蝎毒多肽提取物促进环磷酰胺抑制Lewis肺癌的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物增强环磷酰胺抗肿瘤的机制。方法建立小鼠Lewis肺癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组(模型组)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组、蝎毒多肽提取物(polypeptideextract from scorpion venom,PESV)组和联合组(CTX+PESV组),每组10只。记录肿瘤生长曲线,并采用逆转录PCR法和免疫组织化学法检测肿瘤微环境中免疫抑制因子血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化,采用免疫荧光化学法检测肿瘤组织中树突细胞(dendritic cells,DCs)表型CD80、CD86的表达变化。结果连续治疗21天后,联合组Lewis肺癌移植瘤的生长明显抑制(P<0.05);与模型组相比较,PESV组中CD80、CD86的表达有所增强,而CTX组中CD80、CD86的表达有所下降,联合组与CTX组相比强度和表达量均有所增加;与模型组比较PESV组和CTX组TGF-β1和VEGF-A mRNA表达量均降低(均P<0.05);与PESV组和CTX组比较,联合组TGF-β1和VEGF-A的mRNA表达量均降低(P<0.05)。结论 PESV可抑制Lewis肺癌中VEGF-A和TGF-β1的表达,促进DC的成熟,恢复其抗原摄取提呈功能,逆转CTX对机体的免疫损伤,从而起到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

ATRA促进DDP对肺腺癌细胞A549凋亡作用机制的研究

探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对顺铂(cisplatin,DDP)抑制肺腺癌细胞株(A549)增殖的影响及其机制。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)以及流式细胞术检测DDP、ATRA处理前后A549凋亡率及维甲酸受体-β(retinoic acid receptorβ,RARβ)mRNA、凋亡抑制蛋白Survivin mRNA的转录情况。结果表明DDP对A549有抑制作用,且呈剂量依赖性。ATRA小于0.4 mmol/L抑制作用不明显,ATRA达到0.4 mmol/L及更高浓度时,抑制作用显著,且呈剂量依赖性。qRT-PCR结果显示DDP组RARβmRNA及Survivin mRNA均降低。ATRA组RARβmRNA增加,而Survivin mRNA降低;联合用药组较空白组RARβmRNA降低,较DDP组RARβmRNA提高,而Survivin mRNA均降低。流式结果显示联合用药组较单独用药组凋亡率明显增高。ATRA上调RARβ并下调Survivin,提高A549化疗敏感性,强化DDP化疗作用。

蝎毒多肽提取物对化疗期间再增殖H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的影响

目的:研究化疗期间再增殖中H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的变化及蝎毒多肽提取物(polypep-tide extract from scorpion venom,PESV)对其表达的影响,以探讨肿瘤组织再增殖期间新生血管生成发生的机制。方法:以免疫组织化学方法检测化疗期间不同时间点肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4的表达,以ELISA方法检测肿瘤组织SDF-1的含量,以Qwin V3图像分析软件对肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4表达进行分析,并进行相关性分析。结果:模型组肿瘤组织HIF-1α表达在第14天和第21天无差异性,在第28天表达水平显著升高;PESV低剂量组在3个时间点表达无差异性,而PESV高剂量组表达在第21天最低,在第14天最高,ELSA检测结果显示,荷瘤对照组表达逐渐增多,尤其是在第14～21天,增加迅速。模型组,SDF-1表达在14～21 d表达增加缓慢,但在21～28 d增加迅速;PESV高、低剂量组SDF-1表达水平增加缓慢,尤其是高剂量组,3个时间点肿瘤组织表达水平差异无显著性。免疫组织化学检测SDF-1结果和ELISA一致。对HIF-1α和SDF-1灰度值分析结果显示,r=0.805,两者存在相关性。PESV低、高剂量组肿瘤组织CXCR4下调,但PESV低、高剂量组之间无差异性。结论:在化疗期间肿瘤组织产生HIF-1α,HIF-1α诱导间质组织分泌SDF-1,HIF-1α和SDF-1促进VEGF的表达上调,从而诱发肿瘤内新生血管的生成。PESV有效抑制HIF-1α和SDF-1的表达。

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV_3细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法检测PESV对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞术观察PESV对细胞周期的影响,免疫组织化学方法(IHC)检测PESV干预后,Survivin,Capase-12及p27蛋白水平表达的变化,Westernblot检测survivin蛋白含量水平。结果:MTT结果显示,PESV在40 mg.L-1以上对卵巢癌SKOV3细胞增殖有抑制作用(浓度为40 mg.L-1时,增殖抑制率为34.66%),且随剂量加大作用增大,呈现剂量效应关系;流式细胞术检测细胞周期显示,PESV干预后,处于S期的细胞减少,处于G0/G1期的细胞增多;免疫组织化学检测显示:PESV干预后,SKOV3细胞p27表达上调,表达Survivin的肿瘤细胞减少,而表达Caspase-12的细胞显著增加。DDP干预后,仅发现Caspase-12的细胞表达增加。Western blot检测结果显示,PESV组survivin蛋白表达量下降。结论:PESV对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,其机制是通过抑制细胞增殖周期进行及促进细胞凋亡。

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子与树突细胞的关系

血管内皮生长因子（VEGF）是重要的肿瘤细胞生长因子之一，其可以抑制树突细胞（DC）的分化成熟，诱导成熟DC功能障碍，而DC亦可通过自分泌VEGF加重自身的功能障碍，从而介导肿瘤细胞逃逸免疫监视。因此VEGF和DC的相互关系与非小细胞肺癌（NSCLC）的分化程度、淋巴结转移、临床分期密切相关。二者关系可为临床NSCLC的治疗提供相应理论依据。