外科总论实验的教学体会

外科总论的实验课是从理性认识到感性认识的过程,是连接基础与临床的桥梁,也是学习外科无菌技术、手术基本知识和基本技能的重要实践环节。为了满足医学实验及培养复合型高素质医学人才的需要,我校于2002年在临床学院成立了外科总论实验室,是医学生重要的课间实习场所。

冠状动脉旁路移植手术的护理配合

冠状动脉旁路移植手术（冠状动脉搭桥术）是用于修复或替换梗阻的冠状动脉以改善心脏心肌血供的手术。近年来，冠心病为发达国家的常见病、多发病，随着我国经济的快速发展，人民生活水平的提高、工作及生活节奏的加快，冠心病的发病率也逐年成倍增加。冠状动脉旁路移植手术是外科治疗冠心病的有效方法，它是通过体外循环用外科手术的方法将自身的大隐静脉连接阻塞血管的远端而改善心脏缺血。我院从1998年至今成立心脏血管外科以来成功地开展瓣膜置换、冠状动脉旁路移植术、先天性心脏病修复术等手术。现将冠状动脉旁路移植术的手术配合报告如下。

克氏原螯虾(Procambius clarkii)卵黄蛋白的部分生化性质

通过电泳回收的方法对克氏原螯虾(Procambius clarkii)的卵黄蛋白进行了纯化,鉴定结果显示总分子质量为481 ku,具有6个亚基(198,176,132,111,92,82 ku);染色分析表明该蛋白是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,亚基之间有1个二硫键交联.

小鼠急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度的测定

目的 建立急性脑损伤后微量脑脊液谷氨酸浓度测定方法。方法 采用邻苯二甲醛柱前衍生，梯度高效液相色谱荧光检测法测定急性脑损伤小鼠脑脊液中谷氨酸（glutamate，GLu）含量。结果谷氨酸的平均加样回收率为84．26％～125．6％（n=3），日内相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）均小于4．94％（n=3），日间相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）均小于0．78％（n=3）。急性脑损伤后6h小鼠脑脊液谷氨酸含量相对于假手术组有明显升高（P〈0．01）。结论 本方法准确、快速，可用于微量脑脊液谷氨酸含量的测定。

小鼠脑组织腺苷A2A受体缺失模型的建立与评价

制备了脑组织腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型并对该模型进行评价。在采用2次6.2 Gy X线间隔照射对敲除A2A受体基因的雌性C57BL/6小鼠进行清髓处理后,将野生型雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞移植到其体内,使其脑组织的A2A受体仍保持缺失型。然后对移植效果进行鉴定,并对模型的生理指标进行观察和评价。结果发现:骨髓移植6周后,受体小鼠的白细胞性染色体基因由雌性变为雄性;骨髓中A2A受体阳性细胞率为94.85%,而脑内A2A受体mRNA与A2A受体基因敲除小鼠比较,无显著差异。模型小鼠除心率略低于野生型小鼠外,在呼吸频率、脑含水量以及脑内谷氨酸含量等生理指标上均与野生型小鼠和A2A基因敲除小鼠无显著差异。

重庆地区正常汉族人群雌激素受体基因多态性的分布特征

目的观察雌激素受体（ER）基因多态性在重庆地区正常汉族人群中的分布特征。方法通过PCR-限制性片段长度多态性分析（RFLP）方法，检测448名重庆地区正常人ER基因多态性的分布特点，并与国内外研究比较。结果重庆地区正常人群ER基因型以Pp型，xx型和ppxx型发生率最高，这种分布特点在两性间差异无统计学意义（P〉0．05）。我国不同地域男性间ER基因型的分布差异有统计学意义（P〈0．01-0、05），女性无差异（P〉0．05）；我国女性ER基因型的分布与日拳和韩国相似（P〉0．05），与瑞典和美国差异有统计学意义（P〈0．01-0．05）。结论ER基因型的分布在不同地域、不同种族间存在显著差异，这种差异可能与某些疾病在不同地域、不同种族间不同的发病率和临床表现有关。

