聚合酶链反应技术对慢性粒细胞白血病进行分子学诊断和监测

慢性粒细胞白血病(CML)是一种起源于造血多能干细胞的肿瘤性疾病。Ph染色体是CML的标记染色体,其分子基础是第9号染色体上的原癌基因c—abl易位至第22号染色体,并与bcr基因5’端相连接,形成bcr/abl融合基因。为从分子水平探讨bcr/abl融合基因在CML诊断及微量残留病(MRD)监测等方面的意义,我们应用筑巢法逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)技术。

V(D)J重组起始阶段的研究进展与展望

重组激活基因(recombination activating gene)1和2编码的RAG1和RAG2蛋白通过对V(D)J重组起始阶段的调节作用,使得抗原受体基因重排严格地按组织、细胞发育阶段进行。本文将就RAG蛋白结合和催化断裂抗原受体基因机制作简要介绍。这些新发现明确了体内V(D)J重组发生的部位以及其出现错误时可能发生的地方,提示V(D)J重组机制不仅对淋巴细胞正常发育起关键性作用,而且对基因组不稳定性和淋巴系统恶性肿瘤的发生也具有重要意义。

基因治疗研究进展

近几年来,由于遗传学和分子生物学特别是DNA重组及单克隆抗体技术的发展,基因治疗已成为国际上引人注目的重要课题及跨世纪工程,实现了科学家们用基因工程技术治疗疾病的梦想。其中以肿瘤、白血病的基因治疗发展最快,成为主流。。 1 发展史及研究概况 1967年Nirenberg首先提出基因工程可用于人类疾病治疗的设想。1980年Cline首次将外源基因转导于小鼠获得成功,次年对2名重症β-地中海贫血患者进行了基因治疗,但未成功。1985年美联邦国家卫生研究院(NIH)

西安地区住院患者与健康人群Rh血型分布特征

目的了解西安地区住院患者与健康人群Rh血型分布特征,探讨Rh抗原分型检测在临床输血安全中的意义。方法采用血清学方法对10 898例住院患者和5 121例健康人做Rh抗原分型检测,并对住院患者进行不规则抗体筛查和鉴定。结果住院患者与健康人群的RhD阳性表型分布频率差异有统计学意义,并且在构成比中,住院患者表型Dccee(0.42%)>DCc EE(0.12%),而健康人DCc EE(0.33%)>Dccee(0.21%);在RhD阳性患者中,Rh表型以CCee和Cc Ee为优势表型,在RhD阴性患者中,Rh表型以ccee和Ccee为优势表型;Rh 5种抗原的阴性率由高到低依次为E(51.24%)>c(41.42%)>C(12.04)>e(7.82%)>D(0.83%);在检出的37例同种抗体中,Rh抗体28例,占75.7%,其中抗-E17例,抗-c E4例,抗-D3例,抗-Ce2例,抗-C1例,抗-c1例。结论应用Rh抗原分型检测技术,选择与患者Rh表型相匹配的献血员红细胞输注,可在一定程度上减少同种抗体的产生,降低输血不良反应的发生率。

新冠肺炎疫情期间“医学免疫学”在线授课效果的调查分析

为了解新冠肺炎疫情期间“医学免疫学”在线教学的效果和存在的问题,通过问卷调查,分析评估学生在线学习医学免疫学的学习效果及影响因素,以不断提升在线教学质量,并为今后的教学工作积累经验。

Del型RHD基因外显子区及启动子区多态性检测

目的检测Del型RHD基因启动子区是否存在多态性。方法对32例Del型样本RHD基因编码区10个外显子扩增并测序;对样本RHD基因启动子区-1--1 246 bp内的4个多态性位点进行检测;对RHD基因启动子区+3--1138扩增并测序。结果 32例Del型样本均携带完整的RHD基因,并且均为RHD基因1227位点G>A的突变;所有样本均检测到4个多态性位点;RHD基因启动子区+3--1138测序未发现突变位点。结论 Del型RHD基因启动子区序列与正常基因一致,未发现新的突变位点,提示Del型D抗原的弱表达与启动子区突变无关。

降钙素原单克隆抗体的制备及鉴定应用

目的表达和纯化降钙素原(PCT)基因的融合蛋白,制备PCT融合蛋白的鼠源性单克隆抗体。方法根据GenBank数据库中降钙素原氨基酸序列设计引物,从TT细胞中扩增出降钙素原的全长片段,将其克隆至pEASYE1原核表达载体,构建重组表达质粒pEASY-E1-PCT;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞转化阳性克隆质粒中,以IPTG作为诱导剂诱导表达融合蛋白,通过His镍离子亲和层析纯化目的蛋白,纯化的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并纯化,ELISA法检测抗体效价及交叉鉴定,制备的单抗与市售的降钙素原检测试剂盒进行对比。结果成功构建了pEASY-E1-PCT原核表达载体,获得2株可以稳定分泌特的单抗,经鉴定这两株抗体效价高、特异性好,与市售检测试剂盒检测结果一致。结论成功构建了原核表达载体pEASY-E1-PCT,获得了高纯度降钙素原PCT蛋白,制备并获得了2株特异的单克隆抗体,制备单抗与商品试剂盒对血清样本检测结果基本一致,为进一步研究降钙素原的生物学功能及试剂盒开发提供实验基础。

