沈阳市新诊断HIV感染者整合酶抑制剂原发耐药分析

目的明确沈阳市新诊断的HIV-1感染者整合酶抑制剂(integrase inhibitors,InIs)耐药株的传播情况。方法回顾性收集2018年6月至2019年3月沈阳市新诊断的HIV感染者80例,扩增血浆病毒RNA的整合酶编码基因,系统进化分析病毒基因型,以Stanford HIV耐药数据库解读耐药基因突变,计算原发耐药率并分析不同亚型毒株耐药相关自然多态性。结果80例HIV-1感染者中共检出CRF01_AE感染者51例,占63.8%;CRF07_BC感染者14例,占17.5%,B亚型感染者6例,占7.5%;其他不典型重组9例,占11.3%。2例CRF01_AE感染者检出R263K突变,1例B亚型感染者检出E138A突变,总体耐药率为3.8%。CRF01_AE感染者在整合酶耐药相关位点50、74、119、153位氨基酸具有多态性,频率分别为5.9%、2.0%、13.7%和4.0%;而CRF07_BC感染者在整合酶耐药相关位点50、74、157位上氨基酸具有多态性,频率均为7.1%。结论沈阳市新诊断HIV感染者InIs原发耐药率较低,但部分感染者在HIV整合酶耐药相关位点具有氨基酸多态性。需要加强HIV整合酶耐药监测及对我国常见HIV流行株的耐药基因型和表型研究,更好地解读HIV整合酶耐药突变的意义。

腹腔镜手术悬吊系统的设计与仿真分析

目的基于现有的气腹装置,在低气压的前提下,设计一款用于微创手术的新型悬吊系统,以暴露更多手术视野,便于手术顺利进行。方法利用Solidworks软件完成悬吊系统的结构设计,并基于有限元仿真分析技术,研究医用不锈钢、钛合金Ti6Al4V、钛合金Ti6Al7Nb和纯钛4种不同夹子制作材料以及尼龙(polyamide⁃6,PA6)、涤纶、聚丙烯(polypropylene,PP)3种不同中间平面结构制作材料对悬吊系统使用性能的影响。结果4种不同材料的夹子在夹持组织过程中,组织的形变量均较低,不会出现所夹持组织从夹子中滑脱的现象。就应力而言,选用医用不锈钢材料时,夹子及其夹持组织的应力均最低;对于中间平面结构的制作材料而言,当选取涤纶材料时,在悬吊系统工作过程中,中间平面结构会在外载荷作用下发生破坏;当选用PP材料时,中间平面结构会发生永久变形,且形变量最高,不利于临床手术的进行。结论选择医用不锈钢作为夹子的制作材料为最佳。不宜选择涤纶作为中间平面结构的制作材料,选择PA6作为中间平面结构的制作材料为最优。

应用系统进化分析作为HIV传播关系证据的专家共识

HIV主要通过性行为、共用针具吸毒等途径传播,多数由尚未知晓自身HIV感染状态的HIV感染者传播,但也有知晓自己HIV阳性仍然与他人发生高危行为,甚至故意通过无保护高危行为传播他人的HIV感染者。故意传播HIV的事件尽管报道的不多,但后果严重、影响恶劣,有时还会形成生物恐怖事件,社会危害极大。

中国部分地区HIV阳性男男性行为者合并HCV感染状况及其自然清除率调查

目的分析中国部分城市HIV阳性男男性行为者（MsM）中丙型肝炎病毒（HCV）感染状况及自然清除能力。方法以沈阳、北京、长沙和昆明市HIV确证阳性的MSM为研究对象，收集基本人口学资料及CD4^＋T细胞淋巴细胞计数、HIV病毒载量、肝脏相关生化指标等临床信息，并进行HCV抗体和HCV-RNA检测，并将HCV抗体阳性标本分为病毒自然清除（RNA-／Ab＋）和慢性感染（RNA＋／Ab＋）两种感染状态。结果在513例HIV阳性MSM中，检出HCV抗体阳性10例（阳性率为1．94％），其中4例HCV-RNA阳性（阳性率为0．77％），除l例HCV感染者正在接受抗病毒治疗HCV核酸检测阴性外，共5例感染者能够自然清除HCV-RNA。HCV自然清除者相对于慢性感染（病毒血症）者具有较低的氨基转移酶水平和较高的CD4^＋T细胞淋巴细胞水平。结论目前调查地区HIV阳性的MSM中HCV感染率处于较低水平，但仍需定期监测。

