广西红树林土壤产淀粉酶菌株的筛选及产酶条件优化

目的:从广西石角红树林自然保护区红树林土壤中筛选产淀粉酶菌株,通过Plackett-Burman实验和响应面优化其产酶条件,以期建立高产淀粉酶的发酵工艺。方法:通过平板筛选,从红树林土壤中获得产淀粉酶菌株;通过生理生化与16S rDNA测序确定菌株种类;通过单因素优化,Plackett-Burman实验和响应面优化得出最适产酶条件。结果:从红树林土壤中获得产淀粉酶菌株;鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),命名为Bacillus velezensis MG5-8;获得淀粉酶的最适温度为70℃,最适pH为6.0;经优化获得该菌株产淀粉酶最适温度为30℃,最适产酶碳源为玉米浆粉,最适产酶氮源为黄豆饼粉与牛肉膏;最适产酶条件为黄豆饼粉0.51%、牛肉膏0.55%、玉米浆粉0.34%,在此条件下该菌株的理论酶活性最大值为134.03 U/mL,模型经验证测得B.velezensis MG5-8淀粉酶活性为130.28 U/mL,为理论值的97.2%,是优化前酶活的5.63倍。结论:成功分离出一株产淀粉酶的菌株(B.velezensis MG5-8),在优化的条件下酶活最高为130.28 U/mL。

我国野生动物违法案件频发的治理困境及法治对策

新冠疫情暴发以来,中国野生动物保护法治力度不断加强,但野生动物违法案件并未显著减少,且呈现出新的违法犯罪形式、犯罪主体基层化、犯罪动机多样化等特点,在强化依法治国战略与生态文明建设实践背景下有必要探寻其原因并积极寻求相应法治化改善对策。针对中国当前野生动物保护立法存在个别条文内容科学性和完整性有待强化、监督机制有待加强、协同监管机制有待构建等不足的现状,可考虑采取健全和丰富野生动物保护政策法规、健全监督机制、加强社会共治、优化构建协同监管机制等具体措施予以积极完善。

TLR2和TLR6在鸟分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用

【目的】建立鸟分枝杆菌感染巨噬细胞模型,探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体6(TLR6)在鸟分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用,为阐明鸟分枝杆菌致病机制提供依据。【方法】用鸟分枝杆菌感染U937细胞,于感染0h、8h、16h、24h和48h后分别提取细胞总蛋白,并通过Western blot方法检测TLR2和TLR6的表达;分别提取细胞培养上清液,利用ELISA技术检测肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的变化情况。用鸟分枝杆菌感染阻断TLR2和TLR6后的U937细胞,通过Western blot方法分别检测其促凋亡因子BAX和抗凋亡因子BCL-2的表达量,用ELISA技术检测细胞培养上清液中TNF-α含量变化情况,用流式细胞仪检测U937细胞的凋亡变化。【结果】鸟分枝杆菌感染U937细胞可引起TLR2、TLR6和TNF-α表达上调;用鸟分枝杆菌感染阻断TLR2和TLR6后的U937细胞,可使U937细胞内促凋亡因子BAX和TNF-α表达量下降(P<0.05),抗凋亡因子BCL-2表达量升高(P<0.05),并可以明显降低感染鸟分枝杆菌后的细胞的凋亡率(P<0.05)。【结论】TLR2和TLR6与巨噬细胞凋亡相关,巨噬细胞通过TLR2和TLR6来识别鸟分枝杆菌,而鸟分枝杆菌反过来通过促进TLR2和TLR6的表达来影响巨噬细胞相关凋亡通路,从而诱导巨噬细胞凋亡。

鸟分枝杆菌耐受表面活性物质基因的筛选及其相关功能分析（英文）

目的:筛选鸟分枝杆菌(MAV)中耐受表面活性物质的基因并探究其相关功能,以认识MAV适应肺部环境的机制。方法:构建MAV基因组文库,采用生物活性水平筛选策略从基因组文库中筛选耐受十二烷基硫酸钠(SDS)的克隆子,运用生物信息学分析该克隆子的完整的开放阅读框架(ORF)及其编码蛋白的二级结构特点。将克隆子的全基因序列与pGEX-4T-3表达质粒连接后转化大肠杆菌,构建过表达目的蛋白的重组菌,然后检测重组菌分别在含SDS、H2O2、NaNO2和GSNO条件下的存活率。结果:成功构建滴度为1.18×10^4 CFU/mL的MAV基因组文库,并从文库中筛选到一个耐受SDS的基因MAV-4012。生物信息学分析显示,MAV-4012蛋白是一个无信号肽的跨膜蛋白,二级结构以α-螺旋为主。过表达MAV-4012重组菌在2%SDS、5 mmol/L H2O2、20 mmol/L NaNO2和10 mmol/L GSNO体外条件下的存活率均比空载菌显著提高(P<0.05)。结论:MAV-4012是MAV中的一个耐受表面活性物质的基因,其编码的蛋白参与了肺部表面活性物质、活性氧(ROS)及活性氮(RNS)的胁迫应答,是MAV重要的毒力因子。

