人Tnfrsf11b-N端多肽的原核表达、纯化及其初步分析

目的对原核表达和可溶性纯化后的Tnfrsf11b蛋白氨基端的24．106位肽段进行二级结构分析。方法根据已经发表的人Tnfrsf11b氨基酸序列，利用BLAST程序进行同源性分析，确定所要构建的Tnfrsf11bN端CRD功能结构域；将目的基因片段克隆入表达载体pGEX-6P-1并转化大肠杆菌BL21（DE3），于16℃、0．1mmol／LIPTG诱导25—30h可获得可溶性融合蛋白，经过Glutathione Sepharose^TM 4B亲和层析纯化和PreScission Protease酶切，洗脱的蛋白样品经过Superdex75凝胶预装柱进一步纯化，最终获得可溶性、高纯度的蛋白；对目标蛋白进行圆二色谱分析。结果获得重组质粒pGEX-6P-1-tnfrsf11b并在大肠杆菌中可溶性表达，经亲和层析、酶切、分子筛层析后获得了可溶的、高纯度的Tnfrsf11bN端功能结构域蛋白并对其进行了圆二色谱分析，发现目标蛋白富含β-sheet。结论高含量的β—sheet更有利于蛋白质参与与相互作用，这对其功能的发挥有着重要意义；对此进行研究可以更好的理解这种相互作用，并为进一步研究Tnfrsf11bN端的结构和功能奠定了基础。

人Fas N 端融合蛋白的原核表达、纯化及初步分析

目的:对Fas蛋白N端的30～108位肽段进行原核表达,制备可溶性蛋白,并完成二级结构分析。方法:利用BLAST程序进行同源性分析,确定所要构建的FasN端半胱氨酸富集结构域(CRD),PCR扩增目的基因片段,将其克隆入表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3),于16℃用0.2mmol/L的IPTG诱导25h表达GST-Fas融合蛋白;用Glu-tathione Sepharose 4B柱分离GST-Fas融合蛋白,用PreScission蛋白酶切去GST标签,将洗脱的蛋白样品经Superdex 75凝胶预装柱进一步纯化;对所获得的可溶性、高纯度蛋白进行圆二色谱分析。结果与结论:获得重组质粒pGEX-6P-1-fas,并在大肠杆菌中可溶性表达了FasN端CRD功能结构域蛋白;经亲和层析、酶切、分子筛层析后,获得了可溶的、高纯度的FasN端CRD功能结构域蛋白;圆二色谱结果揭示目标蛋白富含β-折叠,为进一步研究Fas的结构和功能奠定了基础。

植物花粉萌发与极性生长中的钙信号

概述了国内外对植物花粉萌发、花粉管生长的生理过程、植物体内的相关Ca2+离子通道和Ca2+泵的分类、信号转导、花粉极性生长的现象、Ca2+离子可能参于花粉萌发和极性生长的模式系统和机理。

Sf1,Wnt和cAMP信号通路协同参与抑制素α基因转录的调控

抑制素仪是抑制素组成性蛋白的亚基之一．它广泛表达于睾丸、卵巢和肾上腺．敲除抑制素α亚基的雄性小鼠常具有性腺基质细胞瘤的表型，这提示，抑制素α亚基可能在性腺发育过程中发挥重要的作用．据报道，类固醇生成因子1（Sf1）能与Wnt或cAMP信号通路协同诱导抑制素α亚基的表达，然而Sf1，Wnt和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基表达的分子机制仍然未知．本研究发现，cAMP和wnt信号通路对于协同Sf1转录调控抑制素α亚基的表达是至关重要的．抑制素α亚基启动子上的CRE位点（cAMP反应元件）的特异突变，能够完全消除Sf1和wnt信号通路的协同调控作用．本研究还发现，cAMP信号通路参与的协同调控抑制素α亚基的表达是通过CRE结合蛋白（CREB-1）介导实现的．利用CREB-1特异的shRNA敲降CREB-1的蛋白水平，能够消除cAMP信号通路参与的协同调控抑制素α亚基的表达．此外，特异的突变Sf1蛋白配体结合域（LBD区）的氨基酸残基235—238能够影响Sf1和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基的转录表达，这表明，Wnt信号通路参与了Sf1和cAMP信号通路协同调控抑制素α亚基转录表达的过程．