中药盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病的作用机制探讨

目的探讨盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症的作用机制。方法以体外培养的人腹部皮肤增生性瘢痕成纤维细胞建立盆腔炎性疾病后遗症的细胞模型,应用MTT法测定成纤维细胞的生长曲线,确定此细胞处于对数生长期的时间。以中药盆炎灌肠方对细胞作用的最大无毒浓度6.25 mg/mL作用于增生性瘢痕成纤维细胞,以加药组作为实验组,不加药而加细胞培养基组为对照组,用双抗体夹心ABC-ELISA法检测两组细胞培养上清液细胞内信号转导分子Smad3和Smad7含量变化。结果与对照组相比,实验组Smad3蛋白含量明显降低(P<0.05),Smad7蛋白含量变化不明显,差异无统计学意义。结论盆炎灌肠方治疗盆腔炎性疾病后遗症的作用机制是减少成纤维细胞中Smad3蛋白的含量。

抑制miR-152对低氧诱导子痫前期滋养细胞增殖凋亡侵袭能力的影响及机制

目的探讨抑制miR-152对低氧诱导的子痫前期(PE)滋养细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及作用机制。方法体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo,分为对照组、低氧组、低氧+NC-inhibitor组和低氧+miR-152 inhibitor组。低氧+NC-inhibitor组和低氧+miR-152 inhibitor组分别转染NC-inhibitor和miR-152 inhibitor至HTR-8/SVneo细胞,低氧组、低氧+NC-inhibitor组和低氧+miR-152 inhibitor组均应用低氧环境诱导建立PE细胞模型。应用qRT-PCR检测各组细胞中miR-152的表达,分别应用CCK-8实验、流式细胞术和Transwell实验检测各组细胞的增殖活性、凋亡率和侵袭能力,应用Western blotting检测各组细胞中上皮间质转化(EMT)标志物E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。结果与对照组比较,低氧各组HTR-8/SVneo细胞miR-152表达升高,增殖活性降低,凋亡率升高,侵袭细胞数减少,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与低氧+NC-inhibitor组比较,低氧+miR-152 inhibitor组HTR-8/SVneo细胞miR-152表达降低,增殖活性升高,凋亡率降低,侵袭细胞数增多,E-cadherin蛋白的表达降低,N-cadherin蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制miR-152能够促进PE滋养细胞的增殖和侵袭,并抑制其凋亡,其作用可能是通过调控EMT实现的。

miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭、EMT的影响及其分子机制

目的探讨miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭及上皮—间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo分为过表达组、沉默组及对照组,应用脂质体转染法分别转染miR-200c模拟物(miR-200c mimics)、miR-200c抑制物(miR-200c inhibitor)、miRNA阴性对照(miR-NC)。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-200c表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察各组细胞迁移和侵袭能力(分别以细胞迁移率和侵袭细胞数表示),Westernblotting法检测各组细胞中EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Fibro⁃nectin)和Notch1蛋白相对表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c与Notch1的靶向关系。结果过表达组、对照组和沉默组细胞miR-200c相对表达量依次降低,细胞迁移率和侵袭细胞数依次升高,组间两两比较P均<0.05。过表达组、对照组、沉默组E-cadherin蛋白相对表达量依次降低,N-cadherin、Fibronectin和Notch1蛋白相对表达量依次升高,组间两两比较P均<0.05。转染Notch1-WT(野生型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为0.31±0.09,转染Notch1-WT和miR-NC的细胞为0.99±0.03(P<0.05);转染Notch1-MUT(突变型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为1.00±0.05,转染Notch1-MUT和miR-NC的细胞为1.02±0.04(P>0.05)。结论miR-200c能够抑制人绒毛膜滋养细胞的迁移、侵袭及EMT,其机制可能与靶向调控Notch1有关。

miR-519d对绒毛膜滋养细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及机制

目的观察miR-519d对绒毛膜滋养细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo,将HTR-8/SVneo细胞分为实验组和对照组,分别转染miR-519d mimics和NC-mimics,采用CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,采用Westernblotting法检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白。应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d与MMP-2的靶向关系。结果实验组细胞增殖、侵袭、迁移能力均低于对照组,MMP-2蛋白相对表达量低于对照组(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因证实,miR-519d能够靶向结合MMP-2的3'非编码区,MMP-2是miR-519d的靶基因。结论miR-519d高表达能够抑制绒毛膜滋养细胞增殖、侵袭、迁移能力,其机制可能与调控MMP-2表达有关。

妊娠期高血压疾病患者外周血miR-206和miR-483水平变化与妊娠结局的关系研究

目的:探究妊娠期高血压疾病患者外周血微小RNA(miR)-206和miR-483水平变化与妊娠结局的关系。方法:选取2021年1月至2022年6月在本院接受治疗的180例妊娠期高血压疾病患者,根据妊娠结局,将患者分为良好妊娠结局组120例和不良妊娠结局组60例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对患者血清中miR-206、miR-483表达水平进行检测。Spearman法分析妊娠期高血压疾病患者血清中miR-206和miR-483水平与妊娠结局的关系;对影响妊娠期高血压疾病患者妊娠结局的因素进行Logistic回归分析;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-206和miR-483水平对妊娠期高血压疾病患者妊娠结局的预测价值。结果:与良好妊娠结局组比较,不良妊娠结局组患者血清miR-206水平显著升高(P<0.05),miR-483水平显著降低(P<0.05);妊娠期高血压疾病患者血清miR-206水平与妊娠结局呈正相关(r=0.605,P<0.001),miR-483水平与妊娠结局呈负相关(r=-0.663,P<0.001);Logistic回归分析发现,疾病严重程度、miR-206是影响妊娠期高血压疾病患者妊娠结局的危险因素(P<0.05),miR-483是影响患者妊娠结局的保护因素(P<0.05);血清miR-206、miR-483联合预测妊娠期高血压疾病患者妊娠结局的ROC曲线下面积(AUC)为0.961,均优于其各自单独预测(均P<0.05)。结论:娠期高血压疾病患者外周血miR-206水平升高,miR-483水平降低,与妊娠结局有关,能够对患者妊娠结局进行评估。