幽门螺杆菌VacA蛋白体外诱导胃上皮AGS细胞内HMGB1的表达

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染的胃上皮AGS细胞内高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)的表达。方法 Hp11638(CagA+,VacA+)和Hp11638突变株(Hp11638M,CagA+,VacA-)的提取液与AGS细胞共同温育后,收集细胞及培养上清液。裂解AGS细胞,western blot分析AGS细胞内HMGB1的表达,ELISA法检测培养上清液中HMGB1的水平。结果 Hp11638提取液刺激AGS细胞后HMGB1表达量为(123.33±25.2)μg/mL,明显高于Hp11638M提取液刺激后的(46.67±7.23)μg/mL(q=8.49,P<0.01)。Hp11638和Hp11638M提取液刺激的AGS细胞培养上清液中HMGB1的水平分别为(115.59±16.62)和(48.32±6.30)ng/mL,差异有统计学意义(q=12.25,P<0.01)。结论在胃炎发生、发展过程中,VacA蛋白是刺激细胞中HMGB1高表达的主要因子。

幽门螺杆菌和高敏C反应蛋白与冠心病关系的Logistic回归分析

目的:探讨上海人群中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与冠心病的关系。方法:对入选的冠心病患者和正常对照进行仔细的体格检查和问卷调查。采用Logistic回归研究Hp感染和血清超敏C反应蛋白(hypersensi-tive C-reactive protein,hs-CRP)水平在冠心病中的优势比。结果:冠心病患者的Hp感染率和hs-CRP水平明显高于对照组(χ2=6.63,t=22.82,P<0.05)。经年龄和性别校正后的Hp感染率和血清hs-CRP水平在冠心病中优势比分别为1.146(0.722-1.819),1.073(0.969-1.187)。经全参数校正后的Hp感染率和血清hs-CRP水平在冠心病中优势比分别为1.132(0.682-1.877),1.026(0.918-1.147)。结论:Hp感染率和血清hs-CRP水平与冠心病关系不明确,Hp感染率和血清hs-CRP水平不可以作为上海人群冠心病的风险因子。

液体培养中起始接种浓度对幽门螺杆菌产量的影响

目的探讨液体培养中起始接种浓度对幽门螺杆菌（Hp）产量的影响。方法心脑浸液液体培养基中加入不同浓度的Hp,每12小时用比浊法测定细菌浓度。结果不同起始接种浓度的Hp培养物均在24 h达到最大浓度;在104~107cfu/mL范围内,Hp起始接种浓度与终浓度呈正相关（P〈0.01）,〈104cfu/mL起始接种浓度的Hp培养物生长不明显,而108cfu/mL起始接种浓度的培养物终浓度仅发生轻微增加。结论不同起始接种浓度有不同的Hp产量,在一定范围内起始接种浓度与Hp产量有关。

靶向23SrRNA domainⅡ区的肽-多肽核酸抑制细菌生长的研究

目的研究靶向23SrRNA domainⅡ区的肽-多肽核酸(PNA)(G1138)抑制细菌生长的效果。方法用浊度分析观察肽-PNA(G1138)抑制大肠埃希菌DH5α的生长,用克隆形成单位进一步分析肽-PNA(G1138)抑菌效果。结果肽-PNA(G1138)显示出剂量和序列特异性抑制细菌生长,但肽-PNA(G1138)的最低抑菌浓度(MIC)明显高于四环素,抑制效果低于四环素,他们的MIC分别为10和4μmol/L。结论10μmol/L的肽-PNA(G1138)能够抑制大肠埃希菌DH5α的生长,但与四环素和其他靶向23SrRNA domain V区的PNA比较起来抑菌效果不理想。筛选更有效的转运肽,提高肽-PNA(G1138)的抑菌效果,是以后研究中将要努力解决的问题。

