3种微创技术治疗慢性硬膜下血肿的疗效分析

目的比较单骨孔、双骨孔及小骨窗技术外科治疗慢性硬膜下血肿(chronic subdural hematoma,CSDH)的手术疗效。方法回顾性分析2005年10月至2010年12月手术治疗的125例CSDH患者的临床资料,将患者分为3组:单骨孔组31例,骨孔直径1 cm;双骨孔组50例,骨孔直径1 cm,分别于血肿前后各钻骨孔1个;小骨窗组44例,术中将骨孔扩大成直径2～3 cm的骨窗。结果 3组患者术后7 d的残存血肿量及出院时的神经功能状态无明显差异(P>0.05)。单骨孔组的手术时间较双骨孔组及小骨窗组明显缩短(P<0.05)。单骨孔及双骨孔组在住院天数、并发症方面无明显差异(P>0.05),但均较小骨窗组明显增高(P<0.05)。单骨孔组的复发率较双骨孔组及小骨窗组明显增高(P<0.05),后2组间无明显差异(P>0.05)。多变量回归分析显示手术方式是影响术后复发的独立因素,相对于单骨孔技术,双骨孔技术复发率的降低具有统计学意义(OR=0.148,95%CI 0.026～0.847,P=0.032)。结论小骨窗技术可作为治疗CSDH首选的治疗方法,双骨孔技术可有效降低术后复发率,尤其适用于术后复发患者。

直接经鼻蝶入路垂体腺瘤切除的手术并发症

目的总结单鼻孔直接经蝶窦入路垂体腺瘤切除术的手术并发症。方法回顾分析2005年10月-2008年6月施行单鼻孔直接经蝶窦入路垂体腺瘤切除术患者的手术并发症及其发生原因。结果 220例患者中无功能性腺瘤143例,功能性腺瘤77例;微腺瘤41例,大腺瘤147例,巨大腺瘤32例。手术并发症发生率约为44.55%(98/220),其中鼻内并发症34例(15.45%),蝶窦并发症4例(1.82%),鞍内并发症25例(11.36%),鞍上及鞍旁并发症8例(3.64%),内分泌系统并发症27例(12.27%)。共死亡4例,手术死亡率为1.82%,死亡原因为鞍上继发性出血。结论大多数死亡病例和并发症均发生于单鼻孔直接经蝶窦入路垂体腺瘤切除术开展早期,提示直接经鼻蝶入路切除垂体腺瘤手术安全有效。手术并发症与术者手术技巧、临床经验和治疗策略正确与否有关。

高密度Oligo基因芯片筛选小鼠嗅球发育相关基因的研究

目的 研究小鼠嗅球发育相关基因表达谱,探讨嗅球(olfactorybulb ,OB)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone ,SVZa)神经干细胞的迁移及分化中的作用。方法 采用165 0 0点的小鼠高密度Oligo基因芯片对胚胎16d(embryonicday16,E16)、生后1d(postnatalday 1,P1)、7d(P7)、2 1d(P2 1)OB的基因表达情况进行检测,以4个时相点全脑等量混合样品作为对照。结果 通过筛选基因表达谱,得到5 2 77条在E16、P1、P7及P2 1OB中均有表达的基因,然后采用两两对比组合,得到6组数据,从中筛选出了5 81个差异在3倍以上的基因,分层聚类分析将其分为6大类,进一步分析了与SVZa区神经干细胞的迁移相关基因Slit2聚类同组的2 8个基因及与多巴胺神经元分化相关基因TH聚类同组的17个基因。结论 在小鼠嗅球发育中发现了5 81条表达差异≥3倍的基因,进一步通过对与Slit2相关的2 8个基因及与TH相关的17个基因的分析有助于揭示SVZa神经干细胞迁移及向多巴胺神经元分化的作用机制。

实时荧光RT-PCR检测DLX2基因在小鼠前脑中的表达

目的探讨DLX2基因在小鼠前脑神经干细胞的增殖、迁移及向多巴胺能神经元分化过程中的作用及意义。方法在小鼠胚胎16d(E16)、生后1d(P1),7d(P7)、21d(P21)4个时间点,分别取室管膜前下区(SVZa)、嘴侧迁移流(RMS)及嗅脑(O B)3个部位,应用SYBR Green I实时相对定量荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测DLX2基因在小鼠前脑中的表达情况,以DLX2基因相对表达值(Ratio)值大于1.4为差异表达。结果从部位看,OB区E16的表达较其他3个时间点低,RMS区P21的表达较其他3个时间点低,SVZa区E16及P1的表达较P7及P21高。从时间点看,在E16时间点3个部位的表达无差异,另3个时间点中OB较RMS及SVZa高表达。结论DLX2参与了小鼠前脑中神经干细胞的增殖、迁移及分化过程,其关系具有时间及部位特异性。