表达HIV单链抗体的重组乳酸杆菌的构建及表型分析

近年来,基于抗体药物的被动免疫策略在人类免疫缺陷病毒(HIV)预防和治疗中获得一定的成效,但仍需要定期补充抗体,才能维持体内长期有效的药物浓度,如何延长抗体药物的作用时间是亟待解决的问题。根据乳酸杆菌的食品安全性和黏膜定植稳定性,把HIV单链抗体连接到具有宿主同源启动子和信号肽的乳酸杆菌表达质粒pldhl0373中,电转化乳酸杆菌WCFS1感受态细胞,通过红霉素筛选出阳性单菌落,发酵培养后菌液经Western blot检测证明了单链抗体得到表达,并具有抗病毒能力。与野生型WCFS1菌株相比,重组菌体外生长能力未发生改变,发酵24h后菌液的CFU均可达到109/ml;单链抗体基因的插入不会明显改变重组菌黏膜细胞定植能力,每平方厘米单层上皮细胞可稳定定植105CFU的菌落。以宿主黏膜共生菌为媒介,在黏膜细胞表面实现抗病毒蛋白的长期稳定表达为预防HIV黏膜传播提供了一种新的思路。

HIV急性/早期感染者队列低病毒载量分布及对HIV核酸诊断的影响

目的明确低病毒载量在艾滋病病毒(HIV)感染后不同阶段的占比,低病毒载量的相关因素及对HIV感染诊断的潜在影响。方法 293例沈阳市男男性行为者HIV急性/早期感染队列2008-2019年随访获得的1 673人次病毒载量数据,分析<5 000拷贝/mL的低病毒载量者在感染后不同阶段的构成比例;分析上述感染者的人口学资料、病毒基因型以及CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数等潜在影响因素与低病毒载量的关系,并评估低病毒载量对HIV感染诊断率的影响。结果在1 673人次病毒载量结果中,病毒载量<5 000拷贝/mL者占比17.1%;感染后不同阶段低病毒载量者占比不同,感染0.5年内占比低于其他时期(14.1%vs. 26.8%,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,CD4细胞计数> 500个/mm^3与低病毒载量有关(P <0.05)。137人次蛋白印迹试验(WB)不确定的早期感染者样本中,病毒载量> 5 000拷贝/mL者占比85.4%;WB不确定联合核酸定量检测> 5 000拷贝/mL以上判断为HIV感染者,诊断HIV感染的敏感性为85.4%,将2 000拷贝/mL或者1 000拷贝/mL作为诊断阈值时,诊断HIV感染的敏感性分别提高到92.7%(P=0.053)及96.4%(P=0.002)。结论低病毒载量在HIV感染自然进程中占比较高,但在感染早期占比相对低;降低核酸定量检测的诊断阈值,可进一步提高HIV感染早期的诊断率。

三、四代酶联免疫吸附试验应用于HIV-1早期感染者的比较

目的评价三代ELISA及四代ELISA对于HIV早期感染血样的灵敏度、窗口期和一致率。方法收集2008至2010年在沈阳市的男男同性恋人群随访中发现HIV抗体阳转及中国医科大学附属第一医院就诊患者中发现的蛋白印迹试验（WB）确认带型不全患者HIV早期感染者血浆67份，进行三代ELISA、四代ELISA、WB确认试验及HIV-1RNA检测。比较三代ELISA、四代ELISA对阳转期标本的检测灵敏度、一致率并动态观察血清阳转过程分析窗口期。三代与四代ELISA试剂灵敏度比较卡方检验进行统计学分析。结果67份早期HIV-1感染者血清标本中，三代ELISA检出56份阳性，11份阴性，灵敏度83．6％（95％C172．5％-91．5％），四代ELISA检出63份阳性，1份灰区，3份阴性，灵敏度94．0％（95％CI85．4％-98．3％），四代ELISA灵敏度高于三代ELISA（χ^2=16．1，P〈0．01）。三代ELISA与四代ELISA一致率86．6％（95％凹76．0％～93．7％）。三代ELISA阳性者感染时间最早为16d，四代ELISA阳性者感染时间最早为9d。三、四代ELISA窗口期存在明显的个体差异。结论四代ELISA对于HIV早期感染标本的检测灵敏度明显高于三代ELISA，窗口期更短。四代ELISA更适用于高危人群中的HIV早期感染的筛查。