危重病人直升机转运护理质量评价体系的构建

目的:构建适用于危重病人直升机转运的护理质量评价体系,为危重病人直升机护理转运规范建设提供理论依据。方法:以三维质量理论为基础,通过质性研究和文献研究拟定危重病人护理质量评价指标和内容,根据德尔菲法对13名直升机救援专家进行了2轮意见函询并进行内容确定,分析评价研究结果的科学性和可靠性。结果:2轮咨询专家积极系数为100%,专家权威系数(Cr)分别为0.74,0.76,意见的协调系数分别为0.312,0.376,构建了包含3个一级指标、14个二级指标、44个三级指标的危重病人直升机空中转运护理质量评价体系。结论:构建的护理质量评价体系明确了直升机救援护理服务内容和质量评价的要求,形成的护理质量评价体系内容具体、各层次指标和内容可作为护理质量评价的参考。

高产谷胱甘肽酵母的诱变筛选及发酵条件的优化

为了更好的利用微生物发酵合成谷胱甘肽(glutathione, GSH),本研究通过对产朊假丝酵母菌株进行紫外诱变,并选取抗性筛选物乙硫氨酸对出发菌株进行致死率实验,筛选到一株高产谷胱甘肽突变菌株。采用5因素5水平的正交设计实验对发酵合成GSH的培养条件中培养温度、摇床转速、蛋白胨和硫酸铵浓度之比、初始pH值及接种量的组成进行优化。结果表明:发酵条件为培养温度26℃、200 r/min、蛋白胨和硫酸铵浓度之比5:2、初始pH值5.0及接种量10%时突变菌株的谷胱甘肽产量最高,达到了187.31 mg/L,即有利于菌体合成GSH。

鸟分枝杆菌毒力相关因子EsxH对巨噬细胞凋亡的作用

目的:通过原核表达系统制备鸟分枝杆菌EsxH蛋白,并将其作用于U937细胞,初步探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法:利用PCR扩增出EsxH编码序列,与表达载体pGEX-4T-3连接,构建重组载体pGEX-EsxH,将重组表达载体pGEX-EsxH转化入E. coli BL21 (DE3),在IPTG作用下诱导表达目的蛋白。用超声破碎仪对菌体进行破碎,取上清通过谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱纯化GST-EsxH融合蛋白。将纯化后的蛋白作用于U937细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:扩增出基因片段大小为294 bp的EsxH基因,克隆入表达载体pGEX-4T-3,经IPTG诱导后成功表达一个分子量大小为36.5 kDα的融合蛋白GST-EsxH。将不同浓度的EsxH蛋白作用于U937细胞,经流式细胞术检测细胞凋亡率,发现处理组细胞凋亡率高于对照组,其差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:EsxH蛋白能够促进U937细胞的凋亡,为进一步研究鸟分枝杆菌的致病机制奠定了基础。

电话随访对乳腺癌患者内分泌治疗依从性的影响

目的:调查和了解电话随访对乳腺癌患者内分泌治疗依从性的影响。方法:将96例在我科化疗结束后需内分泌治疗的乳腺癌患者随机分为两组,即随访组和对照组各48例,对照组按常规进行出院指导,随访组在此基础上出院后每月电话随访一次。分别12个月及18个月后比较两组患者药物治疗、按时检测及复查的情况。结果:随访组患者的药物治疗、按时检测及复查的依从性明显高于对照组(P<0.05)。结论:定期电话随访,能有效提高乳腺癌患者内分泌治疗依从性,降低复发率。

探讨WEB校外双盲论文送审平台建设对提升研究生学位论文质量的影响

项目以当下研究生管理模式信息化为大背景,以广西医科大学研究生外送双盲论文评审体系为研究对象,利用WEB技术,搭建研究生双盲论文在线评审管理系统信息化平台提供可行性建议,提高外送双盲论文评审效率和结果分析水平,通过工作总结、文献研究、实践调研,对比研究等研究方法,提出校研究生外送双盲论文评审体系存在的主要问题,并提出合理化建议及思考,为提升广西医科大学及广西博士研究生学位论文质量与教育管理改革提供依据。

