建立EB病毒转化B淋巴母细胞系的一种新方法——微量冻存全血法

本文报道了一种微量冻存全血法建立 EB 病毒转化 B 淋巴母细胞系的新方法。此方法不同于常规方法在于:用血量少(0.5ml);冻存的全血不需分离 B 淋巴细胞;不需用环孢霉素 A(Cyclosporine A.CyA),并且建系所需时间短。笔者从用此方法建立的细胞系中提取DNA,并用于 RFLP 连锁分析。此方法对遗传学研究有重要意义。

野罂粟总生物碱及提取物对人淋巴细胞的遗传毒理作用

目的 :探讨野罂粟总生物碱 (TAPN)及提取物对人遗传物质的毒理效应。方法 :采用细胞培养技术 ,检测TAPN及提取物对人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换 (SCE)率。结果 :TAPN0 0 0 3mg及 0 0 0 5mg组与空白对照组无差异 (P >0 0 5 ) ,TAPN其他浓度组及提取物各浓度组均能诱导人淋巴细胞SCE频率升高。结论 :TAPN及提取物各浓度组与SCE之间虽存在着明显的剂量效应关系 ,但TAPN在正常使用剂量内不会引起人遗传物质的毒性效应。

扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠肾小管间质损害的保护作用

目的:观察扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠肾小管间质损害的保护作用。方法:采用系膜增生性肾炎模型,将大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、扶肾降浊方组、贝那普利组。分别观察实验16周和20周末扶肾降浊方对系膜增生性肾炎大鼠的肾功能、肾组织病理变化的影响,并设贝那普利为阳性对照组。结果:16周和20周末模型组及用药组大鼠血液肌酐、尿素氮、β2-微球蛋白和24 h尿蛋白均明显高于正常组,中药组、贝那普利组均较模型组明显降低;模型组肾小管损害明显,肾间质纤维化显著,且随造模时间延长病变程度逐渐加重,中药组和贝那普利组肾小管损害较轻,肾间质局灶性纤维化。结论:扶肾降浊方能改善系膜增生性肾炎大鼠肾功能,减轻肾小管间质损害,具有肾脏保护作用。

异质性成人型多囊肾基因定位研究

目的：对国内首次发现的异质性成人型多囊肾家系进行基因定位的研究。方法：采用家系分析、核型分析、聚合酶链———限制性片段长度多态Ｒ、连锁分析和ＬｏｄＳｃｏｒｅ值计算等分子生物学及细胞生物学的技术和方法。结果：排除了Ｄ２Ｓ４４、ＡｐｏＢ、Ｄ１０Ｓ２８、Ｄ１７Ｓ２５４位点上不存在异质性ＡＰＫＤ的致病基因。结论：此结果为进一步深入研究此基因提供了有价值的资料。

调和肝脾法对肠易激综合征免疫学作用机制研究

目的:观察调和肝脾法对肠易激综合征患者免疫学指标的作用。方法:临床选择腹泻型肠易激综合征患者为研究对象,治疗前后分别检测患者血中IgG、IgA、IgM、C3、C4;血T淋巴细胞总数与亚群数目;IL-2水平,并设正常对照组。结果:腹泻型肠易激综合征患者治疗前血清IgM含量明显升高,外周血总T淋巴细胞、T8+细胞数目显著降低;淋巴细胞转化功能明显低下,IL-2低于正常组,经调和肝脾法治疗后过高的IgM含量显著下降(P<0.01),淋巴细胞转化功能增强,抑制性T淋巴细胞(T8+)恢复正常,IL-2也接近正常水平。结论:腹泻型肠易激综合征患者体液免疫亢进,细胞免疫功能低下,免疫调节机制紊乱,调和肝脾法中药能抑制某些亢进的体液免疫指标,增强细胞免疫功能,从而起到调节免疫功能的作用。

漏出液用于外周血淋巴细胞培养

为研制一种适宜淋巴细胞生长的天然培养基,我们在漏出液中添加不同浓度的小牛血清为培养液,对30例外周血淋巴细胞进行常规培养、制片,并以M199作对照,用淋巴细胞转化率、有丝分裂指数、分裂相质量等指标综合评价漏出液的培养效果。结果显示:淋巴细胞在漏出液中生长快,分裂旺盛,实验组的各项指标均与对照组无差异(P>0.05)。 提示:用漏出液为培养基,具有不加血清的优点。

