人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。

冠心病人单个核白细胞表面粘附相关蛋白的表达

采用免疫组织化学与形态计量学的方法，观察了正常人和冠心病人外周血单个核细胞表面Ｖｎ、ＣＤ４４和ＣＤ１１ｂ三种有代表性的粘附相关蛋白的分布及量的变化。结果表明，冠心病组单个核细胞粘附相关蛋白的表达量明显高于正常人群组，三种粘附相关蛋白的在达量亦有明显差异，其表达量依次为，ＣＤ４４，Ｖｎ，ＣＤ１１ｂ。在冠心病组，三种粘附相关蛋白升高的程度不同，其中ＣＤ１１ｂ升高最为明显，其次为ｖｎ和ＣＤ４４。作者对粘附相关蛋白表达在动脉粥样硬化过程中的机制和意义进行了讨论。

大鼠动脉粥样硬化动脉壁单核细胞形态学观察

内皮铺片后用光镜、扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察了大鼠动脉粥样硬化病变过程中单核细胞的形态变化。结果表明,单核细胞的主要改变是:(1)单个或成群地粘附于内皮表面;(2)穿越内皮;(3)迁入内皮下层;(4)吞噬脂质,转变为泡沫细胞。讨论了单核细胞粘附及转变成泡沫细胞的机制和意义。

IL－6、TNF调节冠心病人单个核细胞CD11b抗原表达的研究

采用免疫组织化学碱性磷酸酶标记ＡＢＣ（ＡＢＣ－ＡＰ）法显示。并用图像分析仪进行定量分析，研究了冠心病人和正常人单个核细胞ＣＤ１１６抗原表达及白介素－６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对白细胞分化抗原ＣＤ１１６表达的调节作用。结果表明，冠心病人ＣＤ１１６表达高于正常人，ＩＬ－６和ＴＮＦ对ＣＤ１１ｂ均有上调作用，且其对冠心病人ＣＤ１１ｂ的上调作用明显高于正常人，表明冠心病人ＣＤ１１ｂ表达对细胞因子的敏感性增强。

细胞因子调节单个核细胞CD11b抗原表达的实验研究

采用免疫组织化学碱性磷酸酶标记ＡＢＣ－ＡＰ（ＡＢＣ－ＡＰ）法显示，用图像分析仪进行定量分析，研究了白细胞介素－１（ＩＬ－１）、白细胞介素－６（ＩＬ－６）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）对外周血单个核细胞白细胞分化抗原ＣＤ１１ｂ表达的调节作用。结果表明，４种细胞因子中有３种对单个核细胞表面ＣＤ１１ｂ抗原的表达有不同程度的上调作用，强度依次为ＩＬ－６＞ＩＬ－１＞ＴＶＦ；ＩＬ－１还有使ＣＤ１１ｂ抗原在细胞膜上的分布呈集中化的趋势。

粘附蛋白介导粘附信号传导的机理探讨

为了探讨粘附蛋白介导粘附信号传导的机制 ,我们进行了一系列的实验。首先观察了 CD4 4,Vn在单核细胞粘附于内皮表面过程的作用 ,然后观察了细胞因子 IL- 1、IL- 6、TNF和 IFN对 CD4 4和 Vn表达的调节作用 ,进一步观察了细胞色素 B对 CD4 4、Vn表达和单核细胞粘附的抑制作用 ,最后观察了细胞粘附对单核细胞增殖特性的影响。结果表明 CD4 4和 Vn可介导单核细胞粘附于内皮表面 ,细胞因子可上调 CD4 4和 Vn的表达并促进单核细胞的粘附 ,细胞骨架参与单核细胞的粘附过程 ,细胞粘附过程中单核细胞内 DNA含量和 PCNA表达增加。因此 ,我们推测粘附信号可通过细胞因子作用于粘附蛋白 。

乳腺注射法表达人组织型纤溶酶原激活剂的研究

目的 :构建tPA乳腺定位表达载体 ,使其在牛乳汁中高效表达 ,观察目的基因表达的规律及其影响因素 ,为建立新型牛乳腺生物反应器提供理论基础。方法 :RT PCR法克隆目的基因 ,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含tPA cDNA的乳腺定位表达载体 ;采用乳腺注射法将融合基因转入小鼠及牛的乳腺组织中。结果 :乳腺注射外源基因后 ,tPA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 :乳腺注射法可使目的基因在乳腺组织中稳定地表达较长的时间 ,其表达量与显微注射法没有明显的差异 ,表明外源基因的表达不受转基因方法的影响。但tPA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量 ,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异 ,可能受着不同的因素或调控系统的影响。

谈谈系统论方法在动脉粥样硬化发病机制研究中的应用

动脉粥样硬化(AS)是严重危害人类健康的疾病之一,多年来许多学者致力于其病变机制及防治的研究。由于现代医学科学的发展及系统论、信息论、控制论方法的广泛应用,AS形成机制的研究已有了许多新的发现和进展。许多实验证明。

巢蛋白阳性细胞在胎儿肝中的分布及形态学研究

目的观察巢蛋白(nestin)阳性细胞在发育早、中期胎儿肝中的形态及分布,探讨其在肝发育中的作用.方法取10～20周胎儿肝组织,常规石蜡切片,地高辛标记nestin寡核苷酸探针,原位杂交组织化学法显示netin阳性细胞.结果nestin阳性细胞主要分布在肝界板处或发育中的胆管周围,细胞体积较小,细胞核呈圆或卵圆形,核大,常见双核.结论肝内存在一定数量的nestin阳性细胞,该细胞具有较强的分裂增殖能力,可能是胚胎早期发育过程中隐藏在机体各种组织中的一类具有相同功能的细胞,在日后的肝细胞修复及肿瘤的发生中起着重要的作用.

