可注射吸水膨胀性排龈膏的制备与排龈效果评价

目的研制一种新型可注射、吸水膨胀性排龈材料的膏剂。方法将吸水膨胀性高分子载体基质与高岭土、氯化铝等药物机械混合,获得一种膏剂材料。采用ExpasylR作为对照,体外评价其在水中的稳定性和吸水膨胀性能,通过动物实验评价其排龈效果。结果新型排龈膏体外吸水膨胀,但是可以维持结构的完整性,不会崩解。动物实验也显示无论在牙龈高度退缩和龈沟宽度变化方面都有良好的排龈效果。结论获得一种新型的具有良好应用前景的可注射吸水膨胀性、遇水不崩解的排龈材料。

一种釉质特异性生物矿化模板的构建

目的构建一种自组装类釉原蛋白两亲性寡肽,作为釉质仿生矿化的有机模板。方法依据釉原蛋白分子在釉质形成中自组装成"纳米球"超分子结构的机制,参照目前"自组装多肽类生物材料"的设计特点,通过对釉原蛋白分子功能性残基进行改性,构建"类釉原蛋白两亲性寡肽"生物矿化模板,采用固相合成法合成并纯化,经质谱仪、高效液相色谱仪等鉴定。在寡肽溶液中加入1 mol/L的CaCl2溶液观察其能否自组装;将组装后的寡肽涂于透射电镜的铜网上,用2.5%的戊二醛固定1 h后先置于常温或40℃下10 mmol/L的CaCl2溶液中1 h,去离子水漂洗后再置于5 mmol/L的Na2HPO4溶液中1 h,5个循环后取出自然干燥,通过扫描电镜(SEM),透射电镜(TEM)及选区电子衍射(SAEDS)观察表征。结果类釉原蛋白两亲性寡肽序列为C18H35O-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp,高效液相色谱仪(HPLC)示多肽纯度为98.29%,质谱仪(MS)示肽的分子质量为1 142.41 u。通过Ca2+可使其自组装为纳米纤维超微结构的凝胶态。通过交替矿化发现组装后的类釉原蛋白两亲性寡肽能摄取溶液中的钙磷离子,在寡肽纳米纤维表面成核矿化,形成磷灰石晶体。结论成功构建了一种类釉原蛋白两亲性寡肽,可以作为釉质仿生的特异性生物矿化模板,用于诱导釉质再矿化研究。

类釉原蛋白寡肽仿生修饰钛表面的研究

目的探讨钛表面固定具有诱导仿生矿化作用的活性寡肽,及其细胞相容性。方法利用生物化学方法制备类釉原蛋白寡肽/聚多巴胺修饰的纯钛片,使用扫描电镜、傅立叶变换红外光谱仪对修饰前后的钛片进行分析。全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),将第3代BM-SCs与不同修饰的钛片共培养,采用荧光染色、细胞计数试剂盒(CCK)-8检测法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测评价此种修饰对BMSCs生长、增殖及分化的影响。结果类釉原蛋白寡肽/聚多巴胺共聚物已成功接枝到碱热处理后的钛片上,聚多巴胺预修饰及其与类釉原蛋白寡肽共同修饰的钛片对BMSCs生长、增殖及分化无明显影响,修饰后的钛片与BMSCs具有较强的亲和力。结论类釉原蛋白寡肽/聚多巴胺共价接枝有望成为一种合适的钛表面仿生修饰方法,这为研究钛及其合金在复杂的生理环境中实现仿生矿化奠定实验基础。

MT1-MMP miRNA干扰载体的构建及沉默效果评价

目的:构建膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)基因miRNA干扰载体,检测其对靶基因的沉默效率。方法:设计4种MT1-MMP基因特异性miRNA寡聚单链DNA,利用载体构建试剂盒构建MT1-MMP基因特异性干扰质粒,挑选阳性克隆,测序无误后扩增,表明载体构建成功。抽提干扰质粒,用脂质体2000转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR法检测干扰载体对靶基因的干扰效果。结果:本实验成功构建了MT1-MMPmiRNA干扰载体,筛选出最有效的干扰载体X173-4,并检测出其对靶基因的沉默效率可达到75%。结论:本实验结果为进一步研究MT1-MMP在口腔癌侵袭转移机制中的作用提供实验基础。

