应用ICP-AES法研究云南普洱茶稀土含量

应用电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-AES）对云南省普洱茶主产地采集的150份普洱茶样品的稀土含量进行检测研究。检测样品中稀土的含量在0.26~4.07 mg.kg-1范围。依据国家标准GB 2762—2005《食品中污染物限量》中稀土限量标准2 mg.kg-1考核,43%的普洱茶样品被检出稀土含量超标。云南普洱熟茶和生茶不同的生产工艺会造成普洱茶稀土含量的差异,并影响产品质量。云南普洱茶不同主产地区之间的稀土含量存在差异,个别地区的普洱茶稀土质量安全控制情况不容乐观。

云南普洱茶砷和汞的含量分析

采集云南省5个地区13个普洱茶主产地的150个茶叶样本,对普洱茶中砷和汞的含量进行分析。样品中砷的含量为0.026～0.37mg/kg(md);汞的含量为0.0014～0.020mg/kg(md),并有85.9%的样品未检出汞,砷和汞的检测结果符合农业部质量标准。结果表明,云南西双版纳、思茅、临沧、保山、大理普洱茶中砷、汞富集存在地区性差异,生茶和熟茶这两种不同加工工艺可以影响产品砷和汞的终含量,但均未影响普洱茶的质量安全,以云南五地区为代表的中国普洱茶目前砷、汞质量安全状况良好。

云南省不同地区普洱茶铅含量的差异性

采集云南省普洱茶主产地的150份普洱茶样品,采用火焰原子吸收分光光度法对普洱茶叶的铅含量进行检测。研究表明,所有检测样品中铅的含量为0～5.76mg/kg,5.4%样品的铅含量超过农业部最大限量标准2mg/kg。云南相同主产地的生茶和熟茶中铅含量没有显著性差异。目前云南普洱茶质量安全状况良好;个别普洱茶生产基地的铅残余含量控制情况需引起关注。

高校院级科研平台的开放创新管理初探

高校院级科研平台是提高我国科技创新能力的重要战略资源,也是高校建设世界一流研究性大学的必备条件。高校院级科研平台的可持续发展是管理中的突出问题。本文将经典的现代管理理论与科研平台的开放创新管理实践相结合,提出了科研平台可持续发展过程中的管理理念、人员管理、运行经费、管理措施等实际问题的解决办法,并对高校科研平台的开放创新管理进行了探索和实践。

权变理论与高校服务保障体系社会化管理

本文分析我国高校不同发展时期服务保障体系社会化管理的权变理论应用;并指出在学习科学实践发展观中权宜应变的结合不同时期的社会实践和时代发展,是指导高校服务保障体系社会化管理改革进程的关键。

实验室生物安全教育在研究生教育中的重要性

随着生物技术的发展,越来越多的科研人员,特别是高学历的研究生群体正在从事接触病原微生物的研究工作,针对研究生的学习及科研特点,加强实验室的生物安全防护问题尤为重要。本文就研究生实验工作中存在的生物安全问题及解决办法进行详细阐述,以期为从事相关研究的人员提供安全保障思路。

C_3和C_4植物光合途径的适应性变化和进化

高等植物大多为C3植物,C4植物和景天酸代谢(Crassulacean acid metabolism,CAM)植物是由C3植物进化而来的。C4途径的多源进化表明,光合途径由C3途径向C4途径的转变相对简单。该文分析研究了植物光合途径的进化前景,指出C4植物是从C3植物进化而来的高光效种类,且地质时期以来降低的大气CO2浓度和升高的大气温度以及干旱和盐渍化是C4途径进化的外部动力。C3植物的C4途径的发现说明植物的光合途径并非是一成不变的,C3和C4植物的光合特征具有极大的可塑性,某些环境的变化会引起植物光合途径在C3和C4途径之间转变。C3植物具有的C4途径是环境调控的产物,是对逆境的适应性进化结果,因而光合途径的转变也适用于干旱地区植被的适应性生存机理研究。该文还利用国外最新的C4光合进化模型介绍了植物在进化C4途径中所经历的7个重要时期(从分子基础到形态基础、结构基础,再到物质代谢水平、光合酶活水平,直到C3和C4途径协调运转时期,最后达到形态与功能最优化阶段),并结合全球气候变化的特点对国内外相关领域的研究进行了分析,总结了植物光合途径的适应性转变和进化的研究成果,为今后的相关工作提出建议。