血浆游离双链DNA在原发性肝癌中的诊断价值

目的:探讨血浆中游离双链DNA(cell-free double-stranded DNA,cf-dsDNA)在原发性肝癌(primary hepa-tic carcinomas,PHC)诊断中的应用。方法:招募62例PHC患者和41例良性肝病患者以及45例健康对照,填写信息登记表。抽取治疗前患者和健康对照的空腹血样,磁珠法提取血浆cf-dsDNA,Qubit 3.0荧光计测定cf-dsDNA浓度。电化学发光法测定血清中甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原12-5(CA12-5)和癌胚抗原的水平。分析各组患者血浆cf-dsDNA水平的差异及血浆cf-dsDNA水平与PHC患者临床特征的关系,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析cf-dsDNA对PHC的诊断效率。结果:PHC患者术前cf-dsDNA水平的中位数显著高于良性肝病患者和健康对照(H=93.54,P<0.01)。PHC患者中,cf-dsDNA水平在年龄、性别、AFP水平、PHC类型以及肿瘤大小之间均无明显差异(P均>0.05)。cf-dsDNA水平与PHC的TNM分期之间存在等级相关(r_(s)=0.311,P=0.0139)。与传统肿瘤标志物相比,cf-dsDNA诊断PHC效率明显提高(AUC=0.965)。根据cf-dsDNA的临界值(>1.912 ng/μL),cf-dsDNA在PHC中的阳性率为90.32%(56/62),明显高于传统肿瘤标志物(χ^(2)=36.00,P<0.01)。结论:血浆cf-dsDNA是诊断PHC理想的非侵入性指标。

国产CA19-9化学发光检测试剂盒的评价

目的:评价两种国产CA19-9化学发光试剂盒的检测结果。方法:对54例高、中、低值的CA19-9阳性以及30例CA19-9阴性的血清用两种国产发光试剂盒以及Beckman发光试剂盒进行CA19-9检测,从准确性、精密度、阳性率以及预期值等方面与Beckman试剂进行比对。结果:国产A和B试剂盒的CA19-9结果在准确性和精密度上与Beckman结果有一定差异。国产A试剂盒的CA19-9阳性率、阳性预期值和阴性预期值与Beckman结果无明显差异(P>0.05)。当以说明书上参考范围为阳性判断标准时,国产B试剂盒CA19-9阳性率和阳性预期值与Beckman结果有明显差异(P<0.01)。但是当以>24 U/ml为阳性判断标准时,国产B试剂盒CA19-9阳性率、阳性预期值和阴性预期值均为100%。国产A试剂盒和国产B试剂盒的CA19-9结果与Beckman的结果有明显的相关性(r=0.94,P<0.01;r=0.89,P<0.01)。结论:国产试剂的CA19-9结果与Beckman结果存在明显相关性,在阳性率、诊断效率上可以与进口试剂相媲美,符合临床要求,可以替代进口产品。

女性血清CA19-9,CA24-2水平与雌二醇变化的关系

目的:探讨女性生理周期血清CA19-9,CA24-2水平与雌二醇之间的关系。方法:检测150例处于不同生理周期的女性血清CA19-9、CA24-2和雌二醇水平,分析三者之间的关系,同时以150例男性为对照。结果:女性血清CA19-9和CA24-2水平明显高于对照组(t=4.848,P<0.001;t=8.11,P<0.001)。女性血清CA19-9与CA24-2的阳性率也明显高于男性(χ2=6.621,P=0.010 1;χ2=8.219,P=0.004 1)。不同生理周期(经期、卵泡期、黄体期)的女性血清CA19-9和CA24-2水平之间差异有统计学意义(F=10.53,P<0.001;F=12.61,P<0.001)。女性血清CA19-9和CA24-2水平与雌二醇水平呈负相关,方程式分别为Y=-0.027 01X+38.62(r2=0.523 9,P<0.001)和Y=-0.016 88X+23.40(r2=0.653 1,P<0.001)。分别随访CA19-9和CA24-2水平极高的10位女性5年,结果显示CA19-9和CA24-2水平多在6个月之后明显下降并至正常水平。结论:女性血清CA19-9和CA24-2水平存在非恶性升高,与女性生理周期有关。