釉质仿生矿化模型的研究

目的:构建釉质生物矿化的模型,包括有机基质模板(类釉原蛋白寡肽序列)的建立和无机离子供体(包裹钙磷离子的温度敏感性脂质体)的合成,体外实现类釉质样结构的再矿化。方法:首先通过标准固相法合成所需"类釉原蛋白"寡肽[(Gln-Pro-Ala)4-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp],并用CaCl_2溶液诱导其进行自组装;其次采用二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻卵磷脂为原料,通过相交融合法分别合成包裹钙、磷离子的温度敏感性脂质体;最后在37℃时,将酸蚀后的牙片浸泡在包裹钙、磷离子的脂质体与寡肽的混悬液中,作为实验组。将酸蚀后的牙片浸泡在包裹钙磷离子的脂质体混悬液中,作为对照组,促进脱矿后的釉质再矿化。矿化后的牙片通过扫描电镜(SEM)、傅立叶变换红外光谱仪(FTIR)和X射线衍射仪(XRD)进行表征。结果:实验组的脱矿釉质表面均匀有序的沉积了一层釉质样的羟基磷灰石晶体(HA)结构,而对照组只沉积了较少量无序的HA晶体。结论:通过类釉原蛋白寡肽有机矿化模板的建立,以及仿生釉质矿化过程中钙、磷离子的输送,构建了釉质仿生矿化模型,并实现了脱矿釉质表面类釉质样微结构的再生。

pEGFP-N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的:构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达。方法:利用RT-PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序。重组质粒双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT-PCR检测Snail在该细胞中表达。结果:本实验成功构建了pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达。结论:本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础。

直流电场辅助琼脂凝胶矿化体系诱导类釉质微结构再生的扫描电镜观察

目的:体外构建釉质矿化模型,在脱矿的釉质表面重建类釉质晶体结构。方法:将特制的Y型三通管底端封闭,从上端加入含有CaCl2的琼脂凝胶,脱矿的釉质片放在其表面,同时在牙片表面覆盖CaCl2琼脂和纯琼脂凝胶,再加入含或不含氟的Na2HPO4溶液,并连接阴极;三通管侧端加入CaCl2溶液,并连接阳极,施加40 mA直流电场。分别在不同的矿化时间,取出釉质片,进行场发射扫描电镜观察。结果:在不加电流情况下,不含氟离子时,在脱矿的釉质表面形成了少量且不均匀的条带状晶体;含有氟离子时,在脱矿的釉质表面形成了六边形的且层层密集堆积的片状晶体。在直流电场情况下,不含氟离子时,在釉质表面沉积的晶体量增多,晶体的形态也发生改变为片状晶体;在含有氟离子时,脱矿釉质表面形成了棒状的晶体且相互平行排列,类似釉柱结构。结论:外加电场的载钙磷氟离子的琼脂凝胶矿化体系可以仿生釉质矿化的过程,可使脱矿的釉质表面沉积类似釉柱样的晶体结构。

[牙合]垫式可摘局部义齿修复重度磨耗伴牙列缺损患者的临床应用

目的:探讨重度磨耗伴牙列缺损患者直接行[牙合]垫式可摘局部义齿咬合重建修复的可行性。方法:选择2018年9月~2021年12月在弋矶山医院口腔医学中心就诊的重度磨耗并伴有不同程度牙列缺损的患者10例,采用[牙合]垫式可摘局部义齿完成咬合重建修复。对修复前、义齿修复1、6个月后的患者满意度和咀嚼效率进行比较并统计分析。结果:患者修复后1、6个月的咀嚼效率均高于修复前(P<0.05),而患者修复后1、6个月的咀嚼效率差异无统计学意义(P>0.05);8位患者对[牙合]垫式可摘局部义齿修复效果满意。结论:对于重度磨耗伴牙列缺损患者采用[牙合]垫式可摘局部义齿可有效恢复患者口颌系统的健康,提高生活质量。