引入科研热点改进细胞工程教学方法与效果

研究型大学需要在教学中引导大学生的科研创新意识。笔者围绕特定理工科院校细胞工程课程的特点,通过分析该课程在教学中存在的问题,提出了具体的解决方案以及改进措施。在教学内容上引入前沿科研热点提高学生学习兴趣;在教学形式上,将国际教学理论与具体教学实践相结合,在实际工作中取得了好的成效,达到了提升本科生科研兴趣和创新能力,以及培养满足国家和地方发展需要的高素质人才的目的。

猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测

为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)流行株基因型的变化,本研究对1999年～2009年NCBI中登录的556个PCV2分离株全基因序列进行分析。结果表明,1999年～2002年所登录的PCV2的优势流行毒株为基因A型(PCV2A);从2003年开始基因B型(PCV2B)逐渐为优势流行毒株,在PCV2分离株中基因B型所占比例,2004年为95.4%,2007年～2009年均超过76.0%。2003年～2009年国内的PCV2分离株有287个,其中250个为PCV2B,37个为PCV2A,表明PCV2B是国内猪群中的主要优势毒株。通过建立PCV2A和PCV2B PCR检测方法,对70份临床病料的检测显示,PCV2检出率为34.29%(24/70),基因型均为PCV2B,无PCV2A的检出,表明PCV2B为检测猪群中的主要优势毒株。

奶牛隐性乳房炎的调查分析

采用体细胞计数(SCC)法对杨凌某奶牛场中60头不同胎次和泌乳时间奶牛隐性乳房炎进行检测,对引起乳房炎的可能诱因进行调查分析,研究该场奶牛隐性乳房炎的发病规律,为本病的防控提供参考。结果表明,受检奶牛隐性乳房炎的检出率为43.3%。1胎～2胎奶牛隐性乳房炎检出率为40.0%,3胎～4胎为46.7%,隐性乳房炎的检出率有随胎次增加而升高的趋势;泌乳时间少于200 d的泌乳牛隐性乳房炎检出率为27.6%,200 d～300 d的为36.4%,300 d～400 d的为41.7%,超过400 d的为50.0%,提示奶牛隐性乳房炎有随泌乳期升高的趋势。本调查显示,奶牛隐性乳房炎的发生与胎次和泌乳时间有显著的相关性,饲养管理和卫生条件是乳房炎发生的重要诱因。

沿绿洲-荒漠过渡带水分梯度分布的芦苇抗氧化保护机理

对甘肃省河西走廊绿洲-荒漠过渡带沿水分梯度分布的芦苇的生长环境特征以及抗氧化系统特征的研究结果表明,芦苇叶片脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量在盐渍胁迫严重的盐渍化生境很高。芦苇叶片超氧化物歧化酶(SOD)活性在根区土壤含水量降低时显著增加,对抵御干旱胁迫的贡献较大,但对盐渍胁迫并不敏感;抗坏血酸过氧化物酶(APX)和过氧化氢酶(CAT)的活性随干旱胁迫加剧而逐渐升高,对水分亏缺的响应大于对盐渍化响应;过氧化物酶(POD)活性在土壤含水量较高的盐渍化生境和土壤含水量很低的沙丘生境中都较高,对抵抗盐渍胁迫和干旱胁迫起着同样重要的作用。芦苇叶片抗氧化物质类胡萝卜素(Car)含量随土壤含水量降低未表现出显著变化,在盐渍化生境还有降低,说明Car对抵御干旱胁迫和盐渍胁迫贡献很小。

猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立

【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。

猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立一种能在临床上快速、准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)的TaqMan实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中已公布的PCV-2陕西分离株的全基因序列,在PCV-2的ORF2核苷酸序列的保守区域,设计合成1条TaqMan探针和1对特异性引物;利用设计的引物扩增ORF2部分基因并鉴定后,回收PCR扩增产物,连接pMD19-T载体,转化DH5α大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定后提取质粒,作为荧光定量PCR的标准品;以标准品为模板建立检测PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量方法对56份临床样品进行检测,并将检测结果与传统PCR方法进行比较。【结果】建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线的斜率为-3.383,R2=0.998,具有良好的线性关系;重复性试验结果表明,该方法循环数阈值Ct的变异系数(CV)为0.86%～1.02%,具有良好的稳定性;敏感性检测结果表明,该方法的最低检测限度为5.06copies/μL;特异性检测结果显示,该方法对猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,对PCV-2标准品的检测结果为阳性,说明该方法具有较好的特异性。临床样品的检测中,所建立的Taq-Man实时荧光定量PCR检测方法的检出阳性率较传统PCR方法高14.3%。【结论】成功建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,该方法可用于临床上对PCV-2的检测。

