再生障碍性贫血患者骨髓和外周血中FL水平的测定及意义

目的 :测定再生障碍性贫血 (AA)患者骨髓 (BM)和外周血 (PB)中酪氨酸激酶受体 3的配体 (FL)的水平 ,并探讨其意义。方法 :用常规 EL ISA法检测 16例再障患者骨髓和外周血中 FL、s Fas L和 IL - 2的水平。结果 :再障患者骨髓和外周血中 FL 水平显著升高 ,为正常对照的 2 0倍以上 (P<0 .0 1)。再障患者骨髓及外周血中 s Fas L、IL- 2含量也明显高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :再障患者骨髓和外周血中 FL、s Fas L、IL - 2含量与患者疾病的严重程度呈负相关。

PKC在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用

目的：研究蛋白激酶C（PKC）对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导内皮细胞β-1，4-半乳糖基转移酶-I（β-1，4．GaIT—I）表达的调节作用，以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响。方法：分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs），再用TNF一仅刺激HUVECs，应用RT—PCR、Western blot方法检测B．1，4-GaIT—I表达变化，应用细胞荧光染色观察B-1，4-GalT—I催化的糖链的表达变化及细胞骨架结构的改变，通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变。结果：几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度的抑制TNF-α刺激HUVECs引起的β-1，4-GaIT—I表达的上调，PKC激动剂能够使上调的β-1，4-GaIT—I的表达进一步增加；在HUVECs中β-1，4-GaIT—I与细胞骨架有共同定位，PKC抑制剂显著抑制TNF—α诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1，4-GaIT—I细胞内的再分布；PKC抑制剂显著抑制TNF—α诱导的内皮一单核细胞黏附能力的上调。结论：PKC可能参与调节TNF—α诱导的HUVECsβ—1，4-GaIT—I的表达，并且可能多种类型的PKC参与了这一调节过程；PKC可能通过对β-1，4-GaIT—I的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力。

抗B7-1功能性单克隆抗体对B淋巴瘤细胞生长的抑制作用

目的 分析抗B7- 1功能性单克隆抗体对表达B7分子的人恶性淋巴瘤细胞株Raji和Daudi细胞体外生长的抑制作用及其可能机制。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析肿瘤细胞的B7- 1分子表达 ;以不同浓度抗B7- 1功能性单克隆抗体 ,加入体外培养细胞中 ,经细胞计数和MTT法 ,观察单克隆抗体对肿瘤细胞体外生长的作用。结果 Raji和Daudi细胞均表达B7- 1分子 ,表达阳性百分率分别为 92 .7%和 89.2 % ;抗B7- 1单克隆抗体浓度在 5 μg/ml时就对这两种细胞株有显著的抑制作用 ,并随浓度增高而增强。 结论 抗B7- 1单克隆抗体对高表达B7- 1分子的人恶性淋巴瘤细胞体外生长有明显的抑制作用 。

鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究

目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb)，研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术，获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法生产腹水，并以免疫亲和层析法对其纯化。以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类，竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位，3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应。结果成功地获得了5株分泌特异性抗人CD28 mAb的杂交瘤细胞株，鉴定的1株(克隆18G8)属IgG2a，腹水效价(流式细胞仪分析)达1:2 400以上。该mAb能60％阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合，提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同。mAb 18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号，促进人外周血T细胞增殖(SI=7)。结论18G8是1株功能性mAb，具有重要的研究和应用价值。

鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性

目的 :制备鼠抗人B7 1分子的功能性单克隆抗体 ,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应。方法 :用两株转人B7 1基因细胞株XG7 B7和L B7分别作为免疫原及检测细胞株 ,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠IgG亚类 ,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力 ,以高表达B7 1分子的恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi为靶细胞 ,分析单抗对其生长的影响。以人多发性骨髓瘤细胞转入B7 1基因细胞株XG1 B7为刺激细胞 ,以人外周血单个核细胞 (PBLs)为反应细胞 ,用MTT法分析单抗的中和活性。结果 :成功地获得了 1株鼠抗人B7 1的功能性单克隆抗体 (克隆 4E5 ) ,属于小鼠IgG1亚类 ,经流式细胞仪分析 ,4E5与PBLs、体外人工诱导的树突状细胞(DCs)、Raji和Daudi的阳性结合率分别为 10 2 %、95 1%、92 7%及 89 2 % ;能完全阻断标准抗人B7 1单抗与相应抗原的结合。同时还发现 ,单抗 4E5能显著地抑制恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi的生长繁殖 ,并能阻断B7分子介导的协同刺激信号的传导。结论 :单克隆抗体 4E5是一株抗人B7 1分子的功能性单抗 ,具有重要的研究和应用价值。

