牦牛WDR43基因的克隆、表达和功能分析

WDR43(WD Repeat Domain 43)是一种核糖体生成因子。本研究旨在分析牦牛WDR43序列的结构功能及其在牦牛组织和早期胚胎不同阶段的表达情况,从而为研究WDR43在牦牛早期胚胎发育过程中的作用机制提供实验依据。本实验选取30~90 d胚龄左右的牦牛胎儿(n=2)和3~4岁健康的母牦牛(n=2)作为材料,克隆获得牦牛WDR43的编码区,生物信息学分析预测WDR43功能并通过qRT-PCR获得WDR43在牦牛不同组织的表达情况。结果表明,牦牛WDR43编码区长度为2046 bp,编码681个氨基酸,该序列有45.23%可能形成无规则卷曲,29.37%形成α螺旋,20.41%形成延伸链,4.99%形成β-转角。WDR43总体带正电荷,属于不稳定蛋白,无跨膜结构及信号肽。WDR43氨基酸序列高度保守,与牛、山羊、绵羊和野猪WDR43基因同源性较高,分别为98.85%、98.53%、98.09%和93.83%。WDR43在卵巢的表达量显著高于其他组织,并且在早期胚胎过程中均有表达,说明WDR43可能参与了牦牛的早期胚胎发育。本研究成功获得了牦牛WDR43基因编码区序列,分析其结构功能并明确其在牦牛不同组织的表达模式,为进一步研究WDR43基因在牦牛早期胚胎发育过程中的作用机制奠定了基础。

大鲵皮肤水溶性蛋白质成分分析及活性鉴定

该试验旨在研究大鲵(Andrias davidianus)皮肤水溶性蛋白成分及其活性,揭示大鲵皮肤黏液的蛋白组分,鉴定具有潜在功能活性的蛋白质。通过物理和化学刺激的方法收集大鲵皮肤黏液,制备大鲵皮肤黏液水溶性蛋白样品,并通过SDS-PAGE垂直电泳、细菌凝集试验、氧化物清除效率试验以及蛋白质谱Label-free分析大鲵皮肤黏液水溶性蛋白的成分以及活性。结果表明:大鲵皮肤黏液中含有多种水溶性蛋白,分子量介于10~300 kDa之间,其中50 kDa分子量以上蛋白条带较为丰富,在100 kDa分子量以上含有较多蛋白,14 kDa以下蛋白含量较少。大鲵皮肤黏液水溶性蛋白对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABST)2种自由基具有清除能力,说明其具有一定的抗氧化活性。大鲵皮肤黏液水溶性蛋白对大肠杆菌和嗜水气单胞菌2种细菌具有较强的凝集作用,暗示大鲵皮肤水溶性蛋白具有一定的抗菌活性。蛋白质谱Label-free分析表明这些蛋白是由66种蛋白质组成;通过分子注释有20种蛋白与免疫抗病功能相关,2种蛋白与抗氧化活性相关。研究揭示大鲵皮肤黏液水溶性蛋白含有66种蛋白,分子量介于10~300 kDa,活性鉴定结果显示大鲵黏液水溶性蛋白具有抗氧化活性和抗菌活性。