基于RNA-seq探讨扶肾降浊方及蚓激酶对肾间质纤维化的作用机制

目的:探讨扶肾降浊方、蚓激酶及联合用药对肾间质纤维化的作用机制。方法:雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、扶肾降浊方组、蚓激酶组和联合用药组,每组12只,术后第2天开始,每天给药1次,扶肾降浊方灌胃给药:29 g/(kg·d),蚓激酶腹腔注射给药:36万U/(kg·d),假手术组、模型组给予等体积生理盐水,于第7、14天剖杀。HE和Masson染色评价纤维化改变;RNA测序(RNA-seq)检测第7天模型组和治疗组的基因表达;Western印迹检测第7、14天肾脏中纤维化标志蛋白[纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、Collagen-1、纤连蛋白(Fibronectin)]、上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白(E-cad、-SMA、Vimentin)、Flna、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白水平。结果:病理显示造模7天后肾脏出现明显纤维化改变(P<0.01),随造模时延长而加重(P<0.01);扶肾降浊方、蚓激酶及联合用药对纤维化有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),第7天,扶肾降浊方较蚓激酶作用更为明显(P<0.01);第14天,蚓激酶较扶肾降浊方作用更为明显(P<0.05),两个时期均以联合用药效果最佳。同时,造模后肾脏中的纤维化和EMT标志蛋白显著升高(均P<0.01),扶肾降浊方、蚓激酶及联合用药对纤维化和EMT标志蛋白均有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),第7天,扶肾降浊方较蚓激酶作用更为明显(P<0.05或P<0.01);第14天,蚓激酶较扶肾降浊方作用更为明显(P<0.05或P<0.01),两个时期均以联合用药作用最明显(P<0.05或P<0.01)。机制上,第7、14天,造模后各组Flna和p-ERK蛋白表达均明显升高(均P<0.01),扶肾降浊方、蚓激酶及联合用药均可抑制Flna和p-ERK的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:扶肾降浊方、蚓激酶及联合用药均能抑制肾间质纤维化,病变早期应用扶肾降浊方效果优于蚓激酶且联合用药优于单独用药,其共同机制可能通过抑制Flna基因及ERK的磷酸化,抑制表型转化,减少细胞外基质的产生而起作用。

蚓激酶对UUO大鼠肾组织NOX4、FAK、Src的影响

目的:观察蚓激酶(lumbrokinase)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织NADPH氧化酶4(NOX4)、黏着斑激酶(FAK)、Src激酶表达的影响,并探讨其潜在机制。方法:雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠50只,随机分为5组,每组10只,即假手术组、模型组、蚓激酶低、中、高剂量组(0.9×10^(5)、1.8×10^(5)、3.6×10^(5) U·kg^(-1)),术后第2天开始灌胃给药,假手术组、模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d。免疫组化法检测转化生长因子β1(TGFβ1)、NOX4、FAK、Src蛋白表达变化,Western印迹法和RT-PCR法检测TGFβ1、NOX4、FAK、Src蛋白和mRNA表达变化。结果:与假手术组相比,模型组TGFβ1、NOX4、FAK、Src、α-SMA蛋白和mRNA水平显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,免疫组化结果显示,蚓激酶组TGFβ1、NOX4、FAK、Src蛋白水平明显降低(F=10.57、7.086、11.23、7.750,均P<0.05);Western印迹结果显示,蚓激酶组TGFβ1、NOX4、FAK、Src、α-SMA蛋白水平明显降低(F=8.873、11.18、6.902、8.679、5.672,均P<0.05);RT-PCR结果显示,蚓激酶组TGFβ1、NOX4、FAK、Src mRNA水平明显降低(F=5.546、4.285、6.626、3.911、5.914,均P<0.05)。结论:蚓激酶可改善UUO模型大鼠肾间质纤维化(RIF),其机制可能与蚓激酶调控TGFβ1、NOX4、FAK、Src、α-SMA的表达有关。

灭活的啤酒酵母原生质体与营养缺陷型啤酒酵母原生质体的融合

用０．９％的碘乙酰胺溶液灭活啤酒酵母Ｓ．ｃｅｒｃｖｉｓｉａｅＭＡ的原生质体与赖氨酸缺陷型啤酒酵母Ｓ．ｃｅｒｃｅｉｓｉａｅＣＡｌｙｓ－原生质体以ＰＥＧ为融合剂诱导融合。在基本培养基平板上选择到数株融合子再生菌株。融合株经过传代培养，细胞形态、ＤＮＡ含量及细胞内可溶性蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，确证是两亲本的融合株。

HEMA／NIPAAm栓塞颅底血管网的动物实验研究

目的探讨温度敏感型甲基丙烯酸-2-羟乙酯／N-异丙基丙烯酰胺（HEMA／NIPAAm）嵌段共聚物栓塞AVM的动物模型的可行性；评价其栓塞效果及病理改变。方法选取实验用猪16只。应用微导管超选择性导人猪的颅底血管网（RMB）。注射1：1浓度的HEMA／NIPAAm嵌段共聚物、欧乃培克混合物直至RMB完全不显影为止。于术后急慢性期进行造影及病理组织学观察。结果HEMA／MPAAm嵌段共聚物在畸形团内弥散和铸型良好，无粘管。血管造影复查未见血管再通。病理检查可见血管团的血管结构消失，周罔有异物巨细胞浸润。结论HEMA／MPAAm嵌段共聚物栓塞AVM具有弥散佳、无粘管、容易控制、不受注射时间限制、无再通等特点。可以作为临床应用。