尤瑞克林与丁苯酞对急性脑梗死患者认知功能、血清细胞因子的影响

目的观察尤瑞克林与丁苯酞对急性脑梗死(ACI)患者认知功能、血清细胞因子的影响。方法选取2014年1月—2015年12月新疆生产建设兵团第十三师红星医院收治的ACI(依据头颅CT及MR诊断)患者136例作为研究对象,按入院顺序随机分为2组,观察组70例患者在常规基础治疗上使用尤瑞克林联合丁苯酞,对照组66例患者仅采用常规基础治疗,2组患者均连续治疗4周。采用神经功能缺损(NIHSS)量表评价患者中枢神经系统功能,简易精神状态量表(MMSE)评价患者认知功能,应用生物酶联免疫吸附试验检测患者血清细胞因子相关指标。对比2组患者治疗前、治疗2周和4周的NIHSS评分、MMSE评价和血清细胞因子相关指标的变化。结果治疗前,2组患者的NIHSS、MMSE评分差异无统计学意义(t=1.191、1.145,P>0.05),治疗2、4周后均改善(P<0.01)。治疗2周、4周,观察组患者的NIHSS评分均低于对照组(t=4.017、5.676,P=0.000、0.000);治疗4周,观察组患者的MMSE评分高于对照组(t=2.515,P=0.013)。治疗前,2组患者的血清sCD40L、IL-18、hs-CRP、NO、eNOS、VEGF的水平差异无统计学意义(P>O.O5),治疗后2周,2组上述指标均改善(P<0.01)。治疗2周、4周,观察组血清sCD40L、IL-18、hs-CRP水平低于对照组(P<0.01),NO、eNOS、VEGF水平高于对照组(P<0.01)。结论尤瑞克林与丁苯酞治疗ACI患者能促进患者认知功能、神经功能恢复,减轻炎性反应。

rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响

为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P<0.05);两株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P<0.05);MDA-MB-435细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化。两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调。rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05)。由此表明,CD40信号影响乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHCII类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTESmRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用。同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性。

壳聚糖、月见草、舒降之降血脂作用及机制研究

目的研究壳聚糖、月见草、舒降之的降血脂作用及机制。方法运用新西兰家兔制备高脂血症模型,各实验组分别同时饲喂壳聚糖、月见草、舒降之10周,然后分别测定给药前、后血脂水平的变化,并提取肝组织和肾皮质组织蛋白,用免疫印迹法观察受体相关蛋白的表达水平变化。结果壳聚糖、月见草与舒降之都可使血脂不同程度下降,高脂饮食加壳聚糖组实验动物肾、肝脏组织中受体相关蛋白表达水平较其他各组明显增高。结论壳聚糖、月见草、舒降之均具有一定的降血脂作用,调节受体相关蛋白RAP的表达可能是机制之一。

ERK在TNF-α诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I表达中的作用

目的研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-GalT-I)表达的调节作用。方法用不同浓度的TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并作用不同的时间,检测β-1,4-GalT-I表达变化;应用ERK通路抑制剂U0126预处理HUVECs,再用TNF-α刺激HUVECs,检测β-1,4-GalT-I的表达变化,并通过内皮-单核细胞黏附试验观察HU-VECs黏附能力的改变。结果 TNF-α诱导HUVECsβ-1,4-GalT-I表达增加,且具有剂量和时间依赖关系;U0126显著抑制TNF-α引起的HUVECsβ-1,4-GalT-I表达的上调及其黏附能力的上调。结论 ERK信号转导通路可能参与调节TNF-α诱导的内皮细胞β-1,4-GalT-I的表达,并影响内皮细胞的黏附能力。

南通市几类人群TTV、HGV、HCMV感染状况的初步调查

目的 调查南通市几类人群中输血传播病毒 (TTV)、庚型肝炎病毒 (HGV)和人巨细胞病毒 (HCMV)的感染状况。方法 选择献血员、非肝病人群、急性病毒性肝炎 (AH)与慢性病毒性肝炎 (CH)患者、肝炎肝硬化 (LC)以及原发性肝癌 (PHC)患者为调查对象。采用半巢式聚合酶链反应检测TTVDNA、巢式聚合酶链反应检测HGVRNA、核酸斑点杂交法检测HCMVDNA。采用微量细胞毒试验方法检测人外周血T细胞亚群。结果 义务献血员、非肝病人群、AH、CH、LC和PHC人群的TTV感染率分别为 9 2 %、2 4 0 %、4 6 6 %、4 1 6 %和 6 3 6 % ,后三种人群的感染率显著高于义务献血员 (P <0 0 1 )。HGV感染率在有偿献血员、AH、CH和LC人群中分别为 2 9%、9 6 %、1 7 6 %和 1 3 8% ,但各组之间无统计学差异 (P >0 0 5 )。HCMV在非肝病人群、AH、CH和LC人群中的感染率各为 2 6 7%、38 9%、6 5 8%和 77 8% ,CH组与LC组的感染率显著高于非肝病人群 (P <0 0 1 )。结论 HGV、TTV、HCMV在南通市人群包括献血员中有一定的感染率 ,在筛选献血员时有必要对此三种病毒进行检测 。

