Alamandine对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

目的探讨Alamandine对CCL4诱导的肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用及相应的分子机制。方法选取18只Wistar雄性大鼠,随机分为对照(Contorl)组、CCL4组和CCL4+Alamandine组。对照组Wistar雄性大鼠腹腔内以2 ml/kg的剂量注射橄榄油,每两周注射一次;CCL4组Wistar雄性大鼠腹腔内以2 ml/kg的剂量注射浓度为40%溶于橄榄油的CCL4,每两周注射一次;CCL4+Alamandine组:CCL4制作肝纤维化模型,在腹腔埋入注射泵并以25μg·kg^-1·h^-1的速度持续注射Alamandine。4周后处死大鼠,取肝组织,行HE染色,进行肝纤维化评分;Masson胶原染色,测定胶原的表达;通过免疫组织化学染色、免疫印迹(Western blot)、组织免疫荧光染色检测血管生成的指标:血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF),血管内皮细胞生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)。结果与Contorl组相比,CCL4组肝纤维化评分,胶原面积,免疫组织化学检测vWF、VEGFA的表达,Western blot检测vWF、VEGFA的表达均明显增高(P均<0.01);免疫荧光检测CCL4组肝组织vWF、VEGFA阳性表达细胞较Contorl组明显增多。与CCL4组相比,CCL4+Alamandine组肝纤维化评分,胶原面积,免疫组织化学检测vWF的表达、VEGFA的表达,Western blot检测vWF的表达、VEGFA的表达均显著下降(P均<0.05);免疫荧光检测CCL4+Alamandine组vWF、VEGFA阳性表达的细胞较CCL4组明显减少。结论Alamandine可抑制肝纤维化大鼠肝窦血管生成。

腹腔持续注射血管紧张素-(1-7)对胆管结扎大鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对胆管结扎(BDL)大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 18只Wister雄性大鼠随机分为假手术(SHAME组)组,BDL组和Ang-(1-7)治疗组。假手术组:行开腹术再关腹,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;BDL组:开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;Ang-(1-7)治疗组:BDL建立肝纤维化模型,同时在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射Ang-(1-7)。4周后宰杀动物、取肝组织,行Masson胶原染色,肝纤维化评分,测定羟脯氨酸含量,免疫组织化学检测α-肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与BDL组相比,Ang-(1-7)治疗组肝纤维化评分(2.33±0.52 vs 5.17±0.75)、胶原面积(23.71±3.43 vs 89.77±9.92)、羟脯氨酸含量(0.36±0.03 vs 0.52±0.04)、α-SMA的表达(54.11±17.55 vs 191.84±31.72)均减少,有统计学意义(P<0.01)。结论Ang-(1-7)对胆总管结扎所致的肝纤维化具有抑制作用。

螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

目的探讨螺内酯对肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用。方法雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,每组8只大鼠。分组如下:假手术组(Sham组);胆总管结扎组(BDL组),予行胆总管结扎术;螺内酯治疗组(BDL+SP组),于手术后第2天给予螺内酯20 mg/kg灌胃处理,1次/d。于4周后取材。Masson三色染色检测胶原和大鼠的肝组织学改变。运用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-qPCR)检测各组血管内皮生长因子A(VEGF-A)mRNA的表达。运用免疫组织化学技术检测各组血管性假血友病因子(vWF)的表达。结果 BDL+SP组纤维化程度较BDL组低[(2.84±0.44)vs(19.73±3.54),P=0.00],差异有统计学意义;免疫组织化学结果显示:BDL组vWF表达较Sham组增高[(3.08±0.17)vs(0.98±0.11),P=0.00],BDL+SP组较BDL组表达下降[(1.15±0.09)vs(3.08±0.17),P=0.00],差异有统计学意义;在BDL组VEGF-A mRNA的表达增加,BDL+SP组则表达下降[(0.71±0.12)vs(1.75±0.15),P=0.00],差异有统计学意义;且各分组中VEGF-A mRNA的表达与vWF表达呈现显著正相关关系(r=0.890,P=0.000)。结论螺内酯通过抑制肝脏VEGF-AmRNA的表达抑制肝窦毛细血管生成。

