2012年上海地区副溶血性弧菌血清分型和毒力基因携带状况研究

为了解2012年上海地区副溶血性弧菌人源株和食源株的优势血清型及其毒力基因携带状况，本研究收集了2012年从上海市15个区（县）腹泻患者和食品监测中分离的副溶血性弧菌株，进行血清分型，并采用聚合酶链反应（PCR）检测 tdh和trh基因。结果显示，854株副溶血性弧菌中，88．1％为血清可分型，89．8％为产毒株。O3∶K6、O4∶K8、O1∶K25、O4∶K68、O4∶K9、O1∶K36、O3∶K29为上海地区可分型人源株的优势血清型（93．8％），其中O3∶K6最多，达56．2％。副溶血性弧菌全部分离株的月份分布显示出聚集趋势，7～8月为高峰期。O4∶K9和O1∶K36血清型菌株的月份分布与其他优势血清型菌株不同，未表现出明显聚集趋势。食源株无明显优势血清型，且与人源株分布不同。人源株产毒株构成（95．6％）高于食源株（5．5％）。人源株优势血清型产毒株构成（99．9％）高于非优势血清型（71．1％）。血清可分型人源株的 tdh携带率（97．5％）高于不可分型人源株（67．6％），血清可分型人源株的 trh携带率（0．8％）低于不可分型人源株（42．6％）。结果提示，副溶血性弧菌血清型分布与历史数据相比变化较大，血清型与毒力基因携带呈一定程度关联，且人源株与食源株在血清型和毒力基因携带上具有分离现象。因此，在副溶血性弧菌的监测与检测中应充分考虑血清分型和毒力基因的重要性。

人β-防御素在空肠弯曲菌感染中的表达与调控

目的调查2012至2013年上海地区腹泻症候群调查研究及病原谱监测中空肠弯曲菌的感染现状,探讨在空肠弯曲菌引起的肠道感染中人β-防御素(hBD)的抗菌作用及其免疫调节功能。方法收集2012至2013年上海地区腹泻症候群调查研究及病原谱监测中分离到的空肠弯曲菌,分析其感染现状;采用琼脂稀释法检测空肠弯曲菌对庆大霉素(GEN)、四环素(TET)、阿奇霉素(AZI)、红霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、环丙沙星(CIP)、萘啶酸(NAL)的最低抑菌浓度(MIC);采用十二烷基硫酸钠-脉冲场凝胶电泳(SDS-PFGE)分析其分子流行趋势;空肠弯曲菌标准菌株感染人类肠上皮细胞系Caco-2,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肠上皮细胞hBD-1、hBD-2、hBD-3、TLR2和TLR4基因转录情况;采用蛋白免疫印迹法检测hBD-1、hBD-2、hBD-3、TLR2、TLR4蛋白表达情况。结果 2012至2013年上海地区腹泻患者空肠弯曲菌分离率为1.6%。37株空肠弯曲菌对TET和NAL的耐药性极高,分别达95.7%和97.8%。PFGE分为9个型别。hBD-1、hBD-2、hBD-3在Caco-2细胞感染空肠弯曲菌6 h时转录水平最高,而其蛋白表达量则在24 h时最高。TLR2在感染24 h的基因转录水平较0、6、10 h有显著升高,但TLR4则在感染6 h时基因转录水平最高,TLR2、TLR4蛋白表达与基因转录水平相一致。结论 hBD在空肠弯曲菌感染中起着一定的防御作用。