醇类物质及部分非离子表面活性剂对Trinder反应的影响

目的:观察醇类物质及部分非离子表面活性剂对Trinder反应的影响。方法:以醇类物质及非离子表面活性剂溶液为样本,进行Trinder反应实验。肉眼观察颜色变化,用全自动生化分析仪记录光密度值。同时观察非离子表面活性剂对尿酸检测的影响。结果:以乙醇、乙二醇、异丙醇、Triton X-100、Triton X-405、Tween20和NP40为样本的Trinder实验均产生紫红色颜色反应。这些物质水溶液的光密度值均随浓度增加而增加,非离子表面活性剂的光密度水平与表面活性剂羟值有密切联系。含有0.1%Triton X-100、Triton X-405、Tween20和NP40的血清样本的尿酸水平明显高于三蒸水对照(P<0.01)。结论:醇类物质及部分非离子表面活性剂对Trinder反应有干扰。

血清胃蛋白酶原和抗Hp IgG抗体对消化性溃疡的临床意义

目的研究血清胃蛋白酶原(PG)和抗幽门螺杆菌(Hp)IgG抗体对消化性溃疡的临床价值。方法选取2007年10月至2012年12月期间,在上海华东疗养院体检时发现的消化性溃疡115例作为溃疡组,其中胃溃疡65例,十二指肠溃疡50例。对照组为同期健康体检者,共90名,其中男女比例及年龄均与溃疡组匹配。采用胶乳增强免疫透射比浊法检测PGⅠ、PGⅡ,并计算两者比值(PGⅠ/PGⅡ,PGR),利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对受检者血清进行抗Hp IgG抗体检测。结果溃疡组中,PGⅠ和PGⅡ水平分别为(180.14±20.56)和(24.98±10.14)ng/m L,PGR为7.87±1.29,PGⅠ、PGⅡ及PGR明显高于对照组(P<0.05)。溃疡组和对照组抗Hp IgG抗体阳性率分别为77.4%和23.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hp阳性组的PGⅠ与PGⅡ分别为(165.35±22.14)及(20.75±11.26)ng/m L,PGR为7.64±2.03,明显高于Hp阴性组(P<0.05)。结论异常血清PG和抗Hp IgG抗体与消化性溃疡密切相关,并且可以作为消化性溃疡早期的筛查指标。

可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达

目的构建能在体外大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白(EGFP)的pET28a-EGFP原核表达载体。方法以质粒pEGFP-N1为模板扩增EGFP基因,EcoR I和Hind III双酶切EGFP基因序列和pET28a载体。T4 DNA连接酶连接,转化大肠埃希菌DH5α,提取载体,酶切和DNA测序鉴定。将pET28a-EGFP转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,观察荧光。体外翻译系统中加入重组pET28a-EGFP载体,孵育后观察荧光。免疫印迹法(Western blott)鉴定EGFP。结果测序证实pET28a-EGFP中的EGFP基因序列与GenBank中序列完全一致,荧光显微镜下观察到大肠埃希菌BL21(DE3)和体外翻译系统中强烈荧光,West-ern blot结果显示相对分子质量约为27 000的EGFP高效表达。结论成功构建了能在体内和体外稳定表达的可溶性天然型EGFP的pET28a-EGFP载体,为进一步体外筛选抑菌药物提供了可靠的报告载体。