脂多糖通过NOD样受体蛋白3炎症小体通路诱导大鼠急性肝损伤实验研究

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肝损伤的机制。方法:对SD大鼠腹腔注射10 mg/kg LPS 24 h后,比较对照组(3只)与LPS组(3只)大鼠外周血转氨酶水平;取肝组织制片后HE染色观察两组大鼠肝组织有无损伤;免疫组化检测两组大鼠肝组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)与凋亡相关微粒蛋白(ASC)表达情况。另取健康SD大鼠分离肝细胞进行原代培养,设空白对照组、L-LPS组和H-LPS组,分别在含0、100、1000 ng/ml LPS的培养基中培养24 h,测定各组细胞增殖与凋亡情况,并采用PCR与Western blot测定各组细胞NLRP3、ASC及白介素-1β(IL-1β)mRNA及蛋白表达情况。结果:LPS组大鼠注射LPS 24 h后,血液转氨酶水平较对照组明显升高(均P<0.05);肝组织HE染色显示LPS刺激可导致大鼠急性肝细胞损伤;肝组织免疫组化染色结果显示NLRP3、ASC蛋白表达阳性。各组肝原代细胞受到LPS刺激后,增殖率均有所降低,凋亡率均有所升高,且H-LPS组细胞增殖率低于L-LPS组,细胞凋亡率高于L-LPS组(均P<0.05);各组肝原代细胞NLRP3、ASC、IL-1βmRNA与蛋白表达量均明显增加,且H-LPS组均高于L-LPS组(均P<0.05)。结论:LPS刺激会造成大鼠急性肝损伤,其机制可能与上调肝组织中NLRP3炎症小体通路有关。

氯沙坦降低小鼠呼吸机相关性肺损伤及抑制肺组织内小窝蛋白-1及NOX_4的表达

目的利用呼吸机过度通气建立小鼠机械性肺损伤模型,以血管紧张素II受体抑制剂氯沙坦进行干预,探讨氯沙坦对机械通气性肺损伤小鼠肺内小窝蛋白-1及氧化应激相关蛋白的调节。方法 36只雄性C57小鼠随机分为对照组、机械通气组、单纯药物对照组和治疗组,建模完成后分别检测各组小鼠急性肺损伤情况以及相关蛋白的表达和相互作用。结果机械通气组小鼠肺损伤Smith评分3.3,明显高于对照组(0.4)和单纯药物对照组(0.3),治疗组Smith评分2.3,较机械通气组明显降低(P<0.05);机械通气组小鼠肺组织内小窝蛋白-1和NOX4蛋白表达明显高于对照组及单纯药物对照组(P<0.05),荧光共染可见小窝蛋白-1及NOX4发生荧光重合,治疗组小鼠肺组织内上述蛋白表达较机械通气组明显降低(P<0.05),荧光共染提示小窝蛋白-1及NOX4荧光重合区域较机械通气组减少。结论在机械通气诱导的小鼠急性肺损伤模型中,氯沙坦可缓解机械通气诱导的肺损伤并抑制小窝蛋白-1及NOX4的表达及相互趋近作用。

