玉米纹枯病菌中新减毒病毒RsHV4的特征研究

寻找立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)中新的弱毒病毒,为玉米纹枯病提供新的生物防治资源。采用dsRNA技术从玉米纹枯病菌菌株ZYFG11中发现一种新的病毒RsHV4(Rhizoctonia solani hypovirus4),通过基因组克隆、系统发育分析、菌株生长特性测定及致病性测定等试验,对新病毒RsHV4的分类地位、减毒活性等生物学特征进行测定。结果表明,RsHV4的基因组全长为18702 nt,编码一个含5540个氨基酸的多聚蛋白(Polyprotein);系统发育分析显示,RsHV4与减毒病毒科(Hypoviridae)θ-减毒病毒属(Thetahypovirus)病毒聚为一支,其编码的蛋白质与该属的Sclerotium rolfsii hypovirus 1编码的蛋白质同源性最高,为59.46%;立枯丝核菌正常菌株JSJH6与含毒菌株ZYFG11的菌丝生长速度分别为0.50cm/d和0.41 cm/d,菌核大量形成的时间分别为培养5 d和7 d,培养10 d时50颗最大菌核的总质量分别为0.27 g和0.11 g,显示含毒菌株ZYFG11的菌丝生长速度减慢、菌核形成时间延迟、菌核体积和质量变小;接种到玉米植株2周后,接种含毒菌株ZYFG11的玉米植株第2叶鞘病斑面积占30%、第3叶鞘病斑面积占10%,接种无毒菌株JSJH6的植株第2叶鞘和第3叶鞘病斑面积达100%,说明含毒菌株ZYFG11的致病力显著降低。综上,在玉米纹枯病菌中发现了一种新的减毒病毒RsHV4,能够影响寄主真菌的生物学特征和致病力,为玉米纹枯病的防治提供了潜在的病毒资源。

高粱大斑病研究进展

高梁属禾本科高梁属,是一种重要的粮食作物,它具有抗旱、耐涝、耐盐碱、适应性强的优点,在现代农业生产上一直占有重要地位。高粱大斑病是由大斑凸脐蠕孢菌侵染引起的一种叶部病害,引起世界各地高粱产量的严重下降,造成巨大经济损失。从高梁大斑病的危害、致病菌的生理学特性、病症与传播、防治对策以及高粱大斑病菌真菌病毒等方面详细阐述了相关研究进展,并重点论述了与之相关的寄主抗性基因筛选与低毒力真菌病毒的最新研究成果,以期为今后更好地防治高粱大斑病提供参考。

松褐天牛肿腿蜂对悬铃木上天牛的控制效果

释放肿腿蜂是控制天牛的环境友好型生物防治方法之一。为评价松褐天牛肿腿蜂Sclerodermus sp.对悬铃木上天牛的防治效果,首先调查明确了荆州城区危害悬铃木的天牛种类主要为光肩星天牛,其幼虫和成虫数量分别占天牛总数量93.78%和95.45%;室内测定结果显示蜂虫比2∶1、1∶1、1∶2时光肩星天牛3个龄期幼虫寄生死亡率分别为86.67%、76.30%、33.34%;野外释放寄生蜂60 d后释放点天牛虫口减退率为52.79%-81.85%。研究结果表明,人工释放松褐天牛肿腿蜂能够有效控制悬铃木上天牛种群。

一例雏鸡IB的诊治及其病毒S1基因序列分析

为了诊断湖南常德某蛋鸡养殖场送检的10日龄雏鸡是否感染鸡传染性支气管炎病毒,试验观察了送检雏鸡的发病情况、临床症状,解剖取气管、肺脏、肾脏等病料,用针对IBV基因组M基因和3′UTR的特异性引物进行RT-PCR检测,扩增S1基因序列并进行克隆测序,与GenBank中IBV部分流行毒株、传统疫苗株和参考毒株进行序列比对,并应用MEGA 6.0分析软件构建系统进化树。结果表明:送检雏鸡表现为缩头闭目、垂翅扎堆、食欲不振、气管啰音、轻微咳嗽,排水样白色粪便;剖检可见肾脏肿大,气管上有散在出血点;经RT-PCR检测,在约290 bp处有1条特异性条带;S1基因序列与GenBank中已发表的17个毒株的同源性为75.4%～99.8%,其中与CK/CH/LJL/04Ⅰ、CK/CH/LJL/04Ⅴ、CK/CH/LJL/07Ⅱ及CK/CH/LSD/07Ⅱ的亲缘关系较近,与H120、W93、H52和M41的亲缘关系较远。通过以上检测确定该养殖场送检雏鸡所患疾病为鸡传染性支气管炎,用自配中草药治疗与调理5 d,鸡群疫情得到有效控制。

