参附注射液和高乌甲素对小鼠肝癌细胞H22生长抑制及诱导凋亡作用

目的研究比较高乌甲素注射液和参附注射液对小鼠肝癌细胞株生长抑制及凋亡诱导作用。方法苔盼蓝计数,四甲基偶氮唑盐(MTT)法,流式细胞仪技术分析药物对细胞周期和凋亡指数的影响,琼脂糖电泳技术分析药物对DNA作用。结果氢溴酸高乌甲素注射液对H22作用、细胞数量与形态无明显影响;参附注射液可明显抑制小鼠肝癌H22的生长,细胞表现典型的凋亡形态,在浓度为50 mL/L时,出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳检测出现DNA ladder。结论参附注射液体外能抑制小鼠肝癌H22细胞株的增殖和诱导细胞凋亡,高乌甲素注射液体外对H22细胞的生长、凋亡没有影响。

参附注射液、高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的研究

【目的】观察参附注射液及高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的作用,初步验证温阳法治疗肿瘤的理论。【方法】采用人类急性白血病细胞株HL-60为模型,设参附注射液组(终浓度分别为12.5、25、50、100μL/mL),高乌甲素组(终浓度分别为25、50、100μL/mL),亚砷酸钠对照组(终浓度分别为0.25、2、15μmol/L)及阴性对照组;检测细胞增殖、细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞周期分布、凋亡率等指标。【结果】参附注射液作用后HL-60细胞增殖受抑制,高乌甲素注射液对HL-60的生长无抑制作用;经药物处理60 h后HL-60细胞均出现程度不同以凋亡为主的形态改变;低浓度参附注射液(12.5μL/mL)、高乌甲素注射液(50μL/mL)作用60 h后HL-60细胞NBT还原能力增强,而其他浓度组NBT还原能力反未增强;药物处理60 h后,100μL/mL高乌甲素液及25.50μL/mL参附液流式细胞仪检测直方图上呈现亚二倍体凋亡峰,凋亡率呈不同程度增高。【结论】参附注射液、高乌甲素注射液对人类急性白血病细胞株HL-60具有不同程度的诱导分化和凋亡的双重作用,为温阳法治疗肿瘤提供了一定的理论依据。

丹参素钠对大鼠肝癌细胞及自杀基因旁观者效应的影响

目的:探讨丹参素钠对大鼠肝癌细胞及自杀基因旁观者效应影响。方法:丹参素钠与丙氧鸟苷(GCV)分别或共同作用于大鼠肝癌CBRH7919的tk-细胞,以及含5%tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,MTT检测各组存活率,两两比较各组存活率的差异,用q值分析药物与自杀基因系统联合的相互作用是否为协同性。结果:丹参素钠12.5、25、50、100 mg/L作用于CBRH 7919细胞72h存活率分别为87.8±12.4%、46.0±6.4%、20.2±4.6%、8.9±1.2%;IC50为24mg/L。10mg/L和50mg/L组的丹参素钠联合5%tk+/GCV组的细胞存活率比单纯丹参素钠或单纯自杀基因组明显低,两两比较差异有统计学意义(P<0.05),q值均>1.15。结论:丹参素钠有明显抑制癌细胞生长作用,并能协同性增强tk/GCV系统对癌细胞的杀伤作用,增强自杀基因旁观者效应。

大黄素、黄芩苷和木犀草素对大鼠肝癌细胞的影响

目的研究大黄素、黄芩苷和木犀草素对大鼠肝癌细胞株CBRH7919的体外抑制作用。方法 MTT发检测大黄素、黄芩苷和木犀草素对大鼠肝癌细胞株CBRH7919的体外抑制作用,甲基绿-派诺宁染色凋亡形态学观察,DNA琼脂糖凝胶电泳法观察三者对CBRH7919细胞DNA损伤的作用。结果大黄素和木犀草素对CBRH7919有较强抑制作用,48h IC50分别为18μmol/L、26μmol/Lol/L,黄芩苷作用48h IC50为160μmol/L,抑制作用不强;甲基绿-派诺宁染色和DNA琼脂糖凝胶电泳法提示,木犀草素作用48h后,细胞可能发生自噬,而不是凋亡,大黄素作用48h后,细胞显示典型的凋亡特征。结论大黄素和木犀草素对大鼠肝癌细胞株CBRH7919有体外抑制作用,其作用机制值得进一步探讨。

吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的:探讨吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞H22的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响。方法:体外试验MTT法测存活率,甲基绿-派诺宁联合染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察DNA损伤及细胞周期。结果:吴茱萸碱0.5、1、2、4mg/L浓度组对小鼠肝癌细胞H22作用72h细胞存活率分别为60.3±6.6%、54.0±4.3%、40.7±4.8%、26.9±0.9%,作用24h、48h和72h的IC50依次为4.2、3.3和1.4mg/L。甲基绿-派诺宁染色后0.5、1mg/L吴茱萸碱组癌细胞均表现出凋亡特征;2mg/L吴茱萸碱组部分癌细胞开始出现坏死特征;4mg/L有较多癌细胞坏死。48h流式细胞仪检测表明1、2mg/L吴茱萸碱组出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2期,4mg/L吴茱萸碱组亚二倍体凋亡峰不典型,出现坏死单峰。凋亡率对照组为1.2、1、2和4mg/L吴茱萸碱分别为6.4、9.1和11.2%。48h琼脂糖凝胶电泳表明,4mg/L吴茱萸碱组细胞DNA裂成大片段,DNA损伤呈凋亡特征。结论:吴茱萸碱能诱导小鼠肝癌细胞H22的凋亡。

单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建

目的建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础。方法DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达载体pTKGFP,用酶切鉴定并进行序列测定;polyFect转染液对鼠黑色素瘤细胞B16进行转染,荧光显微镜观察基因表达情况,MTT法检测转化细胞B16对GCV的敏感性。结果重组质粒pTKGFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,TK基因已经成功与GFP基因连接,连接处无移码突变产生;荧光显微镜下观察显示,TK-GFP融合基因在B16中获得表达。其在细胞中的定位与文献资料一致,TKGFP主要集中于胞核区而GFP弥散分布于胞质中。TKGFP组细胞对GCV的敏感性大于对照组细胞,差异有显著性。结论构建了pTKGFP融合蛋白基因表达载体,并成功在B16中进行表达,所表达的融合蛋白具有TK活性和GFP的荧光活性,可用于后续性的体外与体内实验。

纯中药复方消癌根治疗小鼠移植性肝癌的实验研究

纯中药复方消癌根由化州市丽岗董草原中医诊所民间中医师董草原先生提供。据有关报道，该方对肝癌有较好的临床疗效。本项研究对复方消癌根治疗小鼠移植性肝癌进行了初步的实验探讨，主要研究其对小鼠移植性肝癌的生长抑制作用和生存期的影响。

纯中药复方消癌根小鼠急性毒理实验报告

消癌根为广东化州市丽岗肿瘤诊所中医师董草原先生的经验方,据有关报道该方对恶性肿瘤如肝癌、胃癌等有一定疗效.但未经毒理实验检验.为了明确该方药对人体健康的影响,我们对其进行了安全毒理学评价,为临床用药提供可靠的科学数据.

木犀草素对大鼠肝癌细胞CBRH7919的作用机制

从细胞凋亡的角度研究木犀草素对大鼠肝癌细胞CBRH7919tk/GCV系统的作用机制.采用流式细胞仪技术分析木犀草素对大鼠肝癌细胞CBRH7919tk/GCV自杀基因治疗系统的影响,以及基绿-派诺宁染色、丫啶橙(AO)染色的观察,还用琼脂糖凝胶电泳技术分析了药物对DNA的作用.经过统计学检验:联合组的凋亡率明显高于非联合组;甲基绿-派诺宁染色和丫啶橙(AO)染色出现了较为典型的凋亡形态;琼脂糖凝胶电泳出现明显可辨的梯状条带.综上,木犀草素对CBRH7919tk/GCV系统具有诱导其凋亡的作用.

微波萃取核苷酸的工艺研究

在微波单因素萃取的基础上,采取L9(34)正交优化实验,探讨微波萃取时间、溶液pH值和料液比对肌苷酸萃取率的影响.单因素实验及正交实验的结果表明:影响肌苷酸微波萃取的主要因素为微波萃取时间,其次为溶液pH值和料液比.在微波功率400 W的条件下,最佳提取工艺条件为微波萃取时间4 min,溶液pH值为9,料液比为1:20,此时肌苷酸萃取率为99.1%.