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胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬
1
作者
刘娟
欧翔
+4 位作者
刘情
郭淼
宁子萍
顾洪丰
唐雅玲
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期202-214,共13页
目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预...
目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色检测细胞内脂质蓄积;蛋白质印迹(Western blot)检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察脂滴(Bodipy示踪)与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位;透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化;胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较,pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加,p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高,LC3II蛋白减少和p62蛋白增加,脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少,细胞内的脂滴数量显著增加,自噬体和脂噬泡的数量则明显减少,ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而,胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬,ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。
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关键词
酸敏感离子通道1
胞外酸化
动脉粥样硬化
脂噬
受体相互作用蛋白1
转录因子EB
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职称材料
题名
胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬
1
作者
刘娟
欧翔
刘情
郭淼
宁子萍
顾洪丰
唐雅玲
机构
南华大学基础医学院生理学教研室
南华大学附属长沙中心医院内分泌科
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期202-214,共13页
基金
国家自然科学基金(81500349)
湖南省自然科学基金(2022JJ30509)
湖南省教育厅面上重点项目(21A0273,23A0333)资助。
文摘
目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色检测细胞内脂质蓄积;蛋白质印迹(Western blot)检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察脂滴(Bodipy示踪)与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位;透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化;胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较,pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加,p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高,LC3II蛋白减少和p62蛋白增加,脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少,细胞内的脂滴数量显著增加,自噬体和脂噬泡的数量则明显减少,ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而,胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬,ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。
关键词
酸敏感离子通道1
胞外酸化
动脉粥样硬化
脂噬
受体相互作用蛋白1
转录因子EB
Keywords
ASIC1
extracellular acidification
atherosclerosis
lipophagy
RIP1
TFEB
分类号
R363.13 [医药卫生—病理学]
R329.26 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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作者
出处
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1
胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬
刘娟
欧翔
刘情
郭淼
宁子萍
顾洪丰
唐雅玲
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2024
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