八种中草药乙醇提取物体外抗IBV增殖的研究

为了研究不同中草药的乙醇提取物对禽传染性支气管炎病毒（IBV）增殖的抑制效果,试验利用嵌合了荧光素酶的重组病毒IBV-3ab-luc与底物结合发出荧光的特性,定量检测了八种中药乙醇提取物在H1299细胞中的抗病毒活性,并对其中抑制效果最好的中药乙醇提取物的不同浓度药液对IBV增殖的抑制效果进行了检测。结果表明：皂荚乙醇提取物对IBV增殖的抑制效果最好,在病毒感染前期、中期加入皂荚乙醇提取物,病毒的数量与对照组相比均明显降低,抑制效力分别为4和5,且最佳使用浓度分别为0. 2 g/m L和0. 1 g/m L;白芍乙醇提取物在病毒感染中期加入效果较好,抑制效力为4;其他中草药乙醇提取物对病毒均无明显抑制效果。

七彩山鸡传染性支气管炎诊断与中草药治疗

湖北省荆门市某特禽养殖场饲养的4周龄七彩山鸡雏鸡出现缩头闭目、啰音、轻微咳嗽、食欲不振、排水样白色粪便等症状,剖检可见肾脏肿大,气管有散在出血点。提取气管、肺脏、肾脏组织总RNA,用6个碱基长度的随机引物进行反转录,并用针对传染性支气管炎病毒N基因和3＇末端的非编码区的特异性引物进行PCR检测。结果表明：在约1 200 bp和290 bp处各有一条特异性条带,结合发病情况和临床症状,诊断该雏鸡所患疾病为鸡传染性支气管炎。使用自配3种中药方剂进行治疗与调理,均取得了较好疗效,有效地控制了疫情。说明七彩山鸡雏鸡患有肾病型传染性支气管炎,3种自配的中药方剂均对本病有较好的治疗效果。

4种中药乙醇提取物对IBV抑制作用的初步研究

为了确定4种中草药乙醇提取物（简称提取物）对H1299细胞抗IBV的影响,试验用4种中草药乙醇提取物和表达荧光素酶的IBV-3ab-Luc病毒（简称病毒）对H1299细胞进行处理：1）加入中草药乙醇提取物24 h后加入病毒;2）同时加入提取物和病毒;3）加入病毒1.5 h后再加入提取物。检测荧光值,并计算荧光素酶活力（N）值,测定提取物对H1299细胞产生抗IBV物质的效果、抑制IBV感染H1299细胞的效果及抵制IBV在H1299细胞内复制效果的影响。结果表明：石菖蒲、七叶一枝花和海风藤乙醇提取物能促进H1299细胞产生抗IBV感染的物质,而板蓝根对其有一定抑制作用;4种提取物均能抑制IBV感染细胞,其中板蓝根、海风藤的抑制效果最显著,N值分别为5.90和4.92;4种提取物均对IBV在细胞内的复制有一定的抑制效果,其中以石菖蒲的效果最好,海风藤的抑制效果最差,但N值均小于1。

不同日龄悬铃木叶片对悬铃木方翅网蝽若虫发育及存活率的影响

采用不同日龄悬铃木[Platanus acerifolia Willd．]叶片饲喂悬铃木方翅网蝽[Corythuchaciliata（Say）]2龄若虫（低龄若虫）、4龄若虫（高龄若虫），观察该虫发育情况和存活率。结果表明，用5日龄叶片饲喂的若虫均不能取食、发育，而用15日龄、25日龄叶片饲喂的若虫取食量大，2龄若虫发育历期为55～60h，4龄若虫发育历期为82--84h，用35日龄、45日龄叶片饲喂的若虫较15日龄、25日龄饲喂的若虫历期缩短，死亡率升高。

