NAT检测及化学发光免疫技术在乙型肝炎病毒检测中的应用

目的分析核酸检测(nucleic acid testing,NAT)及化学发光免疫技术检测在乙型肝炎病毒检测中应用价值。方法对邵阳学院附属第二医院2019—2021年采集的20000份血检标本,首先采用常规ELISA检测,HBsAg双试剂阴性进行NAT检测。对HBsAg-/HBV DNA+标本再采用化学发光免疫法分析其乙肝血清学特征。结果20000份血标本中检出HBsAg(+)HBV DNA(+)6400份,占32.00%;HBsAg(+)HBV DNA(-)780份,占3.90%;HBsAg(-)HBV DNA(+)755份,占3.78%;HBsAg(-)HBV DNA(-)12065份,占60.33%。对755份HBsAg(-)HBV DNA(+)进行乙肝血清学检测,其中乙肝二对半检出模式中HBsAb、抗-HBe、抗-HBc均(+)占41.99%(317份),HBsAb、抗-HBc均(+)占30.99%(234份),抗-HBc(+)占10.99%(83份),乙肝五项全阴性占16.02%(121份)。结论NAT检测可有效检出HBsAg-/HBV DNA+标本,保证血检标本中乙肝病毒阳性被检出。借助化学发光免疫技术能有效分析隐匿性乙型肝炎病毒感染血清学特征,可为血液安全的管理策略提供科学的依据。

梅毒螺旋体TrkA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

目的 分析梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的生物学特性,表达、纯化并制备TrkA蛋白的抗血清。方法 从NCBI中查到梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的氨基酸序列,采用生物信息学方法分析TrkA蛋白的基本理化性质、信号肽、定位、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位。按照梅毒螺旋体TrkA的DNA序列设计引物,PCR扩增TrkA基因,双酶切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-TrkA转转化入大肠埃希菌BL21,培养后使用IPTG诱导重组TrkA蛋白表达,利用Ni^(2+)亲和层析法纯化TrkA蛋白。取TrkA蛋白皮下接种小鼠,免疫3次,制备小鼠血清,ELISA法检测血清TrkA特异性IgG滴度。结果 生物信息学预测TrkA蛋白共有236个氨基酸,相对分子质量26.7ku,为胞内蛋白。该蛋白二级结构中α螺旋占45.34%,β折叠占20.76%,无规卷曲占27.97%,β转角占5.93%。Phyre2网站预测TrkA蛋白三级结构中85.5%氨基酸处于最合理区。TrKA蛋白含有6个连续B细胞表位和4个非连续表位。成功构建重组质粒pET28a-TrkA并获得高纯度的重组TrkA蛋白。该蛋白免疫小鼠能够诱导产生特异性IgG抗体,血清抗体滴度为1∶25 600。结论 生物信息学分析梅毒螺旋体TrkA为亲水性蛋白,含有B细胞歌表位,纯化的重组TrkA蛋白具有良好的抗原性,能诱导小鼠产生高滴度抗体。