细胞因子诱导慢性乙型肝炎患者树突状细胞的免疫功能

目的:探讨体外培养诱导慢性乙型肝炎患者外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)功能状态改善的途径方法:以 GM-CSF+IL-4诱生的慢性乙型肝炎患者外周血来源的 DC 作为对照组,三个实验组再分别加入 TNF-α或IFN-γ或 TNF-α+IFN-γ联合培养.FCM 检测细胞表面免疫分子 CD1a,CD83,CD80,CD86,CD40,HLA-DR 的表达水平并进行细胞计数,MTT 法检测 DC 刺激同种异体淋巴细胞增生能力及 ELISA 法检测 DC 培养上清中细胞因子 IL-6,IL-12的分泌水平.结果:在培养6、9d,各实验组诱导生成的 DC 数量明显多于对照组(P<0.01).在培养8d,各实验组 DC 的 CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40分子表达较对照组明显增高(P<0.01,P<0.05);各实验组 DC 表达的 HLA—DR 分子高于对照组(P<0.05;P<0.01),且以 TNF-α(?)IFN-γ组表达最高.各实验组 DC 刺激同种异体淋巴细胞增生的能力较对照组增强(P<0.05).培养6d 各实验组 DC 培养上清中 IL-12的浓度高于对照组(P<0.05),尤以 IFN-γ组更为明显(P<0.01),而 IL-6的浓度则显著低于对照组(P<0.01).结论:采用 GM-CSF+IL-4联合 TNF-α或 IFN-γ或 TNF-α+IFN-γ体外培养体系,能有效的改善慢性乙肝患者DCs 的免疫功能状态.

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11在大鼠脊髓横断性损伤后的表达变化

目的探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶11(CDK11)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化以及定位情况。方法将36只成年SD大鼠随机分为假手术组,T9横断伤1d、3d、5d、7d和14d组,每组6只。采用Western blotting测法损伤后各时间段CDK11蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫组织化学方法检测CDK11在假手术组以及损伤组脊髓中的分布和定位。结果Western blotting显示,CDK11蛋白水平在SCI后呈现先升高后下降的趋势,CDK11p58的表达于损伤后3d开始显著升高,一直持续到第7d,之后逐渐下降。而CDK11p110也在3d、5d时高于假手术组,伤后7d则明显降低,至14d时有所回升。免疫组织化学表明,CDK11在假手术组脊髓中均匀分布,损伤后3d,CDK11在脊髓灰质和白质中表达明显增加;免疫荧光双标记表明,CDK11与神经元的标记物神经元核抗原(NeuN)、少突胶质细胞标记物环核苷酸-3′磷酸水解酶(CNPase)有明显共定位,与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)也存在部分共定位。结论脊髓损伤后CDK11蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞存在共定位,提示CDK11参与了脊髓损伤后的病理生理过程。

β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在树突状细胞中的表达及作用

目的:观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)在人外周血来源的树突状细胞(Dendritic cells,DCs)中的表达与定位,研究其对DCs免疫功能的影响。方法:人外周血单核细胞经GM-CSF+IL-4+TNF-α诱导培养分化为DCs,采用RT-PCR、流式细胞术和激光共聚焦技术观察DCs中β-1,4-GalT-Ⅰ的表达与定位;通过细胞粘附试验分析β-1,4-GalT-Ⅰ表达与细胞粘附能力的关系。用α-乳清蛋白(α-lactalbumin,LA)作为细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ抑制剂,研究β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs细胞粘附以及与CD4+Th细胞形成免疫突触过程中的作用。结果:在人外周血来源DCs细胞表面和细胞浆内可表达长型和短型β-1,4-GalT-Ⅰ;长型β-1,4-GalT-Ⅰ或细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ的表达水平与细胞粘附能力呈正相关;α-LA既可抑制DCs对层粘连蛋白的粘附,又可抑制DCs与CD4+Th形成免疫突触。结论:β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs中表达,他们作为粘附分子参与细胞粘附和免疫突触形成。