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的:探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果:四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组(1、10、100和1 000μmol/L)细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例(对照组:59.07±0.70;100μmol/L:65.05±0.62,t=-11.04,P<0.01),并减少G2期细胞比例(对照组:6.67±0.95;100μmol/L:1.29±0.43,t=8.89,P<0.01)。结论:腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。

脑中风患者抑郁症的中医辨证护理

脑中风后往往遗留偏瘫、不同程度的认知障碍以及语言功能的障碍等,并伴随着产生一系列情感、行为的变化,其中抑郁是脑中风后最常见的心理障碍,称之为脑卒中后抑郁症（post strope depression,PSD）,属于继发性抑郁症的一种。据国内文献报道,中风后抑郁症发生率是55%[1]。PSD不仅影响患者的生存质量,

高糖下腺苷A_(2A)受体对人视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究高糖下腺苷A2A受体对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法体外培养人RPE细胞,应用免疫组化的方法检测腺苷A2A受体在人RPE细胞中的表达;用腺苷A2A受体作用培养的人RPE细胞,将其分为高糖(33mM)+腺苷脱氨酶(ADA,2U/ml)、高糖+ADA+腺苷A2A受体特异性激动剂(CGS21680,50μM)、高糖+ADA+CGS21680+腺苷A2A受体特异性拮抗剂(SCH58261,100μM),药物组合刺激RPE细胞24h后,裂解细胞提取RNA,同时收集细胞培养液,分别应用real-time PCR和ELISA的方法检测高糖下腺苷A2A受体对人RPE细胞VEGF mRNA和蛋白的影响。结果腺苷A2A受体在RPE细胞中有表达,在高糖条件下,50μMCGS21680可以刺激RPE细胞VEGF mRNA水平升高约2.7倍,蛋白水平升高1.5倍,而再加100μMSCH58261反而使RPE细胞VEGF mRNA较前下降约40%,蛋白水平较前下降60%。结论在高糖条件下,腺苷A2A受体可以刺激VEGF的合成,因此腺苷A2A受体可能参与糖尿病性视网膜病变新生血管的形成。

腺苷对人Müller细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达的影响

目的探讨腺苷受体在人Müller细胞中的表达情况以及腺苷(adenosine,ADO)对人Müller细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA表达的影响。方法体外培养人Müller细胞系菲尔兹眼科研究所-Müller 1(Moorfields/Institute ofOphthalmology-Müller 1,MIO-M1),采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测腺苷受体mRNA在MIO-M1细胞中的表达情况;以0、1、10、100μmol/L浓度的腺苷分别作用MIO-M1细胞24h后,采用逆转录-聚合酶联反应方法检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况,对不同浓度组MMP-2和MMP-9 mRNA表达进行单因素方差分析。结果 4种腺苷受体A_1、A_(2A)、A_(2B)和A_3在MIO-M1细胞中均有表达;Real-time PCR结果显示,0、1、10、100μmol/L浓度腺苷作用MIO-M1细胞24 h后,随着腺苷浓度升高,MMP-9 mRNA的表达受到显著抑制(P<0.01,P<0.05),且呈现明显的浓度依赖关系;但各浓度腺苷对MMP-2表达均无明显作用。结论体外培养的人Müller细胞MIO-M1中有腺苷受体A_1、A_(2A)、A_(2B)和A_3表达。腺苷能够抑制MIO-M1细胞中MMP-9 mRNA的表达,并呈现浓度依赖性,但其对MMP-2表达并没有影响。

浅析新课标下高中生物探究性教学

课堂教学是新课程实施的基本途径,是老师进行课程参与、实现专业化发展的重要渠道。一、探究性学习的理论依据1.探究性学习的含义探究性教学指在老师的指导下,学生积极参与到发现问题、寻找答案的过程中,从而培养学生处理问题的能力,这种教学活动叫做探究性教学。2.建构主义理论建构主义理论的观点是,学习不是被动的接受过程,而是一个以学生本来的知识与经验为基础的主动建构过程。只有在学习的时候,学生通过自己的考虑和领会才可以建立起对生物知识的确切的理解,才可以学好生物,提升能力。