无功能垂体腺瘤并梗塞性卒中2例报告

目前对于垂体腺瘤并梗塞性卒中的诊断及治疗仍有争议,本文报告3年来我科收治的2例患者的治疗情况,并行文献复习,报告如下。

高密度Oligo芯片筛选小鼠嗅球发育中DLX2相关基因

目的筛选小鼠嗅球发育中调控同源盒转录因子2(DLX2)的相关基因,探讨室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制。方法利用16844点的高密度Oligo芯片检测发育期嗅球的基因表达情况,采用基因神经网络分析,筛选与DLX2相关的基因。结果从2398个在4个时间点都表达的基因中筛选出623个差异基因,在相关系数设定为0.95水平上,共筛选出29个与DLX2相关的基因。29个基因中,已知功能的基因有13个,主要与代谢、凋亡、发育及信号传导功能相关,未知功能的基因有16个。结论在嗅球中可能有29个基因参与了DLX2的表达调控,对它们进一步的研究将有助于理解室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制。

神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的:神经干细胞的发现为神经系统退行性疾病的治疗,提供了新的方法。通过碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)反应性神经干细胞的移植,探讨神经干细胞在帕金森病(Parkinson'dis-ease,PD)治疗中的作用。方法:体外用bFGF作为丝裂原培养E16大鼠中脑神经干细胞,经BrdU标记后植入PD大鼠纹状体,了解PD大鼠旋转行为的改善情况。结果:神经干细胞移植组PD大鼠旋转行为改善明显。结论:bFGF反应神经干细胞移植对PD有明显的治疗作用。

hTERT转染神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA检测

目的以逆转录病毒PLXSN为载体,将hTERT基因转染入体外培养的人神经干细胞,检测神经干细胞端粒酶活性及hTERT mRNA表达情况,为建立永生化神经干细胞系提供一种新的思路。方法体外扩增人神经干细胞及基因转染后,应用PCR-ELISA法检测神经干细胞端粒酶活性,荧光定量PCR法检测hTERT mRNA表达情况。结果通过逆转录病毒介导的hTERT基因转染人神经干细胞后,端粒酶活性明显升高,持续表达,hTERT mRNA也早期呈高水平表达,但继之下降,维持在一个较低水平。结论转染hTERT基因后的神经干细胞具有表达高水平端粒酶活性,并稳定表达,这为建立基因工程的永生化神经干细胞系奠定了基础。而hTERT mRNA则逐渐下降,并维持在一个较低水平,不能作为检测神经干细胞增殖和分化能力的指标。

SVZa神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究

目的研究骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)及星形胶质细胞条件培养液(astrocyte-conditioned medium,ACM)在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞分化为多巴胺能神经元中的作用。方法体外培养SVZa神经干细胞,然后分为对照组、BMP2组、ACM组、BMP2+ACM组,通过免疫组化和流式细胞仪技术检测各组中SV-Za神经干细胞分化为TH+(酪氨酸羟化酶)细胞的比例。结果各实验组的TH+细胞比例均明显高于对照组,其中BMP2+ACM组分化比例最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMP2及ACM可以促进SVZa神经干细胞向多巴胺能神经元分化,而且BMP2与ACM有正协同作用。

显微手术切除中央回区巨大脑膜瘤13例疗效研究

目的探讨显微镜下切除中央回区脑膜瘤的手术方法及疗效。方法回顾性分析2009年3月至2010年6月该科采用显微外科手术切除中央回区巨大脑膜瘤13例的临床资料。结果术后功能障碍好转12例,无效1例;随访2～16个月,未见肿瘤复发。结论显微手术定位准确,能较好地保护好功能区皮质、回流静脉结构和功能,能提高治愈率,减少病残率。

小骨窗经额叶入路治疗高血压基底节区脑出血

基底节区是高血压脑出血的主要好发部位,目前仍没有统一的治疗策略。目前微侵袭外科治疗技术逐渐成为主流,但对其手术指征、手术方法及疗效评估等,在神经外科领域一直存在争议[1]。我科于2007年12月至2014年3月采用小骨窗经额叶入路治疗高血压基底节区脑出血8例,术后效果满意,现总结报道如下。

Id2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠SVZa神经干细胞,正义Id2、反义Id2真核表达质粒转染SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Id2作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。采用Western blot检测不同浓度的骨形成蛋白2(bonemorphogenenticprotein2,BMP2)诱导下Id2蛋白的表达变化。结果正义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例小于空白对照组,反义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;随着BMP2浓度的增加,Id2的表达增加。结论Id2抑制体外培养的P0SVZa神经干细胞向神经元方向分化,BMP2可以促进SVZa神经干细胞Id2的表达,它们共同参与调控SVZa神经干细胞向神经元分化的过程。

