烟草叶斑病菌Cumuliphoma indica的生物学特性及室内药剂筛选

烟草是重要的经济作物,其叶具有较高的经济价值。近年来,随着烟草种植面积增加,叶部病害种类呈上升趋势。前期从广西壮族自治区贺州市烟区烟叶病样中分离得到2株烟草叶斑病致病菌,经多基因系统发育分析,确定为Cumuliphoma indica,是国内关于该病原菌引起烟草叶斑病的首次报道。为明确该病原菌的生物学特性并筛选防治药剂,本研究采用菌丝生长速率法,研究分离菌株菌丝的致死温度,以及其在不同培养基、温度、pH、碳源、氮源、光照周期条件下的生长情况,并测定病原菌对9种化学药剂的敏感性。生物学特性研究结果表明:C.indica菌丝生长的温度范围广,最适温度为28℃;弱酸性环境更利于菌丝生长,最适pH为5;在玉米粉琼脂培养基(CMA)和察氏培养基(CDA)上生长最快;最适氮源为蛋白胨;最适碳源为可溶性淀粉;菌丝致死温度为49℃,水浴10 min;光照对菌丝生长有显著影响,24 h全光照对其最有利。室内防治药剂筛选结果表明:9种供试杀菌剂对C.indica菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中50%啶酰菌胺WG抑菌效果最好,EC_(50)为0.025 mg/L;其次分别是50%咯菌腈FS(0.084 mg/L)、500 g/L异菌脲SC(0.217 mg/L)、450 g/L咪鲜胺EW(1.354 mg/L)、80%代森锰锌WP(6.565 mg/L)、10%苯醚甲环唑ME(9.576 mg/L)、25%吡唑醚菌酯(34.237 mg/L)和40%腈菌唑SC(38.804 mg/L);430 g/L戊唑醇SC的抑制作用最弱,EC50为42.574 mg/L。本研究揭示了C.indica的生物学特性,推荐50%啶酰菌胺WG作为防治候选杀菌剂,本结果可为由C.indica引起烟草叶斑病的有效防治提供参考和依据。

广西烟草棒孢霉叶斑病菌鉴定及毒素蛋白亚型检测

烟草棒孢霉叶斑病是影响烟草生产的主要叶部病害之一,为明确广西烟区该病害的病原菌及其毒素亚型,本研究对采自广西烟区的烟草叶斑病病原菌采用形态学、致病性、分子生物学进行鉴定。并利用毒素蛋白基因的特异性引物和对多种寄主植物的致病性进行毒素亚型测定。结果显示,广西烟草棒孢霉叶斑病菌为多主棒孢霉(Corynespora cassiicola),并首次鉴定、分析广西烟草棒孢霉病菌的毒素蛋白亚型,其中广西烟草棒孢霉病菌15个菌株中,14个菌株的毒素蛋白亚型为Cas0,1个菌株的毒素蛋白亚型为Cas7。结果表明,Cas0基因亚型较多,在靖西市同德乡首次发现烟草棒孢霉病菌中的Cas7毒素蛋白基因。本研究明确了广西烟草棒孢霉叶斑病病菌和病菌群体毒素亚型,可为防治烟草棒孢霉叶斑病提供基础依据。

烟草叶斑病病原菌Epicoccum latusicollum的鉴定、生物学特性及室内药剂筛选

叶斑类病害是危害大田期烟草的主要病害之一,大多由真菌侵染所致,病害易暴发流行,对烟草的品质及产量造成重大影响。本研究采用组织分离法从广西‘K326’烟叶具有典型病斑的叶片上分离、纯化获得菌株,通过致病性测定结合形态学特征以及分子生物学手段对病原菌进行鉴定,同时采用菌丝生长速率法测定不同培养基、温度、pH、碳源、氮源、光照,致死温度处理以及10种常用化学药剂对病原菌菌丝生长的影响。该叶斑病的典型病症为:初期烟叶产生灰白色小圆斑,病害加重圆斑逐渐扩散成不规则状,病斑中心形成穿孔,颜色为灰白色,边缘棕褐色,伴随褪绿的黄色晕圈。通过分离纯化获得2个菌株,分别命名为HZFC36和HZZS76。致病性测定结果表明,2个菌株均可在叶片无伤条件下导致健康‘K326’烟叶部产生病斑。结合形态学特征和多基因位点(LSU、ITS、RPB2和TUB2)系统发育进化分析将引起广西烟草叶斑病的病原菌鉴定为Epicoccum latusicollum。该病原菌在CMA培养基上生长最快,最适生长温度为28℃,最适pH为6,最佳碳源、氮源为蔗糖和牛肉浸粉,全光照条件更利于病原菌的生长,致死温度为47℃,水浴10 min。室内药剂初步筛选结果显示,50%啶酰菌胺和25%吡唑醚菌酯对病原菌的抑制效果最好,平均EC_(50)值分别为4.752×10^(-2)、4.989×10^(-2)mg/L。本研究结果为E.latusicollum引起烟草叶斑病的田间防控奠定了一定的理论基础。

