H9N2亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备研究

目前,我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的免疫效果及其安全性优于灭活苗,成为近年研究的热点。本研究旨在建立一种H9N2亚型流感病毒VLP疫苗制备的方法。将优化的H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因和未优化的HA、NA基因分别插入到pFastBack^(TM)Dual载体中,得到相应的重组供体。然后将这些重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,红细胞凝集试验、SDS-PAGE和Western blot结果显示,优化的HA、NA基因编码的蛋白在Sf9昆虫细胞中获得了成功表达。通过透射电子显微镜观察细胞上清的浓缩液,能检测到VLP。结果表明,本研究在Sf9昆虫表达系统中成功表达了H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA蛋白,并形成了VLP,为进一步研究该病毒VLP疫苗奠定了基础。

2014~2016年江苏地区H9N2亚型禽流感病毒遗传进化及其分子特征的分析

H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)在我国广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,还对公共卫生安全存在潜在威胁. 2014～2016年, H9N2亚型禽流感病毒在江苏地区的活禽市场的鸡中的阳性率为8.39%～13.74%.选取10株H9N2分离株进行全基因组测序及遗传进化分析.结果表明, H9N2分离株的HA基因与早期的江苏分离株位于同一小分支上,且同源性较高,但NA基因与早期江苏病毒株的同源性较低,核苷酸同源性为91.4%～93.9%,氨基酸同源性为91.2%～93.8%.这些病毒株的基因型依然为B69,为目前的优势基因型.所有H9N2病毒分离株的HA蛋白的226位点为L.固相受体结合实验结果显示, H9N2分离株具有人源α2,6唾液酸受体的结合特性.