CDDO-Me对三阴性乳腺癌细胞泛素特异性蛋白酶2a活性及细胞增殖的抑制作用

目的·在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞中研究筛选得到的泛素特异性蛋白酶2a(ubiquitin-specific protease 2a,USP2a)抑制剂甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对USP2a活性及细胞增殖的影响。方法·利用泛素特异性蛋白酶抑制剂筛选系统筛选得到USP2a抑制剂CDDO-Me,采用分子对接分析技术预测CDDO-Me与USP2a的结合情况,采用细胞热迁移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)检测CDDO-Me与3种TNBC细胞株内USP2a蛋白的结合情况。通过Western blotting检测USP2a的底物β连环素(β-catenin)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)蛋白水平以及凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3(caspase3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase1,PARP1]的变化。利用细胞活性检测试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测CDDO-Me对TNBC细胞增殖的影响。MDA-MB-468细胞瞬时转染pLVX(pLVX组)或pLVX-USP2a(pLVX-USP2a组)质粒,经CDDO-Me处理后,采用Western blotting检测β-catenin和TRAF6的蛋白水平,流式细胞术检测细胞周期以及台盼蓝拒染法检测活细胞数。结果·CDDO-Me在体外可以抑制USP2a活性,50%抑制浓度为3.84μmol/L。分子对接分析结果显示,CDDO-Me可以和USP2a的His456残基之间形成氢键,和Phe409、Tyr514残基之间具有疏水相互作用。CETSA实验结果显示,CDDO-Me能够和3种TNBC细胞中的USP2a蛋白结合。Western blotting结果显示,CDDO-Me可以下调USP2a底物β-catenin和TRAF6的蛋白水平,而相同浓度的CDDO-Me处理USP2a过表达的MDA-MB-468细胞,发现β-catenin和TRAF6蛋白水平未出现明显降低。CDDO-Me呈剂量依赖性抑制TNBC细胞的增殖,使细胞发生caspase3活化和PARP1的剪切并且导致细胞出现S期和G2/M期阻滞。与pLVX组相比,pLVX-USP2a组活细胞数目更多,细胞也未出现周期阻滞。结论·CDDO-Me可以抑制TNBC细胞中USP2a的活性,并且抑制TNBC细胞的增殖,诱导其凋亡。

狂犬病病毒实验室检测技术的研究进展

狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus，RABV）感染引起的急性接触性传染病，能够引起人和多种哺乳动物的致死性中枢神经系统感染，出现狂暴、恐水等临床特征，最后导致中枢神经系统麻痹或衰竭而死亡。RABV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavims），为单股负链不分节段的RNA病毒，具有5个独立转录单元，分别编码核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、糖蛋白（G）和RNA依赖的RNA聚合酶蛋白（L），基因组长度为11928nt～11932nt。

氮肥、磷肥出口“关窗”,钾肥向左OR向右?

近期从市场传出的相对确切消息称,自2010年12月1日起,磷铵、尿素出口关税执行旺季关税,税率为110%,磷酸二铵出口基准价下调为3400元/吨,磷酸一铵出口基准价下调为2900元/吨,尿素出口基准价基准价由2300元/吨降到2100元/吨。

浅谈技术技巧在古典舞表演中的运用

基于当前时代背景下,舞蹈表演的普及率越来越高。此类表演既能做到刚柔并济,又能展现出灵魂的矫健之美,从而呈现出多种不同的风格。为了提升表演的效果,舞蹈表演者便需要积极应用各类技术技巧,从而能够和舞蹈情节联系在一起,促使观众们能够得到情感共鸣。本篇文章主要描述了技术技巧对古典舞表演的影响,探讨了古典舞表演中技术技巧的应用,并对于表演问题和处理方案方面发表一些个人的观点和看法。

猪传染性胃肠炎病毒LY86株N基因序列分析及病毒在猪睾丸细胞上的增殖特性研究

为探究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)LY86株与其他不同来源TGEV毒株之间在分子生物学上的差异及其在猪睾丸(ST)细胞上的增殖特性,分别进行了TGEV LY86株N基因的序列分析,以及病毒株以不同感染复数(MOI)感染ST细胞的毒价测定。结果显示:TGEV LY86株与其他17株TGEV参考毒株核苷酸序列同源性在97.2%~99.8%,特别是与M6、M60、TS、H、H16及JS2012毒株之间均存在很高的同源性;感染复数直接影响TGEV LY86株在ST细胞上的增殖效率,过高或过低的感染复数均可导致较低的TGEV增殖效价;当以MOI=0.001接毒时,感染后48 h所收获的病毒毒价最高,达10^(6.20±0.23)TCID_(50)/0.1 mL。本研究对分析TGEV的遗传变异规律与感染特征、优化疫苗生产工艺等具有重要的参考意义。