血清胃蛋白酶原与抗Hp IgG抗体联合检测对胃溃疡早期筛查的临床意义

目的探讨血清胃蛋白酶原(PG)与抗Hp IgG抗体联合检测对胃溃疡早期筛查的临床意义。方法选择首次确诊胃溃疡的65例患者作为溃疡组,将同期65例健康体检者作为对照组。采用胶乳增强免疫透射比浊法检测其血清PGⅠ、PGⅡ,并计算PGⅠ/Ⅱ比值(PGR)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测受检者血清抗Hp IgG抗体。结果胃溃疡组患者血清PGⅠ、PGⅡ的平均值分别为(167.14±22.43)、(26.68±11.24)ng/mL,PGR为8.07±1.19;对照组受检者血清PGⅠ、PGⅡ的平均值分别为(52.15±20.17)、(11.26±7.68)ng/mL,PGR为3.48±1.92。两组PGⅠ、PGⅡ及PGR的差异具有统计学意义(P<0.05)。溃疡组患者血清抗Hp IgG抗阳性率为80.5%,显著高于对照组(26.3%)(P<0.05)。Hp感染阳性组受检者血清PGⅠ、PGⅡ及PGR显著高于阴性组(P<0.05)。结论血清PG与抗Hp IgG抗体联合检测可作为胃溃疡早期的筛查指标。

载脂蛋白E在心血管疾病中的诊断价值

目的对冠心病(CHD)组、心肌梗死(MI)组及对照组进行血脂等相关项目测定,运用统计学方法探讨载脂蛋白E(ApoE)与CHD及MI的内在联系。方法应用Olympus AU5400全自动生化分析仪测定各组标本的血脂相关项目指标如三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、ApoE及ApoE对CHD、MI的相关分析。结果 CHD组ApoE、TG、LDL-C、ApoB较对照组明显升高,ApoA1、HDL-C较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MI组ApoE、TG、ApoB较对照组高,MI组HDL-C、ApoA1较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MI组中ApoE与血脂相关项目的相关性高于CHD组。结论 ApoE与心血管疾病具有明显相关性,其测定结果升高可以作为MI的辅助诊断指标。

幽门螺杆菌诱导的AGS细胞培养上清中高迁移率族蛋白与白细胞介素-8的关系

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）定植在人类的胃上皮细胞表面,全世界Hp的感染率在50%以上[1].严重胃炎与感染的Hp菌株是否表达VacA和CagA蛋白密切相关[2-3].

靶向23S rRNA的多肽核酸体外抑制细菌蛋白翻译

目的 尝试研究反义多肽核酸（peptide nucleic acid，PNA）在体外翻译系统中抑制细菌蛋白的翻译。方法以增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）为报告分子，将重组载体pET-28a—EGFP和靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA在体外翻译系统中共同孵育后，用荧光显微镜观察荧光强度减弱，放射自显影证明荧光强度减弱是因为EGFP减少。为了分析PNA体外抑制蛋白翻译的浓度，我们用蛋白沉淀方法分析PNA体外抑制[^35S]methionine渗入蛋白比例。最后，用浊度分析观察PNA（G1138）在MH肉汤培养基中的抑菌作用。结果在体外翻译系统中，靶向23S rRNA do-mainⅡ区的PNA（G1138）以剂量和序列依赖方式抑制蛋白合成，抑制浓度（IC50）为0．15μmol／L。在MH培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显（MIC〉50μmol／L）。结论靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA（G1138）在体外翻译系统中能有效抑制细菌蛋白合成。在MH肉汤培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显。

幽门螺杆菌提取液诱导AGS细胞内活性氧类物质水平的变化

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染与AGS细胞内活性氧类物质（ROS）的关系。方法将Hp11638（CagA^-，VacA^-）菌株及其突变株Hp11638M（CagA^＋，VacA^-）提取液与AGS细胞共同孵育，收集细胞及培养上清液。流式细胞术检测细胞内ROS水平，分光光度计550nm处检测培养上清液中细胞色素C含量。结果AGS细胞内ROS水平与2株Hp提取液呈浓度及时间依赖关系，经Hp11638提取液刺激的AGS细胞内ROS水平高于Hp11638M提取液。细胞色素C减少证实了这一结果。结论AGS细胞内ROS升高是Hp多种蛋白共同作用的结果，VacA蛋白参与了这一过程。

