<0.01);四君子汤组大鼠骨骼肌COXⅠ、COXⅣmRNA和蛋白表达水平较脾虚模型组升高(P<0.05或P<0.01)。【结论】脾虚大鼠存在骨骼肌病理形态损伤,骨骼肌COXⅠ、COXⅣmRNA和蛋白表达均降低。四君子汤改善脾虚大鼠骨骼肌病理结构,提高COXⅠ、COXⅣm RNA和蛋白表达可能是其修复脾虚证能量代谢障碍的机制之一。