24p3/NGAL介导的铁转运途径

生物体内存在另一转铁途径。脂笼蛋白 (lipocalin)家族的成员 2 4p3/NGAL介导铁向细胞内转运 ,并在具有酸性环境的核内体 (endosome)中与铁解离 ,进而调节铁蛋白 (ferritin ,Fn)基因和转铁蛋白受体 1(transferrinreceptor 1,TfR 1)基因的表达。 2 4p3/NGA转铁途径在亚细胞水平上与转铁蛋白 (tansferrin ,Tf)类似但相互独立。在胚肾发育过程中 ,2 4p3/NGAL与Tf介导的铁转运途径为不同时期的原始肾上皮细胞生长与分化所必需。深入研究 2

小鼠24p3基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的构建小鼠24p3基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH3T3细胞中24p3/SIP24蛋白的表达情况,初步鉴定24p3/SIP24蛋白介导铁向细胞内转运的生物学功能。方法RT-PCR自小鼠肺组织中克隆24p3 cDNA。用基因重组技术构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体并行酶切和测序鉴定。脂质体DOTAP方法转染NIH3T3细胞,48 h后用G418筛选阳性克隆并培养扩增至21 d。对阳性克隆的培养基上清中24p3/SIP24蛋白的表达用ELISA和W esternb lot分析,进一步用原子吸收分光光谱观察其介导铁向NIH3T3细胞内转运的生物学功能。结果成功克隆24p3 cDNA并构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体,筛选出稳定表达24p3/SIP24蛋白的NIH3T3细胞株,24p3/SIP24蛋白在NIH3T3细胞上清中获得表达,并能介导铁向NIH3T3细胞内转运。结论24p3基因在NIH3T3细胞中获得表达,有良好的生物学活性,为进一步研究24p3/SIP24蛋白介导铁转运的生物学功能及作用机制奠定了基础。

Sca-1^+ Lewis肺癌细胞成瘤实验的研究

目的探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1+细胞的成瘤特性。方法以Sca-1作为磁珠分选细胞的表面标志,从LLC细胞中分离Sca-1+细胞,流式细胞仪鉴定分离的纯度。将分选的Sca-1+细胞、Sca-1-细胞及未分选细胞分别以1×106、5×105、1×105、5×104、2×104密度接种于C57BL/6小鼠腋窝下,观察成瘤时间,4周后处死小鼠,统计成瘤率、平均瘤重及体积。结果分选前Sca-1阳性细胞百分比为(8.06±1.03)%,分选后Sca-1阳性细胞百分比为(93.92±1.07)%。Sca-1+细胞组在2×104个细胞时可以成瘤,而Sca-1-细胞组最少需要5×105个细胞。相同接种量(1×106),4周后处死小鼠,Sca-1+细胞组的瘤重及体积均大于Sca-1-细胞组(P<0.01)。结论Sca-1+细胞的成瘤性较Sca-1-细胞强。

Sca-1^+Lewis肺癌细胞耐药实验研究

目的探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1+LLC细胞的耐药特性及机制。方法将LLC细胞培养于含有不同浓度丝裂霉素、顺铂、健择、紫杉醇的培养液中,培养72h后分别检测各组Sca-1阳性细胞的比例。以Sca-1作为磁珠分选的表面标志,从LLC细胞中分选Sca-1+LLC细胞和Sca-1-LLC细胞,RT-PCR检测各组ABCG2mRNA表达水平。免疫荧光检测Sca-1+LLC细胞与SP细胞(Hoechst33342拒染)的关系。结果随着抗肿瘤药物浓度的升高,Sca-1阳性细胞的比例随之升高。RT-PCR检测表明Sca-1+LLC细胞表达更高水平的ABCG2mRNA,免疫荧光发现SP细胞只存在于Sca-1+LLC细胞。结论Sca-1+LLC细胞的耐药性较Sca-1-LLC细胞强,与Sca-1+LLC细胞高表达ABCG2有关。

