三黄鸡ST3Gal6基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析

本研究旨在对三黄鸡ST3Gal6基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考三黄鸡ST3Gal6基因序列设计引物,采用PCR技术克隆三黄鸡ST3Gal6基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的三黄鸡ST3Gal6基因全长1169bp,含有1059bp的完整CDS编码区,编码352个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与人、黑猩猩、牛、大鼠、蟾ST3Gal6基因对应序列的同源性分别为62%、62%、61.9%、59%、54.4%。组织表达谱分析表明,ST3Gal6基因在各组织均不同程度地表达,其中在大脑表达量很高,肺脏中最低。生物信息学预测ST3Gal6蛋白结构发现,三黄鸡的ST3Gal6蛋白存在2个跨膜螺旋结构域,同时预测ST3Gal6存在22个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。

pIRES2-EGFP-prnd真核表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达

为探讨叠朊蛋白(Doppel)在正常生理条件及相关疾病中的临床及生物学意义,构建BALB/c小鼠Doppel基因prnd的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-prnd,并转染BHK细胞,IFA检测其表达情况。结果表明,Doppel蛋白通过pIRES2-EGFP-prnd在BHK细胞中表达。试验可为进一步研究Doppel蛋白的结构、正常的生理生化功能及其与相关疾病的关系提供重要工具。

猪链球菌病的病理组织学观察

通过对患猪链球菌病的猪进行病理组织学观察,以了解猪链球菌病的猪的器官病理学损伤规律,为阐明猪链球菌病的致病机制提供科学依据。

一例产房仔猪神经症状的鉴别诊断

浙江某猪场,出生1~2日龄仔猪突发死亡,死亡前表现为:四肢划水、神经症状、部分出现吐奶现象。本研究通过综合性的诊断,最终确定造成此次神经症状的原因是药物中毒而非伪狂犬感染与发病。确诊产房仔猪死亡的真实原因,制定针对性的方案,减少猪场的损失。通过猪场巡栏、猪只的剖检、荧光定量PCR的检测和组织病理学检测,来进行综合性的诊断。剖检后取样进行荧光定量PCR检测,同时送检做病理组织切片。

猪PRRSV肺脏病变程度与病毒含量相关性初探

利用临床剖检、荧光定量RT-PCR、病理切片观察等方法,研究肺脏病变、显微病变与PRRSV病毒含量的相关性,为PRRS的临床诊断提供多角度分析。

一例猪感染PRRSV的诊断

对浙江嘉兴某猪场发病猪只,通过发病情况、临床症状、病理检查和实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,qPCR)等诊断方法,确诊该猪场猪只为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染。通过对PRRSV的ORF5基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析,显示该毒株与美洲型NADC30亲缘关系最为相近。

一例PRRSV引起的母猪流产诊断分析

养猪行业在我国的第一产业中占有较大的比重,能增加养殖户的经济来源,促进我国第一产业的发展,但是在养殖中,猪极易由于多种因素产生疾病,导致猪死亡,影响农户经济,因此,对于猪类可能发生的疾病应进行重视,该文对猪繁殖与呼吸综合征进行讨论,该病有较强的传染性,会引起母猪流产,该文从血清学检测及病原学检测进行研究。

三黄鸡NHE1基因的克隆和序列分析

钠氢离子交换泵1(NHE1)是一种跨膜蛋白,作为已经被证明的J亚群白血病病毒受体在该病的进程中起着关键性的作用。为全面了解NHE1的基因及其编码蛋白的生物学信息,对三黄鸡NHE1基因进行了克隆和序列分析。参考原鸡NHE1基因序列设计引物,采用PCR技术分段克隆三黄鸡NHE1基因序列,并对其进行序列分析。结果表明,克隆得到的三黄鸡NHE1基因全长2 412 bp,含有1个2 412 bp的完整开放式阅读框,编码803个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与原鸡、鹌鹑、人、猪、鼠、牛、弓形虫的NHE1基因对应序列的同源性分别为99.8%、92%、78.1%、73.5%、80%、81.8%、40.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为99.5%、93.2%、79.3%、79.6%、78.9%、78.7%、26.8%。进化树分析发现,物种内的核苷酸序列的同源性很高,种间同源性较低。生物信息学预测NHE1蛋白结构发现,NHE1蛋白多肽链N端含有12个跨膜结构,有37个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。

RNAi技术在动物病毒性疾病研究中的应用

使靶基因表达沉默的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,由于其独特的生物学作用,已经作为动物疫病防控领域的新手段在动物病毒性疾病研究中得到了广泛的应用。本文对RNAi技术在猪病、禽病及牛病研究中的应用进行简要综述。

BALB/c小鼠Doppel蛋白的原核表达及其抗血清的制备

利用已克隆的BALB/c小鼠Doppel蛋白基因,将其成熟蛋白编码区亚克隆至表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-PRND。将重组蛋白表达载体转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot分析结果表明,BALB/c小鼠Doppel蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。对表达的蛋白进行提取和纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,初步建立了小鼠睾丸Doppel蛋白组织学分布的免疫组织化学方法。为进一步研究Doppel的结构、功能及其在TSEs发生发展中的作用提供基础材料和数据。

一例猪伪狂犬病的诊断与防控

为了对浙江省某猪场发病仔猪和流产母猪进行诊断,试验通过对猪场概况及发病情况、临床症状进行检查,对发病仔猪剖检,采集样品做病理组织切片和实时荧光定量PCR检测。结果表明:该猪场发病仔猪和流产母猪为伪狂犬病病毒感染。通过采取疫苗紧急免疫接种和加强生物安全等措施,该猪场的病情得到有效控制。