鸟分枝杆菌PPE25蛋白对THP-1巨噬细胞免疫效应的影响

[目的]探讨鸟分枝杆菌PPE25在调控人源THP-1巨噬细胞免疫应答反应中的作用及机制。[方法]通过基因扩增、载体构建、诱导表达、分离纯化等过程制备鸟分枝杆菌重组PPE25蛋白;将重组PPE25蛋白作用于THP-1巨噬细胞后,利用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率;运用ELISA方法检测细胞上清中TNF-α的浓度;采取Western Blotting方法检测Bax、Bcl-2、TLR2、TLR4的蛋白表达水平;采用q PCR法检测IL-6、IL-12的mRNA表达水平。[结果]利用大肠杆菌表达系统成功制备重组PPE25蛋白;重组PPE25蛋白作用巨噬细胞后,细胞凋亡率升高(P <0.05),细胞中Bax蛋白表达水平升高(P <0.05),而Bcl-2蛋白表达水平降低(P <0.05);另外,细胞中TLR2、TLR4蛋白表达水平上升(P <0.05),TNF-α含量升高(P <0.05),IL-6及IL-12表达水平升高(P <0.05)。[结论]鸟分枝杆菌PPE25蛋白可以促进人源THP-1巨噬细胞凋亡,并可以通过激活巨噬细胞TLR2或TLR4信号途径促进细胞炎症因子IL-6及IL-12的分泌,从而诱导机体产生免疫应答,抵御鸟分枝杆菌感染。

鸟分枝杆菌MAV-2921基因编码蛋白的生物信息学分析及其对巨噬细胞凋亡的影响

目的应用生物信息学软件分析鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白的结构和功能,观察其对人源THP-1巨噬细胞凋亡的影响。方法在NCBI数据库中获取鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白编码基因及其氨基酸序列信息,运用ProtParam、ProtScale、TMPred、SignalIP、SOPMA、SWISS-MODEL等在线工具对鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白进行生物信息学分析。提取全基因组DNA,进行PCR扩增、载体构建得到鸟分枝杆菌MAV-2921基因的重组表达质粒,经诱导表达和分离纯化后获得重组MAV-2921蛋白。将重组蛋白MAV-2921作用于人源THP-1巨噬细胞,ELISA法检测细胞上清液TNF-α表达量的变化,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率。结果鸟分枝杆菌MAV-2921基因全长285 bp,为编码94个氨基酸的蛋白质。该MAV-2921蛋白是稳定的亲水性蛋白,有1个跨膜区段,无信号肽;二级结构以α-螺旋为主,三级结构模型构建显示该蛋白为单体蛋白,不形成二聚体。利用大肠埃希菌表达系统制备了重组鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白,将重组MAV-2921蛋白作用于人源THP-1巨噬细胞,与对照组相比细胞上清液TNF-α含量升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白为稳定的、亲水性跨膜蛋白,对人源THP-1巨噬细胞具有促凋亡作用。

鸟分枝杆菌中耐受表面活性物质相关基因的分离及功能鉴定

为筛选鸟分枝杆菌中耐受表面活性物质的基因并探究其相关功能,以认识鸟分枝杆菌适应肺部环境的杀(抑)菌机制,本研究构建鸟分枝杆菌基因组文库,采用生物活性水平筛选策略从基因组文库中筛选耐受十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的克隆子,运用生物信息学分析该克隆子完整的开放阅读框及其编码蛋白的二级结构特点。将克隆子的全基因序列与pGEX-4T-3表达质粒连接后转化大肠杆菌,构建过表达目的蛋白的重组菌。检测重组菌分别在含SDS、H2O2、NaNO2和GSNO条件环境下的存活率。结果表明成功构建滴度为1.18×10^4 cfu/mL的鸟分枝杆菌基因组文库,从文库中筛选到一个耐受SDS的基因MAV-4292。生物信息学分析显示,MAV-4292蛋白是一个无信号肽的跨膜蛋白,二级结构以α-螺旋为主。过表达MAV-4292重组菌在2%SDS、5 mmol/L H2O2、20 mmol/L NaNO2和10 mmol/L GSNO体外条件下的存活率均比空载菌显著提高(p<0.05)。结果表明,MAV-4292是鸟分枝杆菌中一个耐受表面活性物质的基因,它编码的蛋白参与了肺部表面活性物质、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及活性氮(reaetive nitrogen species,RNS)的胁迫应答,是鸟分枝杆菌的毒力因子。