pokemon通过抑制p53和上调白细胞介素6抑制胃肿瘤细胞BGC823凋亡

目的原癌基因pokemon是转录抑制因子,高表达于多种肿瘤细胞中,但其在肿瘤发生发展中的机制仍有待阐明。文中研究pokemon在胃腺癌细胞系BGC823中的作用及机制。方法将pokemon的编码片段构建入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中。将具有靶向沉默pokemon的siRNA互补的DNA构建到pSilencer 3.1 H1-neo中。将构建的质粒pcDNA3.1-pokemon和pSilencer 3.1 H1-3#用脂质体2000转染BGC823细胞。用流式细胞仪检测细胞凋亡,用RT-PCR分析细胞内mRNA的变化,用Western blot检测pokemon蛋白的表达。结果成功构建了pokemon过表达/干扰载体pcDNA3.1-pokemon和pSi-lencer 3.1 H1-3#。在BGC823细胞中,过表达的pokemon可显著抑制p53,促进白细胞介素6(IL-6)转录。干扰pokemon基因的表达可使p53的转录增强。pokemon过表达可抑制BGC823的凋亡,沉默pokemon表达可促进凋亡。结论 pokemon抑制胃肿瘤细胞BGC823凋亡,p53和IL-6是pokemon下游的靶基因。

原癌基因Zbtb7A的POZ区在大肠杆菌中的表达及其多抗制备

目的:原癌基因Zbtb7A在肿瘤的发生发展过程中起"分子开关"的作用。本研究制备Zbtb7A蛋白POZ功能区重组蛋白及相应的多克隆抗体。方法:根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化其编码序列,用2步法PCR合成目的片断,并将其构建入原核表达载体pET-26b(+)中。重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmolIPTG诱导重组蛋白表达。所获重组表达蛋白经15%SDS-PAGE分离,切胶回收目的蛋白,研磨后免疫家兔制备抗血清。收集的抗血清经饱和硫酸铵沉淀和G蛋白柱联合纯化,用Western blot证实对纯化的抗血清进行鉴定。结果:获得了密码子优化后的Zbtb7APOZ区的编码序列,并成功地获得了其重组蛋白,制备了高纯度的抗POZ区多克隆抗体。结论:所获得的重组POZ区蛋白及其多克隆抗体可应用于对Zbtb7A的进一步研究。