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)是一种猪疾病综合征的病原体,这种疾病综合征在欧洲被称为猪圆环病毒病(PCVD),在美国被称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),可导致巨大的经济损失。基于PCV-2a的灭活疫苗和亚单位疫苗在市场上已有销售,这些疫苗为降低商品化猪群的死亡率、增加其生长指数提供了有力的技术支持。从2003年开始,伴随着临床症状的加剧,全球猪群中PCV-2流行亚型逐渐由PCV-2a变成PCV-2b。虽然现在市售的基于PCV-2a的疫苗可以提供对PCV-2b的交叉保护,但已研制出了基于PCV-2b的新型实验性疫苗,比如改良减毒活疫苗,这些新型疫苗可以提供更高的保护力,降低免疫成本。论文主要介绍现在市面上销售的PCV-2疫苗在实验和田间条件下的免疫效果,并对新型PCV-2疫苗的研究进行了展望。

猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用

根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。

检测猪分子伴侣Jiv基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒（CSFV）复制密切相关的细胞分子伴侣，为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化，本研究以猪Jiv基因（DNAJCl4）为参考序列，建立了检测猪分子伴侣JiV基因的SYBRGreenI荧光定量RT．PCR方法。结果显示，所建方法的标准曲线相关系数为0．999，扩增效率为103．4％，在10‘～10’拷贝数范围内具有较好的线性关系；对Jiv基N最低可检测到10拷贝，该方法的批内变异系数和批间变异系数均在O．5％以下，具有较高的敏感性和重复性。应用建立的方法对猪多种组织及猪源传代细胞中Jiv基N的表达进行检测，结果显示Jiv基因在所检测的组织和细胞中均有表达，表明所建方法可以用于Jiv基因的检测；同时对CSFV感染猪和阴性猪脾脏中的Jiv基因表达水平进行检测，统计发现CSFV感染猪脾脏中的Jiv基因表达水平显著上调，提示Jiv基因的表达在CSFV复制中发挥着一定的作用。本研究建立的检测猪Jiv基因的荧光定量RT．PCR方法为进一步明确Jiv蛋白在CSFV致病中的作用提供方法支持。

PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达

克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因,并进行序列分析及原核表达。根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因ORF5,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。再设计另外1对引物扩增ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行原核表达。结果扩增到603 bp的PRRSV全长ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%。因此推测陕西分离株属于北美型。SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。West-ern-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。

转录靶向猪Jiv基因shRNA细胞株的建立及抗猪瘟病毒转基因猪的构建

【目的】构建转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的阳性细胞株,通过比较各细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果,筛选对猪瘟病毒增殖有明显抑制作用的细胞株,为抗猪瘟转基因猪的构建提供材料。【方法】研究设计了靶向猪Jiv基因的4个shRNA干扰片段,并构建插入干扰片段的慢病毒(P1、P2、P3、P4)。将慢病毒分别转染PK-15细胞,阳性细胞接种猪瘟病毒后72 h用实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒RNA的量,以比较4种干扰细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果。将对猪瘟病毒增殖有较好干扰效果的P2慢病毒干扰载体转染猪胎儿成纤维细胞,获得稳定表达靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的猪胎儿成纤维细胞株,作为抗猪瘟病毒转基因猪构建的供体细胞,将细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中,获得体细胞核移植胚胎,移植入受体母猪输卵管中进行转基因猪构建,对获得的转基因猪进行外源基因的鉴定。【结果】获得了4株转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的PK-15细胞株,其中转入P2干扰载体的细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的抑制作用,将转入P2干扰载体的猪胎儿成纤维细胞株为核供体细胞通过体细胞核移植,获得经鉴定为外源基因插入阳性的转基因猪。【结论】细胞Jiv基因的表达对猪瘟病毒的增殖有一定的影响,筛选获得的一个干扰细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的干扰效果;通过体细胞核移植技术获得一头转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段(P2)的转基因猪。

PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。

《动物性食品卫生学》实验课教学改革探索

《动物性食品卫生学》是动物医学专业的重要专业课之一。本文主要从实验课的教学内容改革、教学方法改革和课程考核方式改革等方面入手,提出了实验课改革的措施。通过这些改革措施的实施,旨在培养能够从事动物性食品卫生安全检验检疫工作和卫生监督管理工作的创新型高级科技人才。