柴胡疏肝散含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究柴胡疏肝散含药血清对体外大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)增殖及其细胞周期的影响.方法:体外培养的大鼠胃ICC经荧光鉴定,取生长对数期内的I C C与各含药血清共孵.实验分为空白组、柴胡疏肝散含药血清组(5%、10%、20%)及10%多潘立酮含药血清组.通过CCK-8法检测ICC的增殖作用;使用流式细胞术检测ICC细胞周期;Western blot检测ICC细胞周期素依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,CDK2)、cyclin E的表达.结果:与空白组比较,柴胡疏肝散含药血清各浓度组及10%多潘立酮含药血清组可显著促进ICC增殖(均P<0.01),可提高ICC细胞周期G0/G1期及S期比例(均P<0.01),同时10%柴胡疏肝散及10%多潘立酮含药血清组可显著上调ICC周期蛋白CDK2、cyclin E的表达(均P<0.01).柴胡疏肝散各浓度组内比较,10%、20%浓度组对促进ICC增殖及提高G0/G1期和S期比例均优于5%浓度组(均P<0.05);10%与20%浓度组在促进I C C增殖作用及提高S期比例上差异无统计学意义(均P>0.05).与10%多潘立酮含药血清组比较,10%柴胡疏肝散组对ICC增殖作用及上调CDK2、c y c l i n E的表达均优于10%多潘立酮组(均P<0.05);10%、20%柴胡疏肝散含药血清组提高G0/G1期及S期比例亦优于10%多潘立酮组(均P<0.05).结论:柴胡疏肝散含药血清可提高ICC生长活性,对ICC的增殖分化起促进作用.

酶解法分离与同源血清培养SD大鼠胃Cajal间质细胞的实验研究

[目的]探讨体外酶解法分离、同源血清培养SD大鼠胃Cajal间质细胞(ICC)的实验方法。[方法]无菌条件下分离大鼠胃窦组织,酶解法分离制备ICC细胞悬液,接种于M199完全培养基(含10%大鼠同源血清,不含胎牛血清及重组鼠类干细胞因子)进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态变化,适时换液,MTT法测定ICC对数生长曲线,C-kit特异性抗体免疫荧光染色法鉴定ICC,并取对数生长期细胞进行传代培养。[结果]同源血清培养ICC成活并体现其特有的生长曲线及形态学特征,C-kit特异性抗体免疫荧光染色证实细胞为ICC,且细胞传代培养成功。[结论]酶解法可以对SD大鼠胃窦ICC进行分离,在不使用胎牛血清(FBS)及重组鼠类干细胞因子(SCF)培养的条件下,含大鼠同源血清的M199完全培养基可以完成ICC原代培养及传代培养。该项培养方法可行,为研究ICC生物学特性及其与胃肠病学的临床和基础关系奠定基础。

枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内钙离子浓度、钙调蛋白表达的影响

目的:观察单味中药枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内Ca2+、钙调蛋白表达的影响.方法:按照血清药理学通法制备大鼠枳实含药血清,将血清分为枳实组(10%、20%、50%枳实含药血清)、空白血清对照组,酶解法提取胃窦平滑肌细胞并进行培养,倒置显微镜下观察各组对胃窦平滑肌细胞收缩效应,激光共聚焦显微镜技术检测各组加药前后胃窦平滑肌细胞内Ca2+浓度变化,免疫组织化学方法观察各组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白的表达.结果:10%、20%、50%枳实含药血清对胃窦平滑肌细胞收缩及细胞内Ca2+荧光强度的影响呈药物剂量依赖关系,细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度随药物浓度的增高而增强(P<0.05),20%、50%枳实含药血清与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度差异有统计学意义(P<0.05),50%枳实组与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:枳实含药血清可以促进胃窦平滑肌细胞收缩,其机制可能与增加细胞内Ca2+浓度、调节钙调蛋白的表达有关.

谷氨酸诱导大鼠胃Cajal间质细胞自噬模型的建立

目的:通过谷氨酸诱导离体大鼠胃Cajal间质细胞(ICCs)建立细胞自噬模型。方法:使用高、中和低浓度(分别为10 mmol/L、5 mmol/L和2.5 mmol/L)的谷氨酸作用于原代培养的ICCs不同时间(3h、6h和24h),然后通过CCK-8法检测不同浓度谷氨酸对ICCs活力的影响;Western blot检测不同浓度谷氨酸在不同作用时点对ICCs自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平的影响;透射电镜观察谷氨酸干预后细胞内自噬体和超微结构的变化;免疫荧光检测谷氨酸诱导后自噬蛋白LC3的荧光表达。结果:与空白对照组相比,谷氨酸显著降低了大鼠胃ICCs活力(P<0.01)。中、高浓度谷氨酸作用不同时间均可显著提高自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比值(P<0.01),其中以中浓度谷氨酸作用3 h的LC3-II/LC3-I比值最高(P<0.01)。透射电镜检测中浓度谷氨酸干预3 h发现,细胞内自噬体数量明显增加,线粒体和内质网数量及结构遭到破坏。免疫荧光结果提示,与空白对照组比较,谷氨酸中浓度组平均每个细胞内自噬蛋白LC3荧光表达显著增强(P<0.01)。结论:应用谷氨酸可成功诱导大鼠胃ICCs自噬,谷氨酸的最佳诱导条件为5 mmol/L作用3h。

柴胡疏肝散对大鼠胃Cajal间质细胞活性及细胞内钙离子浓度的影响

目的观察柴胡疏肝散含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)活性及细胞内钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法按照血清药理学通法制备大鼠含药血清,将血清分为柴胡疏肝散组(浓度为5%、10%、20%)、多潘立酮组(10%)、空白组,急性分离并采用酶解法提取胃窦ICCs进行常规培养,免疫荧光染色法鉴定ICCs,MTT法测定ICCs对数生长曲线,以含药血清继续培养对数生长期的ICCs 3天后,通过CCK-8法检测ICCs活性,激光共聚焦显微镜进行Fluo-3荧光检测ICCs细胞内Ca2+变化,比较各组含药血清对大鼠胃窦ICCs生长的影响。结果成功分离、培养和鉴定ICCs后,通过各组含药血清作用,与空白组同期比较,多潘立酮组、柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P<0.05);与多潘立酮组同期比较,10%、20%柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P<0.05);与5%柴胡疏肝散组同期比较,10%、20%柴胡疏肝散组ICCs活性(48、72 h)与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P<0.05)。结论柴胡疏肝散可以通过增强细胞内Ca2+浓度促进ICCs活性,促进其分化生长。

基于精神心理角度的疏肝理气法治疗胃肠动力障碍性疾病的探讨

疏肝理气法是中医对于肝气郁结证型进行辨证论治的根本治法,具有促胃动力的功效,可作为胃肠动力障碍性疾病(DGIM)的治疗方法。精神心理因素对于人体消化系统的影响在当代社会生活中越来越突出,已成作为人类DGIM最重要的病因之一,其对于人体的作用与影响首先体现在心理应激。由心理应激产生的情志活动对胃肠动力障碍的影响与中医"情志致病""肝气郁结"经典理论高度关联,本文即从精神心理角度探讨疏肝理气法治疗DGIM,并认为该治法充分体现了中医之肝"主疏泄",继而能够调畅情志,调理脾胃的经典含义。