应用Minigene剪接变异体分析技术诊断PMM2基因非经典剪接位点新变异的致病性

目的:研究Minigene剪接变异体分析技术在诊断磷酸甘露糖变位酶2(PMM2)相关先天性糖基化障碍(PMM2-CDG)中的价值,探讨磷酸甘露糖变位酶2(PMM2)基因剪接位点新变异对其转录产物的影响。方法:通过对1例PMM2-CDG患儿进行高通量测序查找可能的遗传学病因,利用Minigene剪接变异体分析技术,研究PMM2基因新剪接位点变异的致病性。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南,判断新变异的致病性。结果:遗传学分析发现患儿系PMM2基因母源性c.691G>A(p.Val231Met)变异和父源性c.447+5G>A变异复合杂合子。Minigene剪接变异体分析发现:变异c.447+5G>A导致PMM2基因转录产物形成r.348_447del转录本,为致病性PMM2基因变异。患儿的临床特征为皮肤巩膜黄染,血清总胆红素、非结合胆红素和总胆汁酸明显升高,白蛋白明显降低,甲胎蛋白、铁蛋白和促甲状腺素等升高,对症支持治疗效果欠佳。结论:Minigene剪接变异体分析可为PMM2-CDG确诊和家系遗传咨询提供新的分子标记物,扩展了PMM2基因变异谱,为该病的临床诊治提供新的参考依据。

OTC基因新变异致鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷病1例报告

目的报告1例鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷病(ornithine transcarbamylase deficiency,OTCD)患儿的临床及分子遗传学特点,为本病诊疗提供参考。方法回顾性分析一例OTCD患儿临床和实验室资料。结果患儿女性,1岁6月,因“反复呕吐伴烦躁不安4月余”就诊。查体发现双下肢张力减退,双侧膝关节反射亢进,双侧踝阵挛阳性。血生化谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血氨升高,尿液有机酸分析显示尿嘧啶、乳清酸和4-羟基苯乳酸水平升高。遗传学分析在患儿OTC基因检出c.612614del(p.Ile204del)新生变异,结合ACMG标准判断该变异具有致病性。经限制蛋白质摄入、精氨酸、瓜氨酸和苯甲酸钠等治疗后患儿病情控制仍不理想,于2岁时进行肝移植治疗,移植后患儿肝功能和血氨恢复正常。结论本文通过临床和遗传学研究,发现1个OTC新变异c.612614del,确诊了一例OTCD患儿,为本病确诊和遗传咨询提供了遗传学标记物,同时为临床和实验室特征的科学认识积累了资料。

一种新的SLC25A13基因大片段缺失变异的识别:1例希特林缺陷病患者临床和遗传学分析

目的:探讨1例希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的临床和分子遗传学特征。方法:整理分析患儿临床资料,提取患儿及其父母外周血DNA标本,采用高通量测序检测致病突变,通过Sanger测序验证阳性发现,并根据ACMG指南和标准,分析新变异的致病性。结果:患儿为1.5月龄女婴,因发现皮肤黄染1月余入院。体检发现皮肤巩膜黄染,肝右肋下1 cm,质软。生化检查示血清总胆汁酸、直接胆红素、γ-谷氨酰转肽酶、甲胎蛋白等水平升高,伴低蛋白血症、凝血功能障碍和贫血。诊断为胆汁淤积症。遗传学分析发现患儿为SLC25A13基因c.852_855del与c.1314-4144_c.1452+3373del7658bp的复合杂合子;前者为母源性致病性变异,后者导致整个外显子14缺失,为父源性新变异,根据ACMG标准判定为致病性变异,病因诊断NICCD。经更换无乳糖并强化中链甘油胆汁的配方奶粉喂养,患儿病情迅速好转。结论:通过分析1例NICCD患儿的临床和分子遗传学特征,识别一个长达7658bp的SLC25A13基因缺失变异,扩展了SLC25A13突变谱,为NICCD确诊和遗传咨询提供了新的分子标记物。