β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶I影响雪旺氏细胞增殖的机制。方法:将不同浓度的β-1,4-GalT-I表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westernblot方法检测增殖相关信号分子cyclinD1、p16INK4以及p27Kip1的表达水平,North-ernblot方法检测p19ARF的表达变化。结果:随着β-1,4-GalT-I在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclinD1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kip1变化不明显。结论:β-1,4-GalT-I影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclinD1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关。

乳酸乳球菌食品级表面表达系统建立和报告基因检测

目的 :建立乳酸乳球菌食品级高效表面表达系统。方法 :克隆并表达枯草芽孢杆菌基因组中γ-多聚谷氨酸合成酶亚基跨膜蛋白Pgs A,同时将报告基因——金黄色葡萄球菌耐热核酸酶融合在Pgs A蛋白C-末端,通过甲苯胺蓝-DNA琼脂平板检测酶活性。结果:耐热核酸酶基因被成功表达并锚定在细胞表面,具有较高酶活性。结论:该系统的成功建立为未来高致病性病原微生物抗原簇重组表达,进而研制新型基因工程口服疫苗奠定基础。

医学免疫学PBL教学的实践与思考

PBL(Problem-based learning)是以问题为基础的新型教学方法,对PBL在医学免疫学教学中的实践应用进行了初步探索,分析总结了免疫学PBL教学的特点及目前存在的主要问题。

PBL与LBL教学法相结合运用于医学微生物学教学的探索

医学微生物学是一门重要的基础医学课程,交叉渗透于其他学科。为提高教学质量,适应当代医学教育的要求,需要探索新的教学方法。在教学实践中发现,LBL(Lecture-based learning)结合PBL(Problem-based learning)教学法在医学微生物学理论授课中可让学生在扎实掌握基本理论的同时,激发学生学习的主动性,提高学生独立思考及分析问题能力,培养团队合作精神。

多种细胞因子对人骨髓基质细胞生长的影响

目的:探讨多种细胞因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法:分离人骨髓单个核细胞,经培养获得骨髓基质细胞(BMSC),分别用不同的细胞因子组合作用于BMSC,MTT法测细胞增殖。采用Mini MACs系统阳性分离纯化脐血CD34+细胞,用BMSC结合不同的细胞因子组合培养14天后计数CFU-Mix集落数。结果r:hGM-CSF结合FL、SCFI﹑L-6对BMSC生长的增殖作用最明显;BMSC联合SCFI、L-3、FL、G-CSF、EPO对促进CD34+细胞体外集落形成的作用最明显。结论:细胞因子作用下的BMSC扩增有可能应用于造血损伤修复。

不同麻醉方法对骨水泥使用术中应激反应的影响

目的:探讨骨水泥使用术中不同麻醉方式对患者应激反应蛋白表达的影响。方法:将64例ASAI～Ⅱ级术中使用骨水泥患者随机分为硬膜外麻醉组22例(A组)和腰麻-硬膜外联合麻醉组42例(B组)。分别于入手术室后(T1),切皮后1min(T2),扩髓后1min(T3),术毕1min(T4)抽血测定肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇和血管紧张素Ⅱ浓度。结果:两组患者麻醉前血浆肾上腺素,去甲肾上腺素,皮质醇和血管紧张素Ⅱ浓度差异无统计学意义(P>0.05);与A组相比,B组麻醉起效时间明显缩短;术中(T2～T3)两组血浆肾上腺素、去甲肾上腺素浓度与术前(T1)相比显著增高,其中B组血浆肾上腺素,去甲肾上腺素浓度和血清皮质醇明显低于A组,两组血管紧张素Ⅱ浓度无明显差异。结论:腰麻-硬膜外联合麻醉可明显减轻骨水泥使用术中的应激反应,且对循环影响小。

慢性乙型肝炎外周血树突状细胞的功能障碍机制的初步探讨

目的:探讨慢性乙型肝炎者树突状细胞(DCs)的功能状态及机制。方法:以直接荧光法进行表型分析、CCK8法测定DCs对同种异体淋巴细胞的刺激作用、AnnexinV/FITC法测定细胞凋亡率进行分析。结果:慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞经诱导分化形成的DCs,与正常人相比,表达协同刺激分子CD80、CD86水平均较低;刺激同种异体淋巴细胞增殖能力也低于正常人;DCs凋亡率明显增高。结论:慢性乙型肝炎患者外周血的DCs免疫功能处于抑制状态,而HBV感染导致的DCs凋亡增多可能是引起DCs功能障碍的原因之一。