尕海湿地植被退化过程中土壤有机碳矿化特征

为了揭示植被退化对湿地土壤碳矿化过程的影响,以甘南尕海4种不同植被退化梯度的湿地(未退化(UD)、轻度退化(LD)、中度退化(MD)及重度退化(HD))为研究对象,采用室内恒温培养和碱液吸收法研究不同土层土壤有机碳(SOC)矿化速率和累积矿化量,结合一级动力学方程,分析土壤半矿化分解时间(T1/2)、有机碳矿化潜势(C0)等参数对植被退化的响应。结果表明:(1)不同植被退化梯度湿地SOC矿化速率在培养期内呈现出基本一致的变化趋势,表现为,培养初期(0~4天)矿化速率快速下降,且数值较高,培养中后期缓慢下降(4~41天)并趋于平稳;各培养温度下,不同植被退化梯度湿地土壤在各土层有机碳矿化速率大小均为UD>LD>MD>HD。(2)在整个培养期间,各植被退化梯度湿地土壤有机碳矿化速率均随土层加深而降低,表层0-10 cm的矿化速率(1.14~16.23 mg/(g·d))均显著高于10-20 cm(1.05~2.85mg/(g·d))和20-40 cm土层(0.94~1.26 mg/(g·d))。(3)4种植被退化梯度湿地在不同温度下的土壤有机碳累积矿化量均值排序为5°C(34.54 mg/g)<15°C(46.67 mg/g)<25°C(58.28 mg/g)<35°C(86.46 mg/g)。(4)一级动力学方程的C0值随植被退化程度增加呈递减趋势,而C0/SOC随着温度的升高而降低。因此,植被退化能显著降低高寒湿地土壤有机碳矿化速率,而气候变暖能够显著增加湿地土壤有机碳矿化量。

浅谈小学科学实验教学中小组合作学习的运用策略

在衡量人才质量的所有指标当中,合作精神和合作能力是用人单位比较看重的一点[1]。所以,新形势下,教育工作者在教学中要根据社会对人才的发展需求加强对学生合作能力的培养。尤其是小学阶段的教育,教师要趁学生各个方面素养尚未形成之前对学生进行教育,锻炼学生的合作能力,培养学生的合作意识。本文以小学科学实验教学为例,就如何合理地运用小组合作学习方法展开探究。

尕海湿地植被退化过程中土壤碳矿化特征研究

以甘肃省甘南尕海则岔自然保护区内的未退化、轻度退化、中度退化及重度退化的湿地为研究对象,采用野外取样和室内测试相结合的方法,应用室内矿化培养实验,分析了植被退化过程中土壤在不同土层(0～10、10～20、20～40 cm)中的有机碳矿化特征。结果表明,植被退化程度、培养时长、温度高低和土层深度均对土壤有机碳矿化速率有显著影响。不同退化程度土壤有机碳矿化量均随着土层加深而降低,未退化[475.74 CO2/(mgC/g)]>重度退化[329.302 CO2/mgC/g)]>轻度退化[291.50 CO2/(mgC/g)]>中度退化[253.11 CO2/mgC/g)]。不同退化程度土壤有机碳矿化量均随着培养时间的变长而降低,且平均在2～6 d下降速度较快,平均在13 d左右后下降速度平缓,基本保持不变。按照CO2-C释放速率变化程度,将矿化曲线划分为快速矿化(平均约12 d)、缓慢矿化(平均约26 d)和平衡矿化三个阶段,其中快速矿化阶段主要为活性碳矿化。双库一级动力学方程可以较好的拟合植被退化中土壤有机碳矿化过程,不同退化程度土壤有机碳矿化量均随土层加深而降低,浅层和未退化土壤矿化能力较强,对难分解有机碳库的利用程度较高,可以有效促进碳循环,提高土壤固碳能力,在研究全球碳循环时应给予重视。

蚂蝗田水库库盆基础处理及新老柔毡的粘接技术

一、工程概况蚂蝗田水库位于关岭县花江镇西北面2.5km的响锣河源头,距县城27km。1958年始建,1960年建成均质土坝一座,坝高15.7m坝顶高程1170.02m,总库容79.8万m^3,有效库容73万m^3,设计灌溉面积400ha,并于同年开始蓄水灌溉。至1973年,水库一直蓄水正常,到1974年春至1976年相继在左坝肩和右岸库底发生了不同程度的陷塌。