疑难病研究—citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症

c itrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)是一种以黄疸、肝功能异常为主要临床表现的遗传代谢病。作为一种线粒体溶质载体蛋白,c itrin在糖有氧分解、糖异生、尿素循环以及蛋白质和核苷酸的合成过程中起重要作用,因此其缺陷可导致复杂多样的代谢紊乱,包括低血糖、高乳酸、高氨血症、低蛋白血症、高脂血症和半乳糖血症等。该文报道1例经SLC25A13(编码c itrin的基因)突变分析证实的NICCD病例。患儿为6个月男婴,因发现皮肤和巩膜黄染近半年入院,体查发现明显的皮肤和巩膜黄染,肝脏肋下5 cm,肝功能检查发现除GGT,ALP,AST,ALT等酶学指标升高外,TBA和Tb il(Db il为主)升高,而总蛋白/白蛋白和纤维蛋白原水平降低。血氨、血乳酸和血胆固醇、甘油三酯等指标也升高。AFP水平更是高达罕见的319 225.70μg/L。血串联质谱分析发现游离脂肪酸和酪氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸和苏氨酸等氨基酸增高,尿UP-GC-MS分析检出大量的半乳糖和半乳糖醇。患儿于是被疑诊NICCD。停母乳喂养,予无乳糖和强化中链脂肪酸配方奶喂养,同时补充多种维生素(包括脂溶性的维生素A,D,E和K),并口服精氨酸降血氨治疗。经以上处理半月,患儿黄疸迅速消退,实验室指标改善或恢复正常。目前患儿已经门诊随访6月,体格生长发育正常,除有时有轻微的高乳酸血症外,实验室各项指标已经得以纠正。SLC25A13基因突变分析显示患儿系突变851del4和1638 ins23的复合杂合子。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法在多种羧化酶缺陷病诊断治疗中的应用

目的 多种羧化酶缺陷病临床表现特异性不强 ,然而却是一种可用生物素治疗的遗传性代谢病。该文旨在探讨尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析尿液成分在多种羧化酶缺陷病诊断和治疗中的应用价值。方法 尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析 3例多种羧化酶缺陷病患儿生物素治疗前后的尿液成分 ,并整理分析其临床表现、诊治经过及预后等。结果 3例患儿临床表现特异性不强 ,但其尿液中均含有大量的 3 羟基异戊酸、3 甲基巴豆酰甘氨酸、3 羟基丙酸和甲基枸橼酸 ,其中 2例乳酸含量也高于正常对照。依据以上结果诊断多种羧化酶缺陷病 ,以生物素治疗后临床表现明显改善 ,尿液复查上述异常产物恢复到正常水平。结论 尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析尿液成分是多种羧化酶确诊的重要方法 ,对于判断生物素疗效 ,调整用药剂量也有一定参考价值。

黄芩甙拮抗大鼠神经元和星形胶质细胞氧应激损伤

目的探索过氧化氢 (H2 O2 )致星形胶质细胞损伤的实验条件 ,研究黄芩甙对大鼠神经元和星形胶质细胞氧应激损伤的保护作用。方法体外培养大鼠前脑星形胶质细胞和神经元 ,分别应用H2 O2 、黄芩甙及两者联用处理 ,应用MTT分析法测定细胞活力或存活率。结果不同浓度H2 O2 对星形胶质细胞存活率的影响各组间差异有显著性 (F =2 8 5 6 9,P <0 0 1)。同一浓度的H2 O2 对不同接种密度细胞的损伤程度不同 (F =5 4 39,P <0 0 1)。在 2 5～ 4 0 μmol/L浓度范围内 ,黄芩甙不影响各组神经元和星形胶质细胞的存活率 (神经元 ,F =0 4 9,P >0 0 5 ;星形胶质细胞 ,F =1 0 0 1,P >0 0 5 )。但黄芩甙对H2 O2 所致神经元和星形胶质细胞氧应激损伤有拮抗作用 (神经元 ,F =2 4 384 ,P <0 0 1;星形胶质细胞 ,F =5 0 0 0 ,P <0 0 1) ,黄芩甙浓度越高 ,则细胞存活率越高。结论构建了一个H2 O2 氧化损伤星形胶质细胞的模型。在 2 5～4 0 μmol/L浓度范围内 ,黄芩甙对神经元和星形胶质细胞均无毒性作用。但黄芩甙能够拮抗H2 O2 所致的神经元和星形胶质细胞氧化损伤 ,而且这种作用呈剂量依赖性。