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺表达的研究

目的：采用基因工程和转基因技术，以牛乳腺作为生物发酵器，生产天然高活性的人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)，探索生物制药的新方法。方法：RT-PCR法克隆人tPA cDNA，经体外扩增、测序和酶切鉴定后，装入含酪蛋白基因β-casein启动子的乳腺特异性表达载体上，扩增、酶切、纯化。采用脂质体介导法，

建设“医学发育生物学”课程培养学生的创新能力

发育生物学是当今生命科学领域中发展最快的学科之一，并已成为21世纪的前沿学科。随着基因组学和后基因组学研究的深入，对基因功能的研究已全面展开，这必将会更透彻、更深入的揭示生命的本质。发育生物学将从基因的表达与调控、基因一蛋白与酶一形态与功能的关系、以及生命变化过程的规律等诸多方面揭示生命的启动、生长发育的调控、

单核细胞与动脉粥样硬化研究进展

单核／巨噬细胞可参与动脉粥样硬化病变的全过程，因此，近年来再一次引起有关学者的关注。本文就单核细胞与内皮细胞的粘附、单核细胞的转变与泡沫细胞的形成、单核细胞与动脉粥样硬化的早期病变及单核细胞与动脉粥样硬化的增生性病变等问题及有关研究进展进行一综述。

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调。QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P<0.05);而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P<0.05)。Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P<0.05)。进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。

刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响

目的观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用。方法选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析。结果黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成。

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。

慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。

小鼠输精管内转染法建立人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺定位表达生物反应器的研究

外源基因受精卵内显微注射目前仍然是种常用的建立转基因动物的方法,但此方法操作复杂,成本高。因此利用精子作为载体将外源基因带入卵细胞内建立转基因动物成了极具吸引力的方法,并且已有一些成功的报道。虽然该方法简单,但总体来说可重复性较差。我们在建立乳腺定位表达人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)小鼠模型中,对此方法做了改进,即将脂质体包裹的外源基因在小鼠输精管及附睾管内转染精子,而非以往的在体外转染,结果:(1)五只转染小鼠,术后10天内共使10只正常母鼠受精;(2)共繁殖出79只首建者小鼠,存活42只;(3)用PCR检测首建者小鼠外源基因的整合,阳性率为7/42(16.67%);(4)用凝胶平板溶圈试验检测5只PCR阳性的雌性首建者小鼠泌乳期乳汁中的活性tPA,3/5表达,表达量在12—20IU/ml之间(约相当于48—80ng/ml);(5)PCR检测4只子一代小鼠外源基因的遗传情况,阳性率为2/4。

组织胚胎学投影教材的制作与应用

组织胚胎学是一门重要的医学基础课程,其主要内容为机体微观形态及其功能的描述,微观形态在我们的宏观世界里属于看不见,摸不着的东西,因此在学习的过程中教师的语言描述显得十分重要,如何使学生能掌握并牢记重点内容是我们教学中的难点,而掌握好重点和难点关键是理解微观形态和功能的相关.学习组胚时的学生均为医学院的新生,对组织胚胎学内容非常生疏,记忆起来更觉得困难.怎样才能更好的运用宝贵的课堂教学时间,而带领学生尽快地适应新课程的学习、掌握并学到更多的知识,是一名教师的职责.近两年来我在教学实践中编写了投影教材,并改进了投影胶片的制作方法,实践表明,它可以帮助教员达到上述目的,并收到了良好的教学效果,现介绍如下.1 投影教材的选材与编排投影教材力求重点突出,对每次课的内容进行高度的概括,语言精练、准确,用尽量少的字数表达最完整最准确的概念.在此基础上做到层次分明,条理清楚,从大的概念过度到小的概念油浅入深使之达到化难为易,化繁为简,易记易懂的效果.如在讲授基本组织学的上皮组织时,首先列出上皮组织的几大特点,接下去介绍上皮组织的分类,然后再详细介绍各种上皮的特点及其形态中的特殊结构.遇重点和难点,做出适当的标记,以求画龙点睛.

精原干细胞体内转染途径建立转基因小鼠的可行性研究

目前,生产转基因动物的难度很大,成功率很低,这是因为制备转基因动物的主要方法是向受精卵原核中注射DNA。这种方法有其弱点,首先作为外源基因受体细胞的受精卵数量有限;其次外源基因的整合和表达的筛选工作不能在细胞水平上进行,只能在子代动物出生后,即在个体水平上进行选择,这就增加了工作量,而且周期长,成功率低,成本大,在大动物上实施起来尤其困难。这就要求我们找到一种更为有效而又简捷的转基因动物的制备方法。