菟丝子乙醇提取物抑制传染性支气管炎病毒感染细胞的研究

利用已构建好的嵌合荧光素酶报告基因的传染性支气管炎病毒(IBV)重组病毒IBV-3ab-luc为供试毒株,以人肺癌H1299细胞为供试细胞,通过在病毒感染细胞前、感染过程中和感染后在细胞培养体系中加入一定量的菟丝子乙醇提取物,24 h后检测相应的荧光素酶活力,明确菟丝子乙醇提取物的抗病毒机制。结果:在病毒感染细胞过程中加入菟丝子提取物,病毒抑制数量级别达到4;病毒感染细胞1.5 h后,再加入菟丝子提取物,抑制数量级达到3;不同处理之间差异显著。试验表明菟丝子乙醇提取物能够在病毒感染过程中抑制病毒增殖,并且在病毒感染细胞早期具有良好的治疗作用。

柑桔大实蝇的扩散方式及扩散历史

在回顾柑桔大实蝇(Bactrocera minax)发生文献基础上,提出被害果随河谷远距离扩散和以成虫近距离蔓延导致的片状扩散为柑桔大实蝇的主要扩散方式。以片状扩散方式为前提,以发生区的发生历史为佐证,分别考证了柑桔大实蝇在各发生区的扩散路径。

平菇液体菌种保存温度及有效期试验

试验通过液体菌种不同保存温度和有效期的试验研究,得出的初步结论是,在室温1～25℃下保存24 h,菌球均可萌发;在1～20℃下保存15 d,菌球成活率达90%以上;在21～25℃下保存15 d,鲜菇产量高于固体菌种;在5℃冰箱中保存95 d,鲜菇产量高于固体菌种。

湖北郧西地区烟蚜的种群数量动态研究

于2011～2012年系统调查了郧西烟区不同海拔和品种烟田的烟蚜[Myzus persicae （Sulzer）]数量，结果表明，不同海拔地区烟蚜数量差异显著，高海拔地区烟蚜数量明显大于低海拔地区。烟蚜对不同品种烟草的选择性不同，香料烟烟蚜发生最重，烤烟和晒烟发生较轻。2011年烟蚜的发生量远大于2012年，且有翅蚜的比例较大；2012年烟蚜发生量较轻，有翅蚜的比例始终处于较低水平。

植物乙醇浸提物抗传染性支气管炎病毒活性检测及其机制初探

为明确刀豆、皂荚和蛇麻子植物乙醇浸提物抗传染性支气管炎病毒(IBV)的作用机制,试验以嵌合荧光素酶基因的病毒株IBV-3ab-luc为供试病毒,在感染人类肺癌H1299细胞2 h后,用刀豆、皂荚和蛇麻子乙醇浸提物处理细胞,24 h后检测荧光素值,同时利用RT-PCR分析刀豆、皂荚和蛇麻子对干扰素的调控作用,研究其抗病毒机制。结果表明:皂荚和蛇麻子乙醇浸提物对病毒复制均有不同程度的抑制作用,其中,蛇麻子乙醇浸提物的抑制作用最强,皂荚的作用次之,而刀豆乙醇浸提物无显著效果;另蛇麻子和皂荚乙醇浸提物可增强β干扰素RNA的转录水平。

抗传染性支气管炎病毒的植物乙醇提取物筛选

为筛选出抗传染性支气管炎病毒(IBV)效果较好的植物,试验采用嵌合荧光素酶基因的IBV-3ab-luc为供试毒株,以人类肺癌细胞H1299为供试细胞,在升麻、丹皮、千里光、续断、元胡、龙葵6种植物乙醇提取物处理H1299细胞之前、中、后的一定时间感染,24 h后通过检测荧光素酶值,研究不同植物乙醇提取物的抗病毒机制。结果显示:丹皮的对数值为3,千里光的对数值为2,龙葵的对数值为1,升麻、续断和元胡的对数值为0。说明丹皮乙醇提取物抗IBV活性最强,其次是千里光,龙葵较差,而升麻、续断和元胡几乎没有抑制效果。

悬铃木方翅网蝽对悬铃木苗木落叶进度和生长的影响

悬铃木方翅网蝽是危害悬铃木的入侵害虫。在网室内测定了悬铃木方翅网蝽对悬铃木苗木落叶进度和生长指标的影响,结果表明:初始接虫密度对悬铃木苗木的落叶进度影响明显,高密度接虫和高密度危害能加快叶片脱落,且受害苗木叶片加速脱叶的关键期在9月下旬,但高密度接虫和高密度危害并未降低悬铃木苗木的生长高度和生长粗度。