DDC基因新变异导致芳香族L-氨基酸脱羧酶缺乏症1例报告及文献复习

患儿,男性,年龄1岁9个月,因“运动智力发育落后1年余”就诊。家属诉患儿自2月龄开始频繁眼球上翻,多汗,至今不能抬头、独坐、站立和独行。2月龄时行儿童健康发育评估,发现中度生长发育迟缓,体型匀称偏瘦。4月龄时行神经心理发育评估,提示神经心理发育落后、四肢肌力低,遂予按摩、电疗康复及鼠神经生长因子肌内注射治疗,但病情无改善。生后行血串联质谱及4月龄时完善尿气相色谱-质谱法检测均未见异常,1岁1月龄时行Gesell测定,发现语言、精细动作、大动作、适应性和社交全面重度/极重度发育迟缓。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法选择性筛查遗传代谢病高危患儿327例初步研究

目的 通过对遗传代谢病高危患儿尿液成分进行生化分析 ,筛查遗传代谢病 ,为临床诊断和治疗提供实验依据。方法 收集遗传代谢病高危患儿尿液标本 ,经去尿素、加内标、除蛋白、真空干燥、三甲基硅烷基衍生等处理后 ,应用气相色谱 -质谱联用仪分析尿液中有机酸、氨基酸、糖类、多醇、嘌呤、嘧啶等成分。这一流程在国际上被称为尿素酶预处理 气相色谱 质谱法。结果 对来自中国大陆 6省、区和直辖市的 3 2 7例遗传代谢病高危患儿的尿液标本进行检测 ,共筛查出遗传代谢病 16种 2 7例 ,阳性率为 8.2 6% ,其中高苯丙氨酸血症、甘油尿症和Leigh综合征各 3例 ,丙酸血症、甲基丙二酸尿症、vonGierke病、果糖 1,6 二磷酸酶缺陷病、果糖尿症各 2例 ,多种羧化酶缺陷病、戊二酸血症Ⅰ型、枫糖尿病、高甘氨酸血症、3 氨基异丁酸尿症、半乳糖血症、瓜氨酸血症Ⅱ型及Fanconi综合征各 1例。经临床干预虽然仍有部分患儿预后不良 ,但多种羧化酶缺陷病、甲基丙二酸尿症、半乳糖血症等患儿获得较好的治疗效果。其余患儿的病情有待追踪观察。结论 应用尿素酶预处理 气相色谱 质谱法分析尿液成分 ,是筛查某些遗传代谢病的有效方法 ,检测结果可为患儿的诊断和治疗提供有效指导。

DNA修饰碱基5-甲基胞嘧啶和8-羟基鸟嘌呤的毛细管气相色谱分析及质谱鉴定

探索了GC/FID定量分析DNA修饰碱基 5 甲基胞嘧啶和 8 羟基鸟嘌呤的实验条件 ,用GC/MS鉴定各有关成分。结果表明 ,DNA水解物中不同成分可被成功地衍生和分离 ;5 甲基胞嘧啶和 8 羟基鸟嘌呤的相对摩尔反应因子分别为 3 0和 1 3;灵敏度分别为 5 50× 1 0 9mV·s/ g和 7 59× 1 0 1 0 mV·s/ g ;检测限可分别达 36 4pg/s和 1 5 8pg/s ;整个分析流程的相对标准偏差小于 2 0 %。

Citrin缺陷病

Citrin缺陷病是SLC25A13基因突变导致位于线粒体内膜的载体蛋白citrin功能不足而形成的一种遗传代谢病。本病目前已报道的临床表型有2种,分别是成人发病瓜氨酸血症2型和citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症。前者多在较大儿童或成人发病,高氨血症导致的神经精神症状明显,预后往往不良;而后者在婴儿期发病,表现为肝大、黄疸和肝脏功能异常,大部分患儿预后良好。

鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症尿液标志物的气相色谱-质谱法分析

目的探讨鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症的4个尿液标志物,即乳酸、尿嘧啶、乳清酸和马尿酸的气相色谱-质谱法定性、定量分析方法。方法尿素酶分解尿标本中尿素,加入内标十七酸,蛋白质用乙醇变性并离心去除。上清液真空干燥后残余物以BSTFA/TMCS三甲基硅烷化,而后行气相色谱-质谱法分析。结果以上标志物在总离子流图上分离良好,并经质谱图定性。鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症患儿治疗前尿液中乳酸、尿嘧啶和乳清酸水平明显增高,经苯甲酸钠等治疗后降至正常或者基本正常,同时伴随马尿酸大量经尿排泄。结论在鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺陷症患者的临床诊断和疗效评价方面,尿液标志物的GC-MS分析是一种有价值的工具。

Genistein抑制鸟嘌呤氧化损伤的CGC/MS研究

为了探讨genistein抗肿瘤与抗氧化之间的关系，用Fenton反应（H2O2＋Fe2+→·OH＋OH－＋Fe3+）造成鸟嘌呤的氧化损伤，用毛细管柱气相色谱／质谱分析法（CGC／MS）研究了genistein对这一过程的影响。结果表明genstein具有抑制8-经基鸟嘌呤生成的作用，60μmol·L－1genistein可使8-经基鸟嘌呤的生成量降低50％，提示genistein的抗肿瘤效果可能与其保护遗传物质的氧化损伤有关，这种作用可能是genistein通过清除H2O2造成的。

Leigh综合征肌肉超微结构观察

目的:研究Leigh综合征肌肉的超微结构。方法:取1例Leigh综合征患儿腓肠肌组织,经常规样品制备后进行电镜观察。结果:部分肌纤维出现下列超微结构改变:(1)局灶性肌原纤维、线粒体和肌浆网消失。(2)肌膜下柱状同心圆板层体聚集。(3)细胞核两端线粒体聚集,线粒体内晶格状包涵体常见。结论:本病例出现的形态学改变提示Leigh综合征不仅是一种中枢神经系统疾病,而且是一种线粒体肌病。

多种羧化酶缺陷病患者尿液标志物的GC-MS分析

本文旨在探讨乳酸、3 羟基异戊酸、甲基枸橼酸和 3 甲基巴豆酰甘氨酸等多种羧化酶缺陷病 (multiplecarboxy lasedeficiency,MCD) 4个尿液标志物的气相色谱 质谱法定性和定量分析特征。结果显示 ,乳酸和 3 羟基异戊酸在总离子流图上有明显的信号 ,其绝对保留时间分别是 5 0 2和 6 1 9min ,相对保留时间分别为 0 4 0 3和 0 4 97,而其特征离子 (m z,TMS)分别为M 1 5 (2 1 9,2 )和M 1 5 (2 4 7,2 )。甲基枸橼酸 (双峰 )和 3 甲基巴豆酰甘氨酸的绝对保留时间分别是 1 0 83、1 0 87和 8 94min ,相对保留时间分别为 0 86 9、0 872和 0 71 7min ,特征离子 (m z ,TMS)分别为M 1 5 (4 79,4 )和M (2 2 9,1 ) ,以上两种物质的定性定量分析可借助提取离子色谱图进行。本文结果对于MCD的疗效监测 ,及其症前。

黄芩甙对H_2O_2诱导星形胶质细胞NF-κB/IκBα表达的影响

目的 研究黄芩甙和H2 O2 对星形胶质细胞中NF κB/IκBα表达的影响。方法 体外培养星形胶质细胞 ,分别应用H2 O2 、黄芩甙及两者联用处理 ,应用细胞免疫化学法检测NF κB分子P6 5亚基核移位情况 ,WesternBlot检测细胞中IκBα表达变化。结果 在星形胶质细胞中 ,H2 O2 可使P6 5由胞浆向胞核移位 ,并降低IκBα的表达水平 ;黄芩甙自身不会导致P6 5核移位及影响IκBα表达水平 ,但可减少H2 O2 所致P6 5亚基胞核移位及细胞内IκBα降低的程度。结论 黄芩甙能减轻H2 O2 所致星形胶质细胞IκBα异常降低及NF κB异常活化。

