P54/cAMP/PKA信号调控在酒精依赖大鼠中的相关性研究

目的 探讨P54/cAMP/PKA信号调控在酒精依赖大鼠中的相关性。方法 使用随机数表法将SD大鼠(n=50,雄性)随机分为对照组(control组,n=10)、10%双瓶自由连续性饮酒模型组(10%ethanol组,n=10)、慢病毒阴性对照组(JL-control组,n=10)、慢病毒空载组(JL-NC组,n=10)和P54过表达组(JL-P54组,n=10),在构建模型28 d后,JL-control组、JL-NC组和JL-P54组进行转染。取五组大鼠海马组织进行Western Blot检测和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测。结果 10%ethanol组在最后7 d的酒精摄入量(16.80±0.63)ml/24 h保持稳定,饮水量(11.90±0.39)ml/24 h保持稳定,酒精偏好稳定在(57.74±1.83)%,酒精摄入量逐渐增加到达平台期,饮水量伴随饮酒量的增多而降低到稳定,酒精偏好增加到稳定;在Western Blot检测和qRT-PCR检测中,与control组比较,10%ethanol组中P54、腺苷酸环化酶(AC)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的表达量下降,差异有统计学意义(P <0.05),JL-P54组中P54、AC、PKA、CREB的表达量升高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 P54可能通过cAMP/PKA信号通路的调控参与酒精依赖的形成机制。

白藜芦醇对酒精依赖致大鼠肝损伤的相关研究

目的观察白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝损伤的保护作用。方法SD大鼠(Sprague-Dawley,SD)雄性随机数字表法分为空白对照组、酒精依赖模型组,选用20%酒精以及双瓶自由饮方式构造酒精依赖模型,模型制备成功将其随机分为酒精依赖模型组、白藜芦醇高、中、低剂量治疗组,每组8只。白藜芦醇治疗后提取大鼠肝脏组织,检测肝组织超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测大鼠肝脏组织中腺苷酸活化蛋白激酶[Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]、过氧化物酶体增生物激活受体(Peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(Peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator 1 alpha,PGC1α)的基因表达水平。结果与空白组比,酒精依赖模型组大鼠肝组织SOD、GSH-PX与CAT均成下降趋势(P<0.05),酒精依赖模型组大鼠肝组织MDA明显增高(P<0.05);与酒精依赖模型组比,白藜芦醇高剂量和中剂量治疗组SOD、GSH-PX与CAT显著增高(P<0.05),MDA显著下降(P<0.05)。与空白组比较,酒精依赖模型组大鼠肝脏AMPKαmRNA、PPARαmRNA和PGC1αmRNA相对表达量显著降低,与酒精依赖模型组比,白藜芦醇高和中剂量组对AMPKαmRNA、PPARαmRNA和PGC1αmRNA的表达显著升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可以有效改善酒精依赖大鼠肝脏组织氧化应激相关指标,其机制可能是白藜芦醇通过激活AMPK/PPARα/PGC1α信号通路降低肝脏组织氧化应激损伤进而对酒精依赖大鼠的肝脏发挥了保护作用。

DRD4/cAMP/PKA在酒精依赖大鼠海马区的表达情况

目的研究DRD4/cAMP/PKA途径在酒精依赖大鼠海马区的表达情况。方法雄性SD大鼠随机数字表法分为对照组(n=8)和模型组(n=8),双瓶连续饮用10%酒精制备酒精依赖模型,记录建模期间大鼠的体重变化、酒精摄入量、酒精偏好,通过高架十字迷宫和酒精戒断综合征评分记录大鼠的行为学变化;建模成功后,采用qPCR法检测大鼠海马组织中多巴胺D4受体(DRD4)、腺苷酸环化酶(AC)、cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)等指标的mRNA的水平。结果大鼠最后7 d酒精摄入量(7.11±0.36)g/(kg·24 h)、酒精偏好(57.30±1.86)%趋于稳定,即成功制备SD大鼠酒精依赖模型。与对照组比较,模型组DRD4 mRNA相对表达水平(2.75±0.26)显著升高(P<0.001),AC mRNA相对表达水平(0.50±0.02)、PKA mRNA相对表达水平(0.30±0.01)、CREB mRNA相对表达水平(0.47±0.07)显著下降(P<0.01)。结论DRD4可能通过调控cAMP/PKA通路在酒精依赖中发挥重要作用。

两种SD大鼠酒精依赖自由饮模型的建立

目的建立两种SD大鼠酒精依赖模型的自由饮模型,为酒精依赖的动物实验提供实验模型依据。方法以30只雄性SD大鼠为研究对象,使用随机数表法分为对照组、10%双瓶自由连续性饮酒模型组和20%双瓶自由间歇性饮酒模型组,每组10只。在构建模型28 d后,进行行为学测试(高架十字迷宫、水迷宫)和酒精戒断综合征评分。结果3组大鼠在实验中体质量变化经比较,差异无统计学意义(P>0.05);2组模型组大鼠酒精摄入量逐渐增加到达平台期,饮水量伴随饮酒量的增多而降低到稳定,酒精偏好增加到稳定;高架十字迷宫检测中,2组模型组开放臂进入次数和开放臂滞留时间较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);在水迷宫检测中,2组模型组记忆能力较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05);在酒精戒断评分检测中,2组模型组24 h戒断评分较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种酒精依赖的建模方法都可以用来开展相关酒精依赖动物实验研究。

