牛支原体致病机理的研究进展

支原体（Mycoplasma）是最小、最简单的能够自我复制的原核生物,在自然界中分布广泛,其中一些种属是许多动物、植物以及人类的病原体。支原体是由有细胞壁的细菌（更确切地说是真细菌中的革兰氏阳性菌）进化而来。至今被确定的支原体已超过200种,至少有20种可以感染牛。

牛支原体逃避宿主免疫的研究进展

牛支原体(Mycoplasma bovis)是能够感染牛的一种重要的致病性支原体。牛支原体能够在宿主中持续存在并引起慢性疾病,包括肺炎、乳腺炎、耳炎、生殖障碍、关节炎、脑膜炎以及角膜结膜炎。由于临床上抗生素治疗效果不佳以及缺乏商业可用的敏感性诊断工具和有效的疫苗,牛支原体引起的疾病很难预防和控制。牛支原体能够造成长期感染的主要原因是其通过表面抗原高频率变异、规避吞噬细胞吞噬作用、入侵宿主细胞、形成生物膜以及调节宿主免疫应答等方法逃避宿主天然和适应性免疫。深入理解牛支原体的免疫逃避机制有助于研制更好的牛支原体诊断工具和疫苗,也将进一步促进牛支原体预防与控制技术的发展。

动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展

动物支原体可引起肺炎、关节炎、乳腺炎等一系列重要疾病,临床上常表现为慢性、持续性感染,给养殖业造成严重的经济损失。亚单位疫苗具有安全高效、成本低廉等优点,是支原体疫苗研究的重要发展方向。本文主要介绍了重要动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展,以期为今后动物支原体病亚单位疫苗研究提供参考。

牛支原体疫苗的研究进展

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是一种造成全世界范围内育肥牛和奶牛多种疾病综合征的重要病原体。临床症状主要包括长期性肺炎及多发性关节炎(CPPS)、呼吸道疾病综合征(BRD)、乳腺炎及生殖器官疾病。牛支原体能感染多种组织和器官,也能从健康的牛体内分离,是威胁畜牧业生产的主要病原体。由于临床上抗生素治疗效果不佳,预防或控制牛支原体感染最好的选择是研发有效的商业可用的疫苗。牛支原体疫苗的研究已历经多年,虽然存在很多问题,但也取得了一定进展。文章对牛支原体弱毒疫苗、灭活疫苗及亚单位疫苗的研究进展进行了总结,并讨论了疫苗设计的优化方案,为合理设计和研发有效的牛支原体防控技术提供参考。

牛支原体诱导宿主免疫应答的研究进展

牛支原体(Mycoplasma bovis)是一种重要的兽医病原体,牛支原体感染给当前世界养牛业造成了重大的经济损失。本文从天然免疫、体液免疫和细胞免疫三个方面,对宿主感染牛支原体后的免疫应答特点进行了概括和讨论,可帮助我们更好地了解牛支原体与宿主的相互作用,也为合理地设计和研发有效的牛支原体感染防控技术提供参考。

牛支原体08M株突变体文库的构建及鉴定

旨在使用转座子插入突变方法构建牛支原体08M株的突变体文库,为毒力相关基因的鉴定提供技术平台。测定了牛支原体08M株的浓度（颜色变化单位,CCU）和庆大霉素最低抑菌浓度（MIC）。应用电穿孔方法,将庆大霉素抗性质粒p ISM2062（携带有转座子Tn4001mod）导入牛支原体08M株感受态细胞内,经抗性平板筛选、液体培养及PCR鉴定,构建08M株的突变体文库。随机挑选10个克隆菌株传10代检测转座子稳定性,挑选2个克隆用Southern blot检测转座子是否存在多次插入。结果显示：08M株浓度为1.13×107CCU/m L,庆大霉素MIC为16 ng/μL;电转化p ISM2062的牛支原体08M株在抗性平板形成菌落445个,从中克隆培养成功380个,PCR鉴定结果显示存在Tn插入的菌株有263个,阳性率为69.21%（263/380）;插入的转座子稳定传代,且无多次插入。本研究成功初步构建了牛支原体08M株的转座子插入突变体文库。

牛支原体黏附和侵入宿主细胞的研究进展

牛支原体可引起牛的肺炎、乳房炎和关节炎等一系列重要疾病，给养牛业造成严重的经济损失。黏附和侵入是牛支原体定殖和感染宿主的关键步骤，是毒力的重要组成部分。本文主要描述了牛支原体对不同宿主细胞的黏附和侵入方式，并简单介绍了牛支原体黏附相关蛋白及其作用，以期为今后牛支原体致病及免疫逃避机制的研究提供参考。

牛支原体08M株的致病性和免疫原性试验

为了评估牛支原体08M株作为牛支原体灭活疫苗候选株的可能性,攻毒组的每头犊牛气管注射10 mL 08M(1×109CCU/mL)新鲜菌液,对照组气管注射10 mL 0.15 mol/L pH 7.2的PBS。在不同时间采集鼻拭子用realtime PCR进行排菌检测,采集血清检测感染抗体,攻毒后第28天进行剖检,观察肺部病变并进行病原分离。同时,以牛支原体08M培养物为抗原,混合MONTANIDEISA 201 VG,分别制备抗原质量浓度为0.46和1.48 mg/mL两个剂量的免疫原,以每头牛2 mL的剂量,间隔28 d颈部皮下注射犊牛2次,同时设置阴性对照组和空白对照组,二免后第28天进行攻毒试验,方法同致病性试验,免疫后在不同时间采集血清,检测血清抗体。致病性试验结果显示,攻毒组动物在攻毒后第4~14天进行间歇性排菌,第7天可以检测到感染抗体,剖检后观察到攻毒组牛肺部发生明显的病变并从肺部病变组织中分离到牛支原体。免疫原性试验结果显示,2种质量浓度的免疫原免疫动物后均能产生较高水平的血清抗体,攻毒后所有动物均进行间歇性排菌,免疫组动物血清抗体水平无明显变化,对照组动物一免后第14天血清抗体达到最高水平,剖检后所有动物肺部均有病变且都能够分离出牛支原体。结果表明,牛支原体08M株具有较强的毒力和良好的免疫原性,本试验中用牛支原体08M株制备的灭活疫苗免疫犊牛后可以使牛体产生很好的免疫反应但却没有保护作用。

牛支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症，关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象，抗牛支原体多克隆抗体为一抗，FITC标记的兔抗牛IgG为二抗，通过优化牛支原体黏附滴度、黏附时间及一抗、二抗工作浓度，建立牛支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法。最终确定牛支原体的最适黏附滴度为1×10^9CFU／mL，黏附时间为4h，一抗最适工作浓度为1：250，二抗最适工作浓度为1：250。本试验建立的间接免疫荧光方法可用于牛支原体黏附宿主细胞的检测，为牛支原体体外感染的检测及黏附机理的研究提供有效的技术手段。