先天性肌营养不良症患儿肌肉组织超微结构观察

目的研究先天性肌营养不良症(congenital muscular dystrophy,CMD)患儿肌肉的超微结构。方法取1例CMD患儿腓肠肌组织,经常规电镜样品制备后进行观察。结果CMD肌纤维出现下列超微结构改变:①肌纤维萎缩;②肌纤维Z线断裂,肌丝排列紊乱,肌膜下出现肌质块;③有些肌纤维坏死;④线粒体基质有晶格状包涵物。结论本病例出现的各种形态学改变,提示CMD的病情发展是一种渐进的过程。同时,它也可影响线粒体合成ATP功能。

8-羟基鸟嘌呤及其检测

８羟基鸟嘌呤及其检测①宋元宗１综述祝其锋１莫丽儿２审校１广东医学院医用生化研究所湛江５２４０２３２广东医学院化学教研室自由基是指任何带有不配对电子的分子或原子，从生物学角度讲，主要指某些活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ），Ｏ÷２，...

DNA氧化损伤模型的构建

目的 :探索Fenton反应 (Fe2 ++H2 O2 →Fe3++·OH +OH-)氧化损伤DNA的实验条件。方法∶气相色谱/质谱分析法探索Fenton反应对DNA中 8-羟基鸟嘌呤含量的影响 ,观察经不同浓度的H2 O2 和Fe2 +及不同时间处理后DNA样品中 8-羟基鸟嘌呤含量的改变。结果∶Fenton反应显著升高DNA中 8-羟基鸟嘌呤含量。 8-羟基鸟嘌呤含量随H2 O2 浓度的改变而呈三相变化∶H2 O2 浓度在 0 .0 8～ 5mmol/L范围时 ,8-羟基鸟嘌呤含量随H2 O2 浓度的升高而升高 ;H2 O2 浓度在 5～ 2 0mmol/L范围时 ,其含量随H2 O2 浓度的升高而减少 ;H2 O2 浓度在 2 0～ 80mmol/L范围时 ,8-羟基鸟嘌呤含量维持在一个较对照组高的水平 ,而不随H2 O2 浓度的改变而发生明显的改变。增加Fe2 +浓度或延长反应时间均可提高DNA中 8-羟基鸟嘌呤的含量。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法诊断琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱 质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋白、真空干燥处理 ,残余物进行三甲基硅烷化衍生后进样行GC MS法分析。尿液中可检测到明显的 4 羟基丁酸、2 ,4 二羟基丁酸、3,4 二羟基丁酸和 4 ,5 二羟基己酸信号。在TIC图上 ,其绝对保留时间 (相对保留时间 )分别是 6 32min(0 4 34) ,7 80min(0 5 36 ) ,7 94min(0 5 4 6 ) ,8 80min ,8 90min(0 6 0 5 ,0 6 12 )。在质谱图上 ,其特征离子 (m z,TMS)分别是M 15 (2 33,2 ) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (349,3)。GC MS法分离鉴定尿液代谢成分 ,可作为诊断该病的一种可靠手段。

钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病的发病机制、临床表现及诊疗进展

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是SLC10A1双等位基因突变导致的一种新的遗传性胆汁酸代谢病,在我国可能并不罕见。NTCP缺陷病以儿童期显著而持续性的高胆汁酸血症为主要临床特征,并可能参与新生儿高胆红素血症、婴儿早期胆汁淤积症和妊娠胆汁淤积症的形成。NTCP缺陷病目前缺乏特异性治疗手段,但通常预后良好。SLC10A1基因分析有助于该病患者及时确诊,同时避免不必要的检查和干预。