白藜芦醇在神经系统疾病及糖尿病肾病的研究进展

白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种天然多酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡等多种药理学活性,其作为一种典型的多效用中药单体,对神经退行性病变、糖尿病、心脑血管疾病等诸多疾病具有多种潜在的治疗靶点,发挥着特有的药理作用。系统查阅国内外相关文献发现,白藜芦醇通过典型的多靶点发挥着强有力的神经系统保护作用,通过其抗氧化作用、抗血管生成、抗内质网应激、调节AMPK及ERK信号通路、调节糖脂代谢、激活自噬等机制发挥其对糖尿病肾病的改善作用。

多巴胺D4受体对酒精依赖大鼠海马区cAMP/PKA通路的影响

目的:探讨多巴胺D4受体(DRD4)对酒精依赖大鼠海马区cAMP/PKA通路的调控作用。方法:34只雄性SD大鼠,双瓶连续饮用10%乙醇制备酒精依赖模型,将建模成功大鼠根据DRD4 siRNA体内转染情况按随机数字表法分为4组,包括模型对照组、空白对照组(SD-No siRNA)、阴性对照组(SD-Ctr siRNA)和DRD4 siRNA低表达组(SD-DRD4 siRNA),采用qPCR和Western blotting检测DRD4、腺苷酸环化酶(AC)、cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)等指标的mRNA和蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组DRD4 mRNA及蛋白均明显升高(P<0.01),AC、PKA、CREB mRNA及蛋白均明显下降(P<0.01)。在体内转染24 h后,SD-DRD4 siRNA组DRD4、CREB mRNA及蛋白表达水平均低于SD-No siRNA组和SD-Ctr siRNA组(P<0.01),AC、PKA mRNA及蛋白表达水平均高于siRNA组和SD-Ctr siRNA组(P<0.01)。结论:DRD4可能通过介导cAMP/PKA通路在酒精依赖的神经生物学机制中发挥重要作用。

PDE4B在酒精依赖中对PKA通路的调控作用分析

探讨PDE4B介导PKA通路在酒精依赖大鼠杏仁核中的表达。方法:6周龄雄性SPF级SD大鼠32只,体重240~260g,按照随机数字表法分为空白对照组(n=8)和模型组(n=24)。模型组大鼠采用双瓶20%酒精间断饮制备酒精依赖模型,造模成功后,对模型组大鼠进行转染。蛋白印迹技术检测转染后大鼠的杏仁核区磷酸二酯酶4B(PDE4B)、cAMP依赖蛋白激酶(PKA)、环磷腺苷效应原件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达水平。结果:与SD-NosiRNA组相比,SD-PDE4BsiRNA组大鼠杏仁核的PDE4B蛋白表达下降,PKA蛋白表达下降,CREB蛋白表达下降,BDNF蛋白表达下降,而SD-CtrsiRNA组大鼠杏仁核各项指标无统计学差异。结论:PDE4B介导的PKA信号通路与酒精依赖的发生与发展密切相关。

NMDA受体亚型在尼古丁戒断大鼠海马组织的差异表达

目的研究N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)亚型NMDAR1、NR2A和NR2B在尼古丁戒断大鼠海马组织中的表达及观察焦虑样行为。方法20只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组和模型组,每组10只,适应性单笼饲养1周后开始建模。模型组大鼠连续7 d给尼古丁(0.4 mg/kg/次,2次/d)皮下注射,撤药72 h,建立尼古丁戒断模型。正常对照组大鼠连续7 d给生理盐水(1 mL/次,2次/d)皮下注射。采用高架十字迷宫检测两组大鼠焦虑样行为,以判断模型制备是否成功。行为学检测结束后,将大鼠异氟烷麻醉后,处死大鼠,取海马组织备用。采用qRT-PCR技术检测两组大鼠海马组织NMDAR1、NR2A和NR2B的mRNA表达,采用WB技术检测两组大鼠海马组织NMDAR1、NR2A和NR2B的蛋白表达。结果尼古丁戒断模型组大鼠明显焦虑,与正常组相比,模型组大鼠进入开放臂的次数、开放臂滞留时间、开放臂进入次数百分比、开放臂滞留时间百分比都显著降低(P<0.05),总路程无统计学差异,提示模型制备成功;qRT-PCR检测结果显示,与正常组相比,模型组大鼠海马组织中NMDAR1、NR2A和NR2B的mRNA表达显著降低(P<0.05);WB结果显示,与空白对照组相比,模型组大鼠海马组织内NMDAR1、NR2A和NR2B的蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论尼古丁戒断大鼠出现行为敏感化,NMDA受体亚型NMDAR1、NR2A和NR2B表达异常可能与尼古丁戒断后的焦虑样行为密切相关。