醛固酮通过ROS/NLRP3/Smad通路促进肝纤维化研究

目的本研究拟证明醛固酮通过ROS活化NLRP3/IL1-β/Smad通路,促进肝纤维化发生。方法建立野生型及NLRP3敲除小鼠CCL 4肝纤维化模型,检测各模型中ROS,IL-1β,Smad2/3蛋白含量初步证明ROS、IL-1β、Smad2/3与肝纤维化发生相关。分离肝原代星状细胞,醛固酮刺激后分别加入醛固酮、ROS、IL-1β的抑制剂,检测下游蛋白水平改变。结果模型组中ROS、IL-1β、Smad2/3含量增加,抑制NLRP3基因可降低IL-1β、Smad2/3含量。醛固酮刺激原代星状细胞后ROS、NLRP3炎症小体、IL-1β、Ⅰ型胶原、α-SMA、Smad2/3含量增加,抑制醛固酮、ROS、IL-1β可以逆转上述结果。结论醛固酮通过ROS活化NLRP3炎症小体/IL-1β通路,通过P-Smad2/3促进肝纤维化发生。

艾烟空气消毒的应用现状及预防疫病作用机理探讨

通过燃烧艾材防治瘟疫在我国已有深远的历史,并在各个历史时期发挥积极作用。现代研究表明,艾烟中的多种生物活性成分,具有抗菌、抗病毒的作用。本文通过对艾烟消毒效果、有效成分进行综述,并针对细菌、病毒等有害微生物的致病特点和传播途径,探讨艾烟空气消毒,预防感染的作用机理。以期为合理规范应用艾烟进行空气消毒提供理论依据与参考。

热敏灸治疗不同病因咳嗽疗效Meta分析

目的:系统评价热敏灸治疗不同病因所致咳嗽的有效性。方法:通过检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、万方学术期刊全文数据库(WanFang)等中文数据库及PubMed、Cochrane Library等外文数据库,查找收集自建库以来至2020年7月的热敏灸治疗或改善咳嗽症状的临床对照试验,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入8篇文献,616例患者。Meta分析结果显示热敏灸联合其他中西医疗法改善咳嗽症状的临床有效率优于单纯使用西药或其他中医疗法[OR=4.72,95%CI(2.53,8.80),P<0.00001]。进一步分析显示:热敏灸联合西药疗法疗效优于单纯使用西药[OR=4.22,95%CI(1.70,10.50),P<0.00001];热敏灸联合其他中医疗法(中药方剂、推拿、"三伏灸")疗效优于单纯使用其他中医疗法[OR=7.54,95%CI(2.10,27.11),P=0.002];热敏灸联合中医疗法(针刺、中药方剂)疗效优于单纯使用西药[OR=7.54,95%CI(2.10,27.11),P=0.002],差异均有统计学意义。热敏灸参与治疗方案能够降低咳嗽中医证候积分[SMD=-0.75,95%CI(-1.00,-0.49),P<0.00001],改善CSS评分[MD=-0.49,95%CI(-0.74,-0.24),P=0.0001],疗效优于不包含热敏灸的对照组,差异具有统计学意义。结论:热敏灸疗法对于治疗不同病因所致咳嗽皆具有一定的疗效,能降低咳嗽发作频率和剧烈程度,提高患者生活质量,是良好的辅助治疗手段,但仍需更多样本、设计更为严谨、方法更为科学的高质量随机对照试验进一步验证。