某综合性医院2014-2019年核酸定量检测诊断HIV感染的应用效果分析

目的分析核酸检测作为补充实验用于诊断艾滋病病毒(HIV)感染在综合性医院就诊人群的效果及影响因素。方法收集某综合性医院2014年10月至2019年9月5年间临床常规HIV筛查人群的实验室检测结果,HIV筛查试验阳性且蛋白印迹试验(WB)不确定及阴性者以HIV核酸定量检测[病毒载量(VL)]作为补充实验。以VL>5000拷贝/mL作为HIV感染的诊断标准,分析病毒载量辅助HIV诊断感染者的例数、占比、感染者VL的分布及临床特征。结果5年间,大型三甲综合性医院就诊人群HIV筛查阳性者中,共发现429例经WB结果为不确定及阴性者,病毒载量>5000拷贝/mL以上者共17例,占比3.96%;病毒载量水平<5000拷贝/mL者412例,其中20~5000拷贝/mL者4例,占0.93%;<20拷贝/mL者3例,占0.70%;未检出靶标者(TND)405例,占94.41%。随访到的44例中,7例病毒载量>5000拷贝/mL,随访时WB全部转阳;37例病毒载量<5000拷贝/mL,随访时WB全部未转阳。病毒载量>5000拷贝/mL的占比与筛查试验S/CO值、快速检测(胶体硒法)结果、WB带型等因素均有关。结论核酸定量检测作为HIV感染诊断补充实验,有助于综合性医院就诊人群中HIV早期或晚期感染的及时诊断。

HIV-1原发感染者病毒辅助受体特征分析

目的观察HIV-1感染者在原发感染早期的不同阶段，体内病毒对CCR5和CXCR4辅助受体利用特点及演变情况。方法以高危人群前瞻性队列研究的方式随访发现12例HIV-1原发感染者，分别收集感染最早期和病毒载量稳定期（病毒调定点）的血浆，提取病毒RNA，反转录（RT）．PCR，套式PCR扩增envgp160基因，连接到TA克隆载体，测序分析，以Gen02pheno、PSSMx4r5、PSSMsisi、SVM、ChargeRule5种在线生物信息学工具预测病毒株CCR5和CXCRd辅助受体利用情况。结果12例原发感染者感染早期病毒利用CCR5嗜性者有11例，利用CXCR4辅助受体1例；1例在随访10个月时检出辅助受体的转换；不同基因型预测方法的结果一致性88．3％。结论HIV-1原发感染者早期病毒主要利用CCR5受体，也有利用CXCR4受体，原发感染者在感染1年内可能发生辅助受体的转换；以基因型预测CCR5或CXCR4辅助受体宜选用多种不同的分析方法。

新疆静脉吸毒者HIV-1原发耐药分析

目的研究新疆伊犁州经静脉吸毒(IDU)感染人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)未经抗病毒治疗者原发耐药株的流行情况。方法于2009年12月—2010年3月收集新疆伊犁州77例IDU HIV-1感染者血样及流行病学信息,提取血浆病毒RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和巢式PCR方法扩增pol基因区1.3 kb片段并测序;构建系统进化树分析病毒亚型,提交斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药性分析。结果 77例感染者中,76例(98.7%)为CRF07_BC亚型,1例(1.3%)为B亚型;蛋白酶区未检出主要耐药突变,耐药相关次要突变主要出现在第10、58和71位;其中71位氨基酸突变发生频率最高(11/77),其次为第10位(6/77)和第58位(3/77);第71位氨基酸由野生型的A突变为V者7例,突变为T者3例,突变为I者1例;第10位氨基酸由野生型的L突变为I者5例,突变为V者1例;第58位氨基酸由野生型的Q突变为E者3例;1例病例逆转录酶区同时存在Y181C及M184V耐药突变。结论新疆伊犁州未接受抗病毒治疗的IDU感染者中检出原发耐药株,原发耐药率处于较低水平,但应加强该地区IDU感染者的耐药监测,防止耐药株产生和流行。