AC133和EpCAM在人肺腺癌中的表达及双阳性细胞的分选

目的:通过双重免疫荧光染色法检测人肺腺癌组织标本中AC133以及上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达,并以流式细胞术分选AC133+EpCAM+细胞,为后续人肺腺癌干细胞研究提供实验基础。方法:取人肺腺癌组织标本,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光共聚焦显微镜检测腺癌组织内AC133和EpCAM的表达。以胶原酶和分散酶将新鲜肺腺癌组织标本制为单细胞悬液,滤除其中的胶原并去除红细胞后,以AC133和EpCAM共同标记单细胞,上流式细胞仪进行分选。结果:在人肺腺癌标本中具有AC133和EpCAM的表达;通过流式细胞术可分选到AC133和EpCAM共表达细胞。结论:验证了人肺腺癌组织中AC133和EpCAM的表达情况;通过流式细胞术分选获得AC133和EpCAM双标记阳性细胞,可为人肺腺癌干细胞的后续研究提供实验基础。

肝细胞癌根治术后复发及预后因素分析

目的:探讨肝细胞癌根治术后复发及预后的危险因素。方法:回顾性分析2012年到2019年于深圳市第三人民医院行外科手术切除的肝细胞癌患者134例的临床资料。采用Logistic回归模型分析肝细胞癌术后复发的因素。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox回归模型分析肝细胞癌术后预后的因素。结果:本研究共纳入134例患者,其中75例出现肝癌复发,复发率为56%;单因素分析显示,肝细胞癌根治术后复发与肿瘤直径、术前PIVKA-Ⅱ值、微血管侵犯、临床分期有关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径>5 cm、微血管侵犯是肝细胞癌根治术后复发的独立危险因素。至随访截止,53例患者死亡,81例患者存活,中位生存期49.5个月;患者1、3和5年无复发生存率分别为72%、46%和43%,总生存率分别是89%、73%和59%。多因素Cox回归分析显示微血管侵犯是肝细胞癌根治术后生存的独立危险因素。结论:肿瘤直径>5 cm和微血管侵犯是影响肝细胞癌根治术后复发的高危因素,微血管侵犯是影响肝细胞癌术后预后的危险因素。

亚临床甲状腺功能减退症患者血小板参数与凝血4项水平及其临床意义

目的探讨亚临床甲状腺功能减退症(亚临床甲减)患者外周血中血小板参数和凝血4项的变化及其临床意义。方法选择解放军532医院2011年3月至2013年3月健康体检中心体检人员90例为研究对象,通过电化学发光免疫法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(TSH)水平,根据FT3、FT4和TSH水平将研究对象分为轻度亚临床甲减组、重度亚临床甲减组及健康对照组各30例。测定各组血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)和血小板分布宽度(PDW),以及凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)。结果 3组患者PLT差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,重度亚临床甲减组MPV及PDW升高,PT、APTT和TT时间延长,FIB升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而轻度亚临床甲减组各项指标与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论重度亚临床甲减患者PT、APTT及TT时间延长提示凝血功能减退,而MPV、PDW及FIB升高提示凝血功能亢进,这种变化可能是导致心血管疾病发生的诱因。

分子信标在活细胞内的应用

分子信标(molecular beacon,MB)可实时成像观察活细胞内多个特异性靶分子的相互作用,在肿瘤诊断和治疗上有潜在的应用前景。由于核酸酶降解、核酸结合蛋白质结合等非特异性因素,生物稳定性差、转染效率低等成为MB活细胞内应用的瓶颈。稳定的MB并结合高效的转运载体有望成为实时观察活细胞生物学过程及肿瘤诊断和治疗新的工具。

肠道微生态与肿瘤的诊断和治疗

肠道微生态与人类健康密切相关。肠道微生物组成特征改变促进肿瘤发生发展。特定肠道微生物及其代谢产物调节宿主生理功能和肿瘤微环境,显著影响抗肿瘤治疗反应及其不良反应。靶向肠道微生态的策略在肿瘤诊治中显示出有希望的应用前景。