农村中学课堂纪律管理的实践与探索

在积极推行“以学生为本”教育的今天，究竟怎样看待课堂纪律呢？记得有位学者说过：“进行教学，它首先必然包含纪律管理，教师必须把纪律作为他进行教学的一个重要部分教给学生。可以肯定，其重要性不低于所规定的课程的学科内容。”可见，课堂纪律不仅是教师在整个教学过程中的一个有机组成部分，更是教师高效完成教学目标的前提和保障，同时也是培养学生自觉遵守铲德的涂释和肯法．

基于网络平台的高中生物教学探究

一、网络平台的概念网络教学平台是指通过Internet,建立一个基于网络支持的,可以提供共享学习资源和各种学习工具的虚拟学习环境。网络教学平台的结构由很多模块组成,这些功能模块覆盖教学活动中使用的硬件设备、软件系统、教学工具等。网络教学平台支持下的互动学习可以调动学生学习的积极性和主动性,课堂以学生为中心,以学生自主发展和主动学习为着眼点,为学生的健康成长创造良好环境。

农村学校校长负责制存在的问题及其原因

校长负责制在农村中小学管理上的成效是可喜的，总体上学校管理面貌发生了较大的变化，管理工作的意识明显增强。但在欠发达地区，虽然这些年也逐步实行以校长负责制为主体的一系列教育管理体制改革，但由于受一些不良社会风气的影响，个别地方中小学校在实行校长负责制的过程中，出现了许多不良现象，存在的问题主要有以下几个方面：

加强农村中小学教师聘任制的有效监督

《教师法》第十七条明确规定，“学校和其它教育机构应当逐步实行教师聘任制。”实行教师聘任制对我国教育改革与发展意义重大，如何之行有效的促进改革顺利进行，少走弯路，在一些基层农村中小学的改革中有许多需要思考的问题。

白细胞腺苷A2A受体基因缺失小鼠模型的建立

目的建立选择性外周血自细胞腺苷A2A受体基因缺失的小鼠模型。方法分别采用一次9．5GyX线照射和2次6．2GyX线间隔照射对小鼠进行清髓处理，将腺苷A2A受体基因敲除的小鼠骨髓细胞移植到清髓性处理的野生型小鼠体内，使其白细胞的腺苷A2A受体选择性缺失，并对移植效果进行鉴定。结果通过基因型鉴定发现骨髓移植6周后受体小鼠的白细胞性染色体基因PCR产物电泳条带为300和330bp；腺苷A2A受体阳性细胞率为10．21％，而野生型小鼠为96．72％；2次分割放疗结合大于6×10。个骨髓细胞的移植量可以得到满意的小鼠存活率（91％）。结论成功地建立了选择性缺失白细胞腺苷A2A受体基因的小鼠模型。

腺苷对葡萄膜黑色素细胞和葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响

目的探讨腺苷受体在正常人葡萄膜黑色素细胞和葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达以及腺苷对其细胞增殖能力的影响。方法体外培养正常人葡萄膜黑色素细胞（U95）和葡萄膜黑色素瘤细胞（$65），采用Real—timePCR检测4种不同亚型腺苷受体（、A1、A2A、A2B、A3）mRNA在U95和S65中的表达情况。以0、0．1、1、10和100μmol／L的腺苷分别作用U95和S65细胞24h和48h后，采用MTT法检测细胞光密度值和抑制率，分析不同时间、不同浓度的腺苷对U95和S65增殖能力的影响。对上述所得数据进行单因素方差分析或独立样本t检验。结果U95和S65细胞中4种类型腺苷受体A1、A2A、A3的mRNA均有表达。在U95细胞中，A1、A孙A2B、A3受体mRNA表达值分别为1．32±0．47、0．28±0．05、1．03±0．10、0．20±0．07，四者之间差异有统计学意义（F=15．90，P〈0．01），A1和A2B的mRNA表达水平相似，且明显高于A2A和凡的表达；在$65细胞中，A1、A2A、A3气受体mRNA表达值分别为1．03±0．27、2．23±0．35、127．34±18．69、0．17±0．07，四者之间差异有统计学意义（F=163．20，P〈0．01），A2HmRNA表达水平明显高于其他3种腺苷受体亚型。A2A和A。在S65中的表达明显高于其在U95中的表达量（A2A：t=9．35，P〈0．0l；A2B2Bt=11．43，P〈0．01）。作用时间24h，0．1、1、10和100μmol／L腺苷对S65细胞的抑制率分别为3．47％、14．93％、19．79％和26．04％：作用时间48h，各浓度腺苷对S65细胞的抑制率分别为11．43％、23．10％、34．76％和46．67％；随着腺苷浓度的增高，S65细胞的增殖受到明显的抑制，呈现明显的浓度效应依赖关系。而腺苷对U95细胞的增殖无明显影响。结论腺苷能够明显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，但不影响正常葡萄膜黑色素细胞的生长。腺苷和／或腺苷受体激动剂也许可以作为一种新的药物用于葡萄膜黑色素瘤的治疗。