广西地区HIV合并结核感染及其他因素对HIV复制影响的研究

目的 分析合并结核（ tuberculosis,TB）感染及其他因素对广西地区HIV感染者病毒复制的影响.方法 2010年4月至2010年9月间在广西招募到未接受抗病毒治疗、CD4＋T细胞数＜350个/μl的HIV/TB感染者61例,单纯HIV感染者34例.收集人口学、流行病学、临床信息,测定HIV病毒载量.结果 HIV/TB双重感染者与单纯HIV感染者血浆病毒载量差异无统计学意义[ （5.05±0.93） lg拷贝/ml vs （5.06±0.76） lg拷贝/ml,P=0.94].二元logistic回归分析显示,CRF01_AE亚型较其他亚型HIV感染者血浆病毒复制水平高,OR=8.07 （95％CI 1.07～61.20,P=0.04）.年龄、感染途径、CD4＋T细胞数,是否合并结核分枝杆菌（MTB）感染及TB临床类型对病毒复制水平的影响均不明显.结论 广西地区CD4＋T细胞数较低的HIV感染者中,合并结核感染对病毒复制影响不明显；CRF01_AE亚型HIV-1病毒复制水平较高,在监测和治疗过程中需加强关注.

我国B’亚型HIV-1 gag基因变异与宿主HLA限制性CTL应答的关系

目的了解我国B’亚型HIVgag基因随时间进化的特征及阳性选择位点与宿主HLA限制性CTL应答的关系。方法从HIV序列数据库下载我国B’亚型HIV．1gag序列，计算不同年代病毒多样性及基因离散率，应用Hyphy软件分析Gag蛋白阳性选择位点及其与HIA限制性CTL应答的关系。结果本研究共获得来自河南、湖北、辽宁及云南地区的122条B’亚型gag序列，按采样时间分为4组：〈2001、2001-2003、2004-2006及2007-2010年，病毒多样性及离散率均随时间逐渐增加（r1=0．497，Pl〈0．001；r2=0．593，P2〈0．001）；Gag蛋白34个阳性选择位点中97．1％位于已明确的47个HLA限制性CTL表位内，HLA-A、B、C限制表位分别占43．1％、49．0％及7．9％。结论我国B’亚型gag基因多样性及离散率随着流行时间延长逐渐增加，B’亚型毒株正逐渐适应我国人群常见的HLA限制性CTL应答，提示该毒株疫苗研发时需要注意避免选用相关CTL表位为免疫原。

HIV-1逆转录酶H221Y突变对Y181C突变株复制能力影响研究

目的明确中国经抗病毒治疗HIV-1感染者中Y181c突变与H221Y突变发生情况及H221Y突变对Y181C突变株复制能力的影响。方法选取河南省经高效抗逆转录病毒治疗出现Y181C和H221Y双突变的B’亚型HIV-1感染者3例。回顾性检测其2004--2006年间抗病毒治疗后每6个月一次的随访血样，从血浆中扩增病毒pol区基因，克隆人T载体并测序，分析克隆中Y181C及H221Y突变的存在情况。构建Y181C单突变质粒及Y181C和H221Y双突变质粒，分别与包膜蛋白质粒pVSV-G共转染HEK293T细胞，包装两种突变型假病毒。分别单轮感染TZM—b1细胞，分析两种突变型假病毒单轮复制能力差异。结果共获得3例患者来自6个随访点的57条TA克隆序列，其中Y181C单突变克隆46个，Y181C和H221Y双突变克隆35个，H221Y突变均出现于已经存在Y181C突变的克隆中。在2例患者的两组假病毒中，携带Y181C和H221Y双突变假病毒的复制能力分别是Y181C单突变假病毒的1．42倍和1．62倍。结论在经抗病毒治疗的B’亚型HIV-1感染者中，H221Y突变很可能为Y181C突变的补偿突变，提高Y181C突变株复制能力。这一发现对中国B’亚型HIV-1感染者耐药基因型检测结果的解读及指导临床进行抗病毒治疗具有重要意义。