血管紧张素（1—7）对胆管结扎诱导的肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用

目的探讨血管紧张素（1-7）（Ang（1—7））对胆管结扎所致肝纤维化大鼠肝窦血管生成的抑制作用及相应的分子机制。方法将18只Wistar雄性大鼠随机分为假手术（SHAM）组，胆总管结扎（BDL）组和Ang（1—7）治疗组。假手术组：行开腹术再关腹，在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-1。的速度持续注射等渗盐水；BDL组：开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型，同时在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-2的速度持续注射等渗盐水；Ang（1—7）治疗组：BDL建立肝纤维化模型，同时在腹腔埋注射泵，以25μg·kg-1·h-1的速度持续注射Ang（1—7）。4周后宰杀动物，取肝组织，行苏木素一伊红染色，进行肝纤维化评分；Masson胶原染色，测定胶原的表达；利用免疫组织化学，免疫印迹（Westernblot），组织免疫荧光检测血管生成的标志：血管性血友病因子（vwF），血管内皮细胞生长因子A（vEGFA），血小板一内皮细胞黏附分子CD31的表达。根据资料不同采用One-wayANOVA检验、LSD法、Welch法、Durmett’s T3法、t检验或相关性分析。结果研究结果显示：在BDL组中，与SHAM组相比，肝纤维化评分（4．83±0．75对比0．00±0．00，Ｐ=0．000）、胶原面积（87．27±5．33对比0．98±0．11，P=0．000）、免疫组织化学检测vWF的表达（灰度值3．11±0．3对比1．00±0．07，Ｐ=0．000）、VEGFA的表达（灰度值8．38±1．64对比1．00±0．08，Ｐ=0．003）、CD31的表达（灰度值3．05±0．44对比1．00±0．12，P=0．000），Westernblot检测vWF的表达（灰度值0．380±0．008对比0．270±0．007，P=0．000）、VEGFA的表达（灰度值0．270±0．005对比0．120±0．002，P=0．007）、CD31的表达（灰度值0．350±0．008对比0．060±0。004，P=0．000）均明显增高，差异有统计学意义护值均〈0．01）；免疫荧光检测BDL组肝组织vWF、VEGFA、CD31阳性表达细胞较SHAM组明显增多。与BDL组相比，Ang（1—7）治疗组中肝纤维化评分（2．50±0．55对比4．83±0．75，P=0．000）、胶原面积（24．46±3．45对比87．27±5．33，P=0．000）、免疫组织化学检测vWF的表达（灰度值1．60±0．06对比3．11±0．30，P=0．000）、VEGFA的表达（灰度值4．68±0．58对比8．38±．64，P=0．037）、CD31的表达（灰度值1．42±0．12对比3．05±0．44，P=0．009），Westernblot检测vWF的表达（灰度值0．190±0．007对比0．380±0．008，P=0．000）、vEGFA的表达（灰度值0．120±0．006对比0．270±0．005，P=0．000）、CD31的表达（灰度值0．130±0．006对比0．350±0．008，P=0．000）均显著下降，差异有统计学意义（P值均〈0．01）；免疫荧光检测Ang（1-7）治疗组vWF、VEGFA、CD31阳性表达的细胞较BDL组明显减少；各分组中VEGFA的表达与vwF表达呈现显著正相关关系（r=0．956，P=0．000）。结论Ang（1—7）可抑制BDL诱导肝纤维化大鼠肝窦血管生成。

血管紧张素（1—7）对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞表达结缔组织生长因子的抑制作用

目的探讨血管紧张素（Ang）（1-7）对AngⅡ诱导的肝星状细胞（HSC）表达结缔组织生长因子（CTGF）的抑制作用及其机制。方法培养人HSC细胞系（LX2细胞），以AngⅡ刺激24h，分别予以AngⅡ1型受体阻断剂irbesartan、ROCK抑制剂Y27632预处理1h。设立AngⅡ＋Ang（1—7）处理组，观察Ang（1—7）对AngⅡ的抑制作用；Mas受体拮抗剂A779阻断Mas受体，观察对Ang（1—7）抑制效应的阻断作用。利用Western blot、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和多基因定量检测系统检测RhoA、ROCK2 mRNA，结缔组织生长因子（CTGF）蛋白和mRNA的表达。结果研究结果显示AngⅡ刺激后，RhoA蛋白（0．87±0．093对比0．337±0．074）、ROCK2mRNA（0．747±0．061对比0．163±0．024）、CTGFmRNA（0．578±0．028对比0．262±0．007）相对表达量与对照组相比显著增高，差异有统计学意义（P值均〈0．01）；irbesartan（RhoA蛋白：0．558±0．030对比0．87±0．093；ROCK2mRNA：0．368±0．023对比0．747±0．061；CTGFmRNA：0．309±0．019对比0．578±0．028）、Y27632（RhoA蛋白：0．564±0．067对比0．87±0．093；ROCK2mRNA：0．218±0．046对比0．747±0．061；CTGFmRNA：0．340±0．020对比0．578±0．028）预处理组上述基因或蛋白相对表达量显著减低，差异有统计学意义（P值均〈0．01），Ang（1-7）单独处理组RhoA蛋白（0．449±0．035对比0．337±0．074）及CTGFmRNA（O．256±0．008对比0．262±0．007）与对照组相比无明显改变，差异无统计学意义（P值均〉0．05）；但是Ang（1-7）可抑制AngⅡ诱导的上述基因或蛋白表达的增高（RhoA蛋白：0．615±0．034对比0．87±0．093IROCK2mRNA：0．403±0．040对比0．747±0．061；CTGFmRNA：0．265±0．011对比0．578±0．028），差异有统计学意义护值均〈0．01）；Mas受体拮抗剂A779可以阻断Ang（1-7）对AngⅡ的抑制作用（RhoA蛋白：0．929±0．076对比0．615±0．034；ROCK2mRNA：0．720±0．054对比0．403±0．040fCTGFmRNA：0．568±0．029对比0．265±0．011），差异有统计学意义垆值均〈0.01）。结论AngⅡ通过RhoA-ROCK通路促进人HSC表达CTGFmRNA；Ang（1—7）与其Mas受体结合后对AngⅡ激活的CTGFmRNA的表达具有抑制作用。

醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用

目的探讨醛固酮拮抗剂对肝纤维化大鼠NOX4蛋白表达的抑制作用。方法体内实验：雄性Wistar大鼠24只，随机分为3组，每组8只。模型组：用四氯化碳（CCl4）油2．5ml／kg皮下注射，3次／周;安体舒通组：CCl4油注射的同时予以安体舒通20mg／kg灌胃，1次／d；对照组：用橄榄油皮下注射，于4周后处死实验动物取材。用HE染色观察肝组织形态结构；Masson染色进行METAVIR肝纤维化评分；免疫组织化学法检测NOX4蛋白的表达。体外实验：将大鼠HSC-T6细胞株与不同剂量的醛固酮（10-9、10-7、10-5 mol／L，观察剂量效应）作用不同时间（6、12、24h）以观察时间效应。给予醛固酮（Aid）1μ mol／L、依普利酮1μmol／L预处理60min，再给予Ald刺激大鼠HSC-T6细胞，设立阴性对照组。Western blot方法检测NOX4蛋白的表达。采用One-wayA NOVA方差分析法，首先用Levene方法进行方差齐性检验，确定方差齐且整体比较组间差异有统计学意义后进一步做多重比较，多重比较采用LSD法。结果CCl4,组纤维化程度较对照组明显增高（相对表达量为16．060±0．300比2．471±0．160），两组比较，差异有统计学意义。CCl4,＋Sp组纤维化程度较CCl4组低（相对表达量为5．761±0．152比16．060±0．300），两组比较，差异有统计学意义。免疫组织化学结果显示，与对照组相比，CClt组NOX4蛋白表达明显增高（相对表达量为7．231±0．211比1．350±0．252），两组比较，差异有统计学意义。与CCl4组相比，CCl4＋Sp组NOX4蛋白表达下降（相对表达量为4．270±0．242比7．231±0．211），两组比较，差异有统计学意义。Aid刺激HSC-T6细胞后NOX4蛋白表达增强，并呈时间、浓度依赖性，在10-5mol／L浓度刺激24h达到峰值，与对照组相比，Aid组NOX4表达明显增加（相对表达量为0.710±0。011比0．316±0．015），两组比较，差异有统计学意义。与Ald组相比，Ald＋依普利酮组NOX4的表达减少（相对表达量为0．615±0．014比0．710±0．011），两组比较，差异有统计学意义。结论醛固酮拮抗剂通过抑制Ald诱导的氧化应激效应抑制肝纤维化大鼠NOX4蛋白的表达。