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响(英文)

背景:神经干细胞(neuronalstemcells,NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parkinsondisease,PD),但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)基因脑内移植能缓解PD的症状,TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的:探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计:完全随机对照实验。地点和对象:本实验选择105只大鼠,在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预:构建pN2ATH反转录病毒载体质粒,用PA317细胞包装,G418筛选阳性克隆,病毒上清感染NSCs,将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠纹状体内,测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenylaceticacid,DOPAC)含量变化。主要观察指标:PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果:TH基因修饰的NSCs移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为,增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论:TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量,降低PD大鼠旋转行为,从而对PD大鼠有明显的治疗作用。

hTERT基因转染人神经干细胞向永生化细胞转变实验研究

目的明确外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)在人神经干细胞永生化过程中的作用。方法利用构建了hTERT基因的逆转录病毒载体PLXSN转染人NSCs,G418筛选后,扩大增殖,稳定后观察其生物学特性,检测端粒酶活性,通过核型分析、裸鼠移植致瘤性观察来了解转染细胞特性。结果hTERT基因转入培养的NSC后,端粒酶活性增强,细胞增殖加速,传代时间缩短,传代50代仍稳定增殖,核型分析正常,无致瘤性。结论hTERT基因转染NSCs,能获得永生化细胞,其表型能得以正常维持,可以作为进一步研究的种子细胞。

SVZ神经干细胞分化过程中的Bmp4启动子活性分析

目的 室管膜下层 (Subventricularzone ,SVZ)神经干细胞分化过程中的Bmp4启动子活性分析及其与神经元分化的关系。方法 在构建Bmp4启动子———红色荧光蛋白报告载体基础上转染SVZ神经干细胞 ,动态地观察报告基因在SVZ神经干细胞分化过程中的表达 ,并进行显微计数和神经元标志物流式细胞仪检测。结果 SVZ神经干细胞贴壁分化过程中具有较高的Bmp4启动子活性 ,48h阳性率达到 8.6%,且明显高于皮层神经干细胞。SVZ神经干细胞的Bmp4启动子活性与神经元分化高度正相关 (r =0 .80 5 ,P <0 .0 5 ) ,皮层神经元分化与Bmp4启动子活性相关不明显。结论 采用启动子活体荧光标记 ,能够较好地反映正常情况下内在蛋白的表达情况 ;Bmp4启动子活性与SVZ神经干细胞向神经元的分化高度相关 。

BMP2在SVZa神经干细胞向TH^+神经元分化中的作用

目的研究BMP2对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞分化为TH+(酷氨酸羟化酶)神经元的作用。方法体外培养SVZa神经干细胞,以0、0.1、1、10、20、100(ng/ml)浓度的BMP2分别诱导SVZa神经干细胞分化,通过免疫组化和流式细胞仪技术检测不同浓度下SVZa神经干细胞分化为TH+神经元的比例。结果0.1~100(ng/ml)组的TH+细胞比例均明显高于0ng/ml组,10ng/ml组达最高峰,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BMP2可以促进SVZa神经干细胞向TH+神经元分化,可以明显提高分化比例。

细胞凋亡在帕金森病发病机制中的作用

目的研究帕金森病(PD)病因中细胞凋亡的发生及作用机制。方法应用6－OHDA毁损大鼠纹状体,以制备PD大鼠模型,应用酪氨酸羟化酶(TH)和DNA原位末端标记免疫组化双标染色检测黑质内多巴胺(DA)神经元细胞凋亡的发生及其变化规律。结果成功复制出符合临床特点的PD大鼠模型,其黑质内DA神经元的丢失是以细胞凋亡为主要形式,且于术后2周及1月为最明显,术后2个月仍然存在细胞凋亡情况。结论黑质内DA神经元细胞凋亡的发生将使其数目减少,从而导致帕金森病的发生,其机制可能与纹状体区病变有关。

基因修饰的神经干细胞脑内移植后TH表达和神经递质的变化

目的 探讨经TH基因修饰的神经干细胞脑内移植后 ,PD模型动物脑内TH表达和神经递质的变化。方法 构建 pN2 ATH逆转录病毒载体质粒 ,用PA3 17细胞包装 ,G418筛选阳性克隆 ,病毒上清感染神经干细胞 ,将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内 ,观察移植后TH的表达情况以及DA和DOPAC含量变化。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植 2月内 ,TH在纹状体内的表达增加 ,纹状体DA和DOPAC含量增高 ,好于单纯神经干细胞移植组和对照组 ,但比正常水平低。结论 TH基因修饰的神经干细胞 ,脑内移植能增加纹状体内TH的表达以及DA和DOPAC含量 ,为其脑内移植治疗PD提供了理论基础。