不同杀菌剂对烟草叶斑病菌的室内毒力与田间防效

为筛选能有效抑制烟草叶斑病新病原Stagonosporopsis vannaccii的药剂,采用菌丝生长速率法测定了啶酰菌胺等8种杀菌剂对广西贺州分离菌株GHZS80、GHZS21、GHFC63、GHFC54菌丝生长的抑制作用,选择毒力较高的4种杀菌剂开展田间试验,验证其实际防病效果。室内毒力测定结果表明,啶酰菌胺和氟吡菌酰胺的毒力最高,对4株供试菌的平均EC_(50)分别为0.017、0.099 mg/L,其次是咪鲜胺(0.349 mg/L)和苯醚甲环唑(0.978 mg/L)。田间试验结果表明,以50%啶酰菌胺水分散粒剂355 g(每公顷有效成分用量)或41.7%氟吡菌酰胺悬浮剂65 g喷施3次对该病的田间防效较高,末次药后7 d的防效分别为71.11%、68.67%,显著高于其他田间施药处理。本研究结果可为防控由S.vannaccii引起的烟草叶斑病提供用药参考。

基于ITS的烤烟棒孢霉叶斑病菌分子鉴定与生物学特性

为明确贵州烤烟棒孢霉叶斑病病原菌种类及生物学特性,本研究采用常规组织分离法对贵州省采集的烟叶进行病原菌分离与纯化,根据柯赫氏法则进行致病性测定,得到两个代表菌株YC1002和YC1104,通过形态学特征及ITS序列将其鉴定为多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)。生物学特性研究结果表明:病原菌在胡萝卜琼脂培养基(CA)上生长最快,在燕麦琼脂培养基(OA)上产孢量最多,最适生长温度为30℃,最适宜pH 6,菌丝致死温度为52℃10 min,光照对菌落生长影响不大。最适碳源为麦芽糖和可溶性淀粉,最适氮源为甘氨酸和苏氨酸。研究结果可为生产上烤烟棒孢霉叶斑病的有效防治提供一定的理论依据。

广西烟草棒孢霉病菌对10种杀菌剂的敏感性及对QoIs类杀菌剂的耐药性

[目的]近年来由多主棒孢霉病菌引起的烟草棒孢霉叶斑病在广西烟区危害日益加重。为筛选出防治烟草棒孢霉叶斑病的优良杀菌剂,并针对棒孢霉病原菌对甲氧基丙烯酸酯类(QoIs)杀菌剂的耐药性进行初步探究。[方法]采用菌丝生长速率法测定10种杀菌剂对来自广西贺州、百色、河池3个烟区8株烟草棒孢霉病菌菌株的生物活性;扩增并分析了多主棒孢霉细胞色素b基因(Cytb)部分序列,以期探寻该病原菌对QoIs类的2种杀菌剂敏感性下降的分子机制。[结果]供试杀菌剂对烟草棒孢霉病菌菌丝生长均有不同程度的抑制,杀菌剂效果比较好的是咪鲜胺、氟啶胺和吡噻菌胺,EC50值分别为(0.049±0.027)、(0.063±0.045)、(0.286±0.077)mg/L。[结论]广西烟草棒孢霉叶斑病防治中杀菌剂应优先选用咪鲜胺、氟啶胺。广西烟区烟草棒孢霉病菌群体对QoIs类杀菌剂产生很高的耐药性,因此田间生产中不推荐再使用该类杀菌剂防治烟草棒孢霉叶斑病。且经试验发现多主棒孢霉抗性菌株与抗性相关的位点未出现Cytb基因突变。上述结果可为烟草棒孢霉叶斑病的有效防治提供依据,同时可为探寻烟草棒孢霉病菌对甲氧基丙烯酸酯类(QoIs)杀菌剂敏感性下降的分子机制提供参考。