几种植物对入侵害虫悬铃木方翅网蝽的适合性评价

实验条件下用二球悬铃木、构树、板栗、杜鹃等4种植物的幼嫩叶片饲养悬铃木方翅网蝽2龄若虫4、龄若虫和成虫,观察该虫发育、存活、寿命和产卵量,结果表明,在悬铃木叶片上悬铃木方翅网蝽能取食、发育或产卵,在其他3种植物叶片上存活时间仅2～7d左右,不能取食、发育或产卵。证实构树、板栗和杜鹃不是悬铃木方翅网蝽的寄主植物。

抑制IBV增殖的植物乙醇提取物的初步筛选

为了研究不同植物乙醇提取物抗传染性支气管炎病毒(IBV)的效果,试验采用将一定量的植物乙醇提取物和嵌合了荧光素酶基因的重组病毒IBV-3ab-luc室温混合20 min后,一同加入H1299细胞培养体系中,24 h后检测荧光素酶的活力,比较不同植物乙醇提取物对病毒的抑制作用。结果表明:三七叶的对数值为4,夏枯草干粉和车前子叶为3,麦冬为2,枸杞和桔皮为0。说明三七叶乙醇提取物抑制IBV的效果最好,其次是夏枯草干粉和车前子叶,较差的是麦冬,而枸杞果实和桔皮几乎没有抑制效果。

油菜叶乙醇提取物抑制IBV感染H1299细胞的研究

为了明确油菜叶乙醇提取物抗传染性支气管炎病毒(IBV)的作用机制,试验采用嵌合了荧光素酶基因的病毒株IBV-3ab-luc,在油菜叶乙醇提取物处理H1299细胞之前、处理过程中和之后一定时间感染细胞,24 h后通过检测萤光素酶活力,以此来明确油菜叶乙醇提取物的抗病毒机制。结果表明:油菜叶乙醇提取物与病毒混合20 min后再同时侵染H1299细胞,病毒抑制对数级达到2;病毒侵染前,用油菜叶乙醇提取物处理细胞,病毒抑制对数级为0。说明油菜叶乙醇提取物与病毒同时侵染H1299细胞,病毒增殖受阻最明显。

爬山虎乙醇提取物抗IBV的机制研究

为了明确爬山虎乙醇提取物的抗禽传染性支气管炎病毒(IBV)的作用机制,试验采用在IBV感染H1299细胞前24 h、感染细胞过程中、感染细胞1.5 h后,三个不同的时段往细胞培养液中加入一定量的爬山虎乙醇提取物,待感染24 h后,检测病毒增殖量。结果表明:爬山虎乙醇提取物在病毒感染细胞过程中和感染细胞1.5 h后加入,IBV增殖受到明显抑制,比值差异数量级均为2。说明爬山虎乙醇提取物能直接作用于病毒,并且爬山虎乙醇提取物在病毒感染细胞后再加入,病毒增殖也受阻,有明显的治疗作用。

玉米小斑病菌中一种维多利亚病毒的分离及其基因组全序列分析

从玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)中检测发现一种dsRNA(double-stranded RNA)病毒,暂命名为Bipolaris maydis victorivirus 2(BmV2)。电子显微镜下观察到病毒粒子为二十面体球状,直径为40 nm左右、无包膜;病毒基因组为单条dsRNA核酸分子,长度为5222 bp,其基因组结构与其他维多利亚病毒相似,包含两个开放阅读框(ORFs)。序列BLASTx分析发现,BmV2的基因组核酸序列与Coniothyrium minitans RNA virus Illinois isolate(CmRV-IL)具有较高的同源性(78.15%),后者CmRV-IL是单分体病毒科(Totiviridae)维多利亚病毒属(Victorivirus)的暂定种,两者的外壳蛋白(CP)和RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的氨基酸序列之间的同源性分别为88.02%和89.87%,说明BmV2、CmRV-IL是同一种病毒的不同分离物。基于BmV2和选择的单分体病毒的RdRp氨基酸序列的系统发育分析表明,BmV2与单分体病毒科维多利亚病毒属中的病毒形成了一个单系进化支。