水溶性化妆品霉菌和酵母菌快速检测替代方法

本文旨在研究采用测试片法进行水溶性化妆品霉菌和酵母菌快速检测的可行性。选取了6批化妆品面膜,参照《中国药典》2020年版非无菌产品微生物限度检查的微生物计数法,从专属性、定量限、重现性和耐用性几个方面对测试片法进行考察,并进行6批面膜测试片法的方法适用性试验。结果显示,测试片法与《化妆品安全技术规范》(2015年版)中平皿法在专属性、定量限、重现性和耐用性等方面无明显差异,6批面膜测试片法方法适用性试验结果回收率均在0.7~1.1之间,表明测试片法可作为快速检测法对水溶性化妆品中霉菌和酵母菌进行检测。

人参原粉需氧菌总数测定结果的不确定度评定

目的:分析人参原粉中需氧菌总数检测结果的不确定度来源,对测定结果进行不确定度评定,提高检测结果的准确性。方法:依据《中华人民共和国药典》2020年版(四部)通则1105非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法对样品中的需氧菌总数进行测定和结果判断。根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)规定,对测定过程中引入的不确定度分量进行评定,采用合成的方法计算和评定人参原粉中需氧菌总数的不确定度。结果:在置信概率为95%时,人参原粉需氧菌总数测定的扩展不确定度为0.016292,样品需氧菌总数测定结果为78289~84392 CFU·g^(-1)。结论:该方法可有效评定人参原粉中需氧菌总数的不确定度,为药材原粉的微生物检验提供参考。

香菇灵仙1号菌株提纯复壮

以发生退化的香菇(Lentinula edodes)灵仙1号为出发菌株,采用含有结晶紫的培养基(20%马铃薯,30mg/L结晶紫,2%葡萄糖,1%木屑粉,0.3%磷酸二氢钾,0.2%蛋白胨,0.15%硫酸镁,1.2%琼脂,pH自然)结合尖端菌丝分离方法进行提纯复壮。获得5个提纯复壮菌株,其中菌株7-2,与出发菌株相比,子实体产量提高12.6%,出菇提前15d,并恢复了灵仙1号正常状态下的"矮坛子"状——粗柄硬质菇特征。较出发菌株,5个提纯复壮菌株的木质素和纤维素降解能力均提高。

重组人脑利钠肽等电点分析全柱成像毛细管等电聚焦电泳法的建立及验证

目的建立重组人脑利钠肽等电点(isoelectric point,pI)分析的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,CIEF-WCID)法,并进行验证。方法采用CIEF-WCID法对两性电解质、占位剂、蛋白浓度、聚焦时间等进行优化后,获得检测重组人脑利钠肽的最佳检测条件。对建立的方法进行重复性、样品间精密度和耐用性验证,并对连续生产的3批重组人脑利钠肽进行pI分析。结果选择HR AESlyte 8-10.5为两性电解质,25 mmol/L氢氧化钠为占位剂,以87.5μg/mL为样品检测终浓度,聚焦时间为8 min。同一样品连续进样6次,检测pI相对标准偏差(RSD)为0.1%;6份样品检测pI RSD为0.1%;在样品不同终浓度下,主峰pI RSD为0.1%,不同放置时间下,样品pI RSD为0.1%,但pI标记物不可随意更改。连续3批重组人脑利钠肽样品pI均可检出。结论建立的重组人脑利钠肽pI分析的CIEF-WCID法,重复性好、精密度高,可用于重组人脑利钠肽后续的质量控制。

推定第四类羊毛硫素合成酶生物信息学分析

【目的】获得更多关于第四类羊毛硫素合成酶的序列及蛋白结构特征信息,并为研究其作用机制及生物学功能奠定基础。【方法】应用多种软件分析和预测了山丘链霉菌、枯草芽孢杆菌、肺炎双球菌、惰性乳杆菌、德氏乳杆菌、长双歧杆菌、拟无枝酸菌、大芬戈尔德菌中此类蛋白质的理化性质、结构域、二级结构等,同时采用邻位连接法对这8种蛋白及其结构域进行了进化树的构建。【结果】所研究的这8种蛋白均为亲水性蛋白,均无信号肽;山丘链霉菌、枯草芽孢杆菌、肺炎双球菌、德氏乳杆菌、长双歧杆菌、拟无枝酸菌、大芬戈尔德菌的此类合成酶属于酸性蛋白,惰性乳杆菌的类第四类羊毛硫素合成酶属于碱性蛋白;除山丘链霉菌、枯草芽孢杆菌、肺炎双球菌的此类合成酶不稳定外,其它菌株的合成酶均稳定;进化结果表明枯草芽孢杆菌和肺炎链球菌同源性最高,LANC-like结构域与合成酶的进化关系保持了高度的一致,而STYKc/S_TKc结构域的进化关系表现出了一定的差异;二级结构主要以α螺旋和无规卷曲为主;所有的蛋白均有LANC-like结构域。【结论】类第四类羊毛硫素合成酶在不同的菌种中具有一定的保守性,因此能够发挥相似的生物学功能。研究结果对进一步研究第四类羊毛硫素合成酶具有一定的参考价值,尤其是为通过该途径进一步提高枯草芽孢杆菌生防价值提供基础。

枯草芽胞杆菌BSD-2中ybfB基因敲除及生物信息学分析

在前期突变体库研究中发现,ybf B缺失的枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis BSD-2丧失了其抑真菌活性。本研究通过敲除并恢复BSD-2中ybf B基因,进一步确认其缺失对菌株生物活性的影响,并利用生物信息学手段对其基因序列和编码蛋白质序列进行了预测分析。本研究成功敲除BSD-2菌株的ybf B基因,构建突变株B-Y-k,并成功构建其回复突变株B-Y,平板对峙实验结果显示突变其ybf B基因该菌株失去其抗真菌活性,回复突变株抗真菌活性恢复,表明该基因与其抗真菌相关。生物信息学分析显示该基因全长1 251 bp,编码416个氨基酸,具有12个跨膜螺旋区,为疏水性蛋白,推测该蛋白为疏水性跨膜转运蛋白,可能参与活性物质的转运。