上海地区首次发现和阿奇霉素耐药高度相关的肠产毒性大肠埃希菌O∶6血清群的流行克隆

目的 基于监测网络对肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)成年人腹泻病例开展分子特征研究,探索流行病学对实验室技术和数据需求的实践模式.方法 以ETEC腹泻流行季节的成年人病例为对象进行流行病学设计和抽样,鉴定肠毒素型、血清群、耐药表型、定殖因子及分子型,通过多维度与多变量数据展示获得ETEC多个动态表型特征.结果 2016-2018年监测网络符合条件的ETEC病例84株.优势血清/毒素型依次为O:6(STh)、O:25(LT)、O:159(STh)、O:153 (STh),O:6(STh+CS21)取代O∶ 25和O∶ 159成为2018年的流行克隆,2017年的6例O:153(STh+CFA/I+CS8+PT34)为输入型暴发案例;成年人ETEC耐药率超过30%有磺胺异恶唑、萘啶酸、氨苄青霉素和阿奇霉素,多重耐药菌(MDR)达58.3%,血清/毒素型别提示弱毒株易形成MDR;分子分型证实O∶6血清群优势克隆(PT20~24)的遗传相似度超过O:25和O∶ 159,且与阿奇霉素最低抑菌浓度(MIC)和耐药基因mphA间存在高度相关性(87.5%,28/32),O∶6(STh+CS21 +mphA)耐药克隆始于2016年.结论 上海地区ETEC成年人腹泻病例新的流行克隆为O:6(STh+CS21+mphA),首次观察到阿奇霉素耐药基因mphA和ETEC某个血清群存在关联.基于流行病学构建的多维度和多变量分析技术,有助揭示ETEC潜在传播规律,达到精准监测和预警暴发目的.

副溶血性弧菌检测及分型技术研究进展

副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）最早是由Fujino等人于1953年从日本1例食物中毒者身上初次分离得到的一种革兰阴性嗜盐菌。该菌常呈多态性，有鞭毛，无荚膜和芽孢。pH7．5—8．5及37℃条件下生长最为良好并且对酸敏感。从世界各国食物中毒的流行情况来看，日本是本菌中毒发病最多的国家，由本菌引起的食物中毒在日本占细菌性食物中毒的40％-60％，居首位。1998年以来的资料显示，由副溶血性弧菌而引发食物中毒事件的规模呈明显上升趋势，已超过沙门菌引起的食物中毒，跃居首位。

双重聚合酶链式反应快速筛查副溶血性弧菌流行株方法应用与评价

目的基于种属特异性tlh基因和典型毒力基因(tdh1_368特异性位点)建立双重聚合酶链式反应(duplex PCR,DPCR)检测副溶血性弧菌(VP)体系并评价。方法对建立的DPCR检测体系,用单盲法评估特异性和灵敏度,用人工模拟样品、腹泻标本和水产品进行现场方法学评估。结果该法具有高特异性(100%)和灵敏度(≥1.5 ng/μl),用所建立的方法和培养法平行检测腹泻标本、市售水产品中的VP,阳性率差异无统计学意义,对VP流行株的正确判断率为93.5%(29/31);对腹泻标本24 h内、模拟样品增菌后4~8 h内检测并报告VP大流行株。结论DPCR结合常规样品增菌能加快样品中VP的检测和报告,为及时处理疫情提供技术支持。

2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性研究

目的分析2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性。方法以聚合酶链反应(PCR)方法检测86株O139群霍乱弧菌的霍乱毒素基因(ctx A)、溶血素基因(hly A)、毒素协调菌毛基因(tcp A)、调控蛋白基因(toxR)和编码霍乱毒素基因的CTXφ基因组基因(zot、ace)。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对O139群霍乱弧菌菌株进行分子分型。采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对O139群霍乱弧菌菌株进行11种抗菌药物(头孢曲松、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、丁胺卡那霉素、四环素、氯霉素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素)敏感试验。结果患者来源O139群霍乱弧菌菌株93.2%(41/44)为产毒株,水产来源菌株58.3%(21/36)为产毒株,6株水体来源菌株均为非产毒株。PFGE分析将O139群霍乱弧菌分为35个型别。MLST分析将O139群霍乱弧菌分为9个ST型,其中流行菌型为ST 69型,非产毒株以ST 162型为主。86株O139群霍乱弧菌经药物敏感试验分析显示O139群霍乱弧菌产毒株的耐药情况比非产毒株严重。O139群霍乱弧菌产毒株对强力霉素、复方新诺明、四环素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素的耐药率高。O139群霍乱弧菌非产毒株对萘啶酸耐药严重。结论上海市患者和水产来源O139群霍乱弧菌构成以产毒株为主。PFGE分型提示水产为霍乱疫情的主要传染源。O139群霍乱弧菌产毒株高度克隆化,流行菌型为ST 69型,耐药情况严重。

