流动注射法探究模拟酶催化过氧亚硝酸根氧化酪氨酸的动力学特征

过氧亚硝酸根作为生物体内高活性自由基,能损伤多种生物大分子进而引起一系列重大疾病,对其含量测定和反应机制的研究具有重要意义。过氧亚硝酸根性质活泼,反应速率快,捕捉其动态过程十分困难。本文首次利用流动注射分析仪探究在不同模拟酶血红蛋白和氯化血红素的催化下,过氧亚硝酸根氧化酪氨酸体系的动力学特征。结果表明:过氧亚硝酸根在两种酶催化下氧化酪氨酸的过程均遵循MichaelisMenten的动力学规律;根据米氏常数K_m和最大初速率V_(max),推断其反应机制,经模拟酶催化的过氧亚硝酸根能直接氧化与模拟酶结合后的酪氨酸快速生成酪氨酸二聚体,未生成·OH和O_2^-·。此外,我们还检测了不同温度、pH下两种模拟酶催化的速率常数,得到血红蛋白催化该体系的最适条件为25℃和pH 8.0,速率常数k_(cat)=1.035×10~6 mol·L^(-1)·s^(-1),氯化血红素适宜在37℃和pH 9.5的条件下催化该体系,速率常数k_(cat)=6.842×10~5 mol·L^(-1)·s^(-1);比较动力学参数K_m^(Hb)(4.46μmol·L^(-1))<K_m^(Hemin)(4.90μmol·L^(-1)),V_(max)~Hb(Hb)(0.072ΔI_F/s)>V_(max)^(Hemin)(0.026ΔI_F/s),发现最适条件下血红蛋白的速率常数大于氯化血红素,得到血红蛋白对于该体系的催化活性高于氯化血红素。以上结果为探究酶催化法测定过氧亚硝酸根含量及其反应机理提供动力学参数,对于防治生物体内自由基引起的相关疾病与诊断新技术的开发奠定理论基础。

柚皮黄酮抑制硝化和氧化作用的研究

以抑制过氧亚硝酸根硝化酪氨酸生成3-硝基酪氨酸评价了柚皮黄酮的抗硝化作用;以Fenton反应产生羟基自由基体系和邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子自由基体系,用紫外可见分光光度法测定了柚皮黄酮对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除效果。结果表明,柚皮苷的抗硝化作用较强,而芦丁和橙皮苷没有明显的抗硝化作用;3种柚皮黄酮清除羟基自由基的效果在μg.mL-1水平就已经比较显著(超过50%),且显示出浓度依赖性,作用大小依次为:柚皮苷>橙皮苷>芦丁;3种柚皮黄酮在μg.mL-1水平清除超氧阴离子自由基的作用大小依次为:芦丁>柚皮苷>橙皮苷。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中硝基呋喃类代谢物

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS／MS）测定猪肉组织中4种硝基呋喃类代谢物的分析方法．样品经盐酸水解，2-硝基苯甲醛衍生，乙酸乙酯提取净化，在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱进行测定，内标法定量．在优化的实验条件下，4种代谢物在0．5—50μg/kg范围内线性良好，相关系数大于0．995，方法检出限为0．2μg/kg，定量限为0．5μg/kg．在0．5、1．0和10．0μg/kg的添加水平下，4种代谢物的平均回收率在74．6％～104．8％之间，相对标准偏差（RSD，n=6）在2．4％～15．6％之间。

停流荧光法研究牛血清白蛋白和叶酸反应动力学

叶酸属于B族维生素,作为生物体内转移一碳单位酶系中的辅酶,与其他维生素相互作用,共同维持体内红细胞的稳定,对氨基酸之间的转化、细胞的分裂生长,蛋白质合成的反应都有重要意义。药物半衰期、峰浓度和反应速度常数是研究药代动力学的重要参数,实验运用荧光分光光度计和停流光谱分析仪研究了仿生环境下牛血清白蛋白和叶酸反应的动力学参数,为叶酸相关的药物代谢参数提供参考。结果表明:利用Stern-Volmer方程处理荧光猝灭实验数据,得到25,30和37℃下叶酸对牛血清白蛋白内源荧光的静态猝灭常数分别为2.455×10^(10),4.900×10^(10)和6.427×10^(10) L·mol^(-1)·s^(-1);动力学反应速率常数的计算结果表明不同温度、pH值和缓冲介质下BSA和叶酸反应的速率常数都大于100mol·L^(-1)·s^(-1),阐明了BSA与叶酸之间的猝灭机理是通过形成复合物的静态猝灭过程;生理温度下,牛血清白蛋白浓度与其初始浓度满足二级反应公式,相关系数为0.998 7,药代半衰期t_(1/2)为0.059s;反应的表观速率常数随着叶酸浓度的增加呈线性增加趋势,且叶酸催化牛血清白蛋白荧光猝灭的速率常数k_(cat)=3.174×10~5 mol·L^(-1)·s^(-1)。此外还测定了不同缓冲介质下牛血清白蛋白与叶酸相互作用的表观速率常数和反应速率常数,以此来探讨生理介质对于二者反应的影响,为确定临床用药方案、预测药物的疗效和毒性以及合理用药有着重要意义。

问题驱动下的高中数学教学模式之应用

在如今的课程教育改革背景下,要求教师除了传授学生理论知识之外,还要培养学生的自主学习意识,从而提高学生解决问题的能力。问题驱动是一种促进学生积极学习的有效模式,在高中数学教学中开展问题驱动模式,有利于刺激学生学习的欲望,让学生的思维能力以及反应能力都可以得到很好的锻炼。本文主要就针对问题驱动下的高中数学新教学模式进行了研究。

浅谈如何提高高中数学课堂教学有效性

高中数学在当前的教学发展过程中,其方法、模式构建与侧重点等需要进行相应的优化与创新,确保学生能够在当前的课堂学习过程中,获得针对性指导与拓展性教学,进而在课程理论内容的学习过程中逐步加深公式定理方面的理解。本文从现阶段高中数学课程的教学情况出发,对课堂教学的有效性进行了不同角度研究,旨在通过相关研究成果提升当前学生理论学习的整体水平。