雨课堂在医学微生物学实验教学中的应用

《医学微生物学》是医学院校的重点核心课程,实验教学是其重要的组成部分。但近年来,实验课课时被大幅度压缩,实验内容删减严重,教学效果不尽如人意。为解决实验课学时严重短缺、学习内容片段化、缺乏系统性的问题,智慧教学工具"雨课堂"被引入教学,通过课上及课后推送,将传统教学内容与MOOC(massive open online courses,慕课)、微课、手机微信融为一体,完善并丰富教学内容,有效提高教学效果。文章从实际应用角度出发,介绍"雨课堂"的使用方法和具体教学内容,并使用调查问卷分析教学效果。皆在与同行分享经验,为《医学微生物学》实验课教学改革提供有益的借鉴。

BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型的建立及其鉴定

目的:建立BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型,为研究白血病的发病机制和药物开发提供理想的平台.方法:利用含有p MSCV-BCR/ABL1-IRES-GFP逆转录病毒上清感染6~10周龄C57BL/6供者小鼠的骨髓细胞,移植给致死量射线照射的同种同型受者小鼠,建立BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型;监测移植小鼠的体质量,生存率;流式细胞仪检测小鼠外周血有核细胞GFP表达(代表有核细胞表达BCR/ABL1)和细胞分型;观察小鼠脾脏、肺脏和肝脏等器官大体形态和HE染色变化.结果:移植20 d后,移植小鼠呈现弓背、活动性减少、精神萎靡的状态,体质量明显降低;流式细胞仪检测外周血中出现GFP^+细胞,并且随着移植时间的延长,GFP^+粒细胞明显增多.移植小鼠的生存率较对照组明显降低.移植小鼠发病后呈现脾脏显著增大、肺出血、肺脏及肝脏出现白色结节和HE染色呈现大量细胞浸润,且小鼠脾脏中有核细胞的80%为GFP^+Gr-1^+细胞,即BCR-ABL1^+粒细胞白血病细胞.结论:利用此方法成功建立了BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型,为研究慢性粒细胞白血病机制和治疗提供了平台.

淋巴细胞特有重组激活基因蛋白载体构建及功能鉴定

目的:淋巴细胞特异性重组激活基因(RAG)蛋白1和2共同组成的RAG重组酶是造成淋巴细胞发育及产生抗体多样性的关键性蛋白.本研究构建并优化同时表达RAG1和RAG2的慢病毒载体,为研究RAG1和RAG2的结构和功能奠定基础.方法:构建同时表达RAG1、RAG2和绿色荧光蛋白(GFP)的载体;Western Blotting验证该载体RAG1和RAG2蛋白表达;体外重组实验证实该载体表达的RAG蛋白具有催化断裂DNA的功能.结果:构建了表达RAG重组酶的载体p WPI-RAG2-P2A-RAG1-IRES-GFP;Western Blotting验证了该载体表达RAG1和RAG2蛋白,并显示该载体RAG1和RAG2蛋白的表达量具有较高的一致性.体外重组实验证实该载体表达的RAG1和RAG2组成的重组酶具有更好的催化断裂DNA的活性.结论:优化后的p WPI-RAG2-P2A-RAG1-IRESGFP载体可以保证RAG1和RAG2同时有效表达,GFP可作为荧光标记,为后续细胞以及动物实验奠定基础.

两种bcr／abl mRNA类型的慢性粒细胞白血病临床过程的比较

两种ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ类型的慢性粒细胞白血病临床过程的比较季延红刘陕西通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ进行检测，从分子水平将慢性粒细胞白血病（慢粒）分为两种亚型，即ｂ２ａ２和ｂ３ａ２，并比较两型患者的临床过程，报告...

混合骨髓移植治疗急性白血病的探讨

混合骨髓移植治疗急性白血病的探讨刘陕西，邵文斌，刘心，韩云峰，陈学民，阎春芳，陈丽梅，季延红我们对急性白血病患者进行混合骨髓移植（ＭＢＭＴ）研究，报告如下。资料和方法１研究对象１．１患者，女性，１９岁。１９９３年１２月１日主诉以齿龈出血、紫斑２周而入...