生物节律基因Timeless的生物学功能研究进展

Timeless基因广泛分布于生物体中,是主要的生物节律基因之一,它通过与节律基因Per和Cry家族成员的相互作用影响它们的表达水平。Timeless和Tipin能够稳定复制叉,促进姊妹染色单体凝聚,对DNA复制有促进作用;在细胞周期中激活S期检测点,参与ATR-Chk1和ATM-Chk2的DNA损伤修复通路,加强细胞周期的阻滞以修复DNA损伤。Timeless是生物节律和细胞周期的连接者,在多种癌组织(如肝癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、肾癌和胰腺癌)中的表达水平与癌旁非癌组织相比有差异,提示Timeless表达异常可能与肿瘤的发生和发展相关。

体外细胞炎性损伤模型的建立

目的体外复制细胞炎性损伤模型用于体外炎症研究。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养后分组,用不同浓度(0、0.1、1、10、20μg/ml)的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点(4、12、24、48h)收样品,检测细胞上清中的白介素-6(IL-6)水平。结果每个时间点的HUVEC:LPS(0.1、1、10、20μg/ml)比LPS(0μg/ml)刺激后IL-6分泌明显增高(P<0.05);48h内随时间增加,IL-6分泌增加,呈线性关系;相同时间点不同LPS浓度(0.1、1、10、20μg/ml)刺激细胞产生的IL-6分泌差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外LPS刺激HUVEC是理想的细胞炎性损伤模型。

11β-HSD2重组真核表达载体构建及对A549细胞IL-6的影响

目的本文旨在构建11β-羟基类固醇脱氢酶2（11β-HSD2）基因的重组真核表达载体，并检测其转染人哺乳动物细胞后对白介素6（interleukin-6，IL-6）表达水平的影响。方法用PCR方法扩增11β-HSD2基因的全长cDNA，先亚克隆至pGMT载体，测序正确后再亚克隆至pcDNA3．1myc-hisC以构建其重组真核表达载体。将重组的真核表达载体瞬时转染人肺腺癌细胞系A549，用Western blot方法鉴定表达情况，并用ELISA方法检测IL-6表达水平。结果测序表明11β-HSD2的重组真核表达载体构建成功，Western blot显示真核表达载体能够在A549细胞中成功表达，并可使IL-6表达水平升高。结论成功构建了11β-HSD2基因的重组真核表达载体，初步验证了该基因的促炎效应。