HBsAg中和确认实验的再研究

HBV在我国以及整个亚洲地区有很高的感染率，根据世界卫生组织（WHO）的统计，全世界三分之一的人曾感染过HBV，其中2％-59／6为慢性感染^[1].国外检测HBsAg试剂盒说明书中均提出，对测定结果有反应性的样本，应做中和实验进行确认，排除可能的假阳性。

幽门螺杆菌提取液诱导胃上皮细胞蛋白质组变化

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与人胃腺癌上皮细胞(AGS)蛋白质组变化的关系。方法采用双向凝胶电泳分离Hp11638提取液与AGS细胞相互作用24 h后的细胞全蛋白样品,考马斯亮蓝染色,PD quest图像分析软件分析比较,识别差异蛋白,将差异蛋白进行胶内酶解,经基质辅助电离解析飞行时间质谱获得肽质量指纹图谱(PMF),通过搜索蛋白质数据库完成对差异蛋白质的鉴定。结果差异点切下酶解后经过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定,共鉴定出7个蛋白;其中经细菌裂解液刺激后蛋白表达上调的有4种,分别是烯醇化酶1变异体、Septin家族成员1 CRA_a亚型、热休克蛋白gp96前体和阿片生长因子受体1;3种蛋白表达下调,分别是线粒体翻译单元延长因子EF-Tu前体、3-alpha羟类固醇脱氢酶Ⅱb型、1型蛋白磷酸酶调节亚基3D。结论幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用的过程中,与肿瘤生物学行为相关的几种细胞蛋白表达上调;与调节细胞正常生长代谢相关的细胞蛋白表达下调。

HBsAg中和确认试验方法的应用研究

HBV在我国以及整个亚洲地区有很高的感染率，根据WHO的统计，全世界三分之一的人口曾感染过HBV，其中2％-5％为慢性感染。HBV血清学标志物检测是目前临床诊断、治疗、分析和判断HBV感染者病程及传染性的重要依据之一，也是临床实验室最主要的检测项目。在HBV感染的检测中，HBsAg是最为重要的血清学标志物，血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一。国外检测HBsAg试剂盒说明书均提出，测定结果有反应性的标本应做中和试验，排除可能的假阳性结果。

2型糖尿病患者CA242水平与唾液酸及Lewis血型物质的关系

目的探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清中CA242水平与唾液酸及Lewis血型物质的关系。方法用凝集法、ABC-ELISA法、酶法和免疫比浊法分别检测2000例T2DM患者及500名健康对照者的Lewis血型以及血清中CA242、唾液酸（SA）、糖化血红蛋白（HbAle）水平，并分析它们之间的关系。结果T2DM患者CA242水平和阳性率分别为（20470±14860）U／L、6.0％（121／2000），明显高于健康对照者的（10950±8490）U／L、0.4％（2／500），差异有统计学意义（t′=18.87，X^2=26.1，P均〈0.01）。T2DM患者SA水平为（51.5±18.6）μg/L，明显低于健康对照者的（56.3±13.8）μg／L，差异有统计学意义（t′=6.45，P〈0.01）。CA242阳性T2DM患者的CA242水平与SA呈负相关（r=-0.693，P〈0.01），与HbAle呈正相关（r=0.547，P〈0.01）。98.3％（119／121）CA242阳性T2DM患者的Lewis血型属于I型链结构。CA242阳性的T2DM患者治疗后，CA242水平显著下降，SA水平明显升高，治疗前后的CA242和SA水平分别为30570（27040—42630）、（22350±13400）U／L和（44.5±13.5）、（55.5±17.2）μg/L，差异有统计学意义（U=5.32，t′=5.53，P均〈0.01）。结论T2DM患者血清中CA242升高可能是Lewis血型的I型物质与唾液酸非酶促反应的结果，而非恶性升高。通过控制T2DM患者血糖，CA242水平能得到有效控制。