贝类水产中副溶血性弧菌菌型分布研究

目的了解贝类水产中副溶血性弧菌(VP)的菌型构成及其特点。方法按照GB/T 4789.7标准处理贝类标本,每份VP阳性标本挑取10个克隆,并对其进行血清分型,以PCR法检测tdh、trh、GS-PCR和f237噬菌体的携带情况,并据此对阳性标本中的VP进行菌型区分,分析各菌型在相应标本中的构成。结果 75份贝类水产中18份(24.0%)检出VP,5.6%携带trh阳性VP(O4∶KUT),未检出tdh阳性菌株。18份VP阳性标本共获得180株VP克隆,共可分为42种菌型。检出3株O3∶K6和1株O1∶K33 GS-PCR阳性菌株,均为非流行株。不同标本中菌型数不完全相同,最多可检出9种,平均每份VP阳性标本含6.1种菌型。检出47个(26.1%)克隆株携带f237的orf8完全缺失变种。结论 f237 orf8完全缺失变种噬菌体在贝类中具有广泛的分布。贝类中VP种群构成复杂,常携带多个菌型。临床常见菌型在贝类中不具优势,食品中VP的检测应充分考虑血清分型、基因分型的作用。

上海地区副溶血性弧菌大流行菌株血清型及分子特征研究

目的了解上海地区大流行副溶血性弧菌(VP)大流行菌株血清型分布及分子特征。方法对2010—2012年分离自腹泻患者和食品中的VP菌株进行血清分型,以GS-PCR辨别大流行株,以PCR检测菌株的毒力基因tdh、trh和大流行株分子标识f237噬菌体orf8基因,以PFGE分型来分析菌株间的遗传关系。结果 1 136株VP可分为52个血清型(群),其中64.5%的菌株GS-PCR阳性,判定为大流行菌株,其血清型有11种,主要集中于O3∶K6(76.8%)、O4∶K68(9.4%)、O1∶K25(6.8%)、O1∶K36(4.5%)4种血清型。相对于非流行菌株,O10∶K60、O3∶K3、O1∶K33三种血清型的菌株其PFGE图谱与已报道的大流行株更为接近,为新检测到的大流行血清型变种。大流行产毒株中仅能检测到tdh基因,未检测到trh基因,94.3%的大流行菌株携带噬菌体f237的orf8基因,但有5.7%的大流行株orf8基因缺失。相同血清型的大流行菌株其PFGE图谱存在差异,且orf8基因的携带与否不能以PFGE进行区分。结论上海地区VP大流行菌株血清型相对集中,且不断有新的血清型变种出现。从PFGE图谱的差异和orf8基因的携带与否上来看,大流行菌株仍在演变。

用于脉冲场凝胶电泳指纹图谱分析的分区条带计数法的建立

[目的]建立操作简便、软件依赖性低、结果易于交流的脉冲场凝胶电泳(PFGE)指纹图谱分析新方法。[方法]按PulseNet标准操作规程,对44株副溶血性弧菌进行PFGE分型试验,分别利用分区条带计数法和BioNumerics软件对图谱进行分析,并以型别数、成簇数和Simpson’s多样性指数(DI)对2种分析方法进行比较。[结果]分区条带计数法可将44株菌分为32个型(DI=97.6%),能发现5簇。BioNumerics聚类分析可分为29个BN型(DI=95.5%),能发现4簇。在发现菌株成簇的能力上,2种分析方法的差异无统计学意义。[结论]条带计数法能大大减少肉眼观察的图谱数量,具有操作简便、成本低、对软件依赖性小、结果显示简单直接的特点,能直观反映菌株条带的分布特征,因此应能满足分型信息共享与交流的要求。