多巴胺D2受体和腺苷A2A受体在人视网膜色素上皮细胞表达的研究

目的探讨正常人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞多巴胺D2受体和腺苷A2A受体表达情况。方法采用已建立的RPE细胞的分离和培养方法建立细胞株。取传3—4代生长良好的细胞，应用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）、细胞免疫组化方法检测培养的RPE细胞中多巴胺D2受体和腺苷A2A受体的表达情况。结果培养的RPE细胞呈多边形，平均分裂时间为2—3d，细胞内含有棕黄色色素颗粒，随着细胞分裂，细胞内的色素颗粒稀释和变少。RT—PCR和细胞免疫组化检测，显示体外培养的人RPE细胞两种受体均有表达。结论人RPE细胞有多巴胺D2受体和腺苷A2A受体的分布。

谷氨酸对腺苷A2A受体调节一氧化氮合酶活力的影响

目的探讨谷氨酸是否能够影响腺苷A2A受体对一氧化氮合酶(NOS)活力的调节。方法用1000 ng/ml脂多糖(LPS)刺激小胶质细胞,分别加入100 nmol/L A2A受体激动剂CGS21680以及不同浓度的谷氨酸(0．1,0．25,0．5 mmol/L)干预,观察NOS活力变化。结果LPS诱导NOS活力增高,激活A2A受体可以产生抑制作用；0．25及0．5 mmol/L谷氨酸和A2A受体激动剂同时存在时,NOS活力进一步增高。结论高浓度谷氨酸可逆转腺苷A2A受体激动剂抑制升高NOS活力的作用。

利用Cre／loxP系统定位腺苷A2A受体在小鼠视网膜上的分布

目的：运用Cre/loxP系统来定位腺苷A2A 受体（A2AR）在小鼠视网膜上的分布情况。方法：实验研究。将雄性B6.FVB（Cg）-Tg（Adora2a-cre KG139Gsat/Mmucd（简称A2A-cre）小鼠与雌性B6．129S6-Gt（ROSA）26Sortm9（CAG-tdTomato）Hze/J（简称Ai9）小鼠交配，对新生小鼠基因型进行鉴定，并选取5 只4 周龄A2A-cre＋，Ai9 鼠，此小鼠表达的Cre酶能敲除Ai9 小鼠中的STOP序列使Tomato荧光蛋白表达。采用免疫荧光方法分别将Tomato红色荧光蛋白与不同类型的视网膜细胞抗体共标记，通过观察Tomato红色荧光蛋白和视网膜细胞特异性抗体的共定位结果，来明确A2AR在视网膜上的定位情况。结果：免疫荧光结果显示Tomato＋细胞主要分布在视网膜神经节细胞层和内核层，外核层并没有发现。其中神经节细胞层中的Tomato＋细胞少数为神经节细胞，多数为异位无长突细胞，而分布于内核层的Tomato＋细胞主要为Müller细胞和无长突细胞。进一步对无长突细胞亚型分析发现，Tomato＋无长突细胞多数为AⅡ型无长突细胞，而胆碱能无长突细胞和多巴胺能无长突细胞并无Tomato＋表达。结论：在4 周龄A2A-cre＋，Ai9 小鼠视网膜中，A2AR主要表达于神经节细胞、无长突细胞和Müller细胞中。