人胎盘间充质干细胞对小鼠肺纤维化的影响及机制

目的观察人胎盘间充质干细胞对小鼠肺纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法采用组织块贴壁法分离并体外培养人胎盘间充质干细胞。将30只C57BL/6小鼠随机均分为观察组、对照组,均给予气管内注入博来霉素8.5 mg/kg建立肺纤维化模型。造模成功后,观察组尾静脉输注体外培养的人胎盘间充质干细胞0.3 m L(细胞数为1.0×106个),对照组注射等量生理盐水,1次/d,连续注射3天;处死小鼠,取肺组织,检测肺组织羟脯氨酸含量,采用Western blotting法检测肺组织血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素1(ET-1)和血管生成素2(Ang-2)蛋白。结果观察组肺组织羟脯氨酸含量为(5.76±0.13)μg/m L,对照组为(8.13±0.87)μg/m L,两组比较P<0.01。观察组肺组织VEGF的相对表达量为52.7±4.7、ET-1为68.1±5.4、Ang-2为59.6±2.8,均较对照组(100)降低(P均<0.05)。结论人胎盘间充质干细胞可抑制小鼠肺组织纤维化形成;降低肺组织VEGF、ET-1和Ang-2表达可能是其作用机制。

重组人血管生成素-1与肺间质纤维化血管正常化时相的关系

目的探讨重组人血管生成素1（Human Angiopoietin-1,rHuANG-1）对小鼠模型肺间质纤维化微血管正常化的最佳时相及其分子机制。方法将40只C57/BL6小鼠按掷硬币法随机分成对照组和实验组,每组各20只。对照组腹腔注射生理盐水（NS）（0.2ml/d）;实验组腹腔注射rHuANG-1（5mg·kg^-1·d^-1）。每组分别于治疗后的第2、4、6、9天处死5只小鼠留取标本。测量小鼠肺组织羟脯氨酸含量变化。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中G蛋白调节信号5（regulator of G-protein signaling 5,RGS5）蛋白浓度,苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理变化,免疫组织化学形态学分析血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的变化。结果1成功建立C57/BL6小鼠肺间质纤维化模型。2实验组接受rHuANG-1注射后,第6天,第9天肺羟脯氨酸含量降低（P〈0.01）。3 ELISA结果显示,实验组肺组织中RGS5的表达在治疗第4天和第6天与对照组比较明显增高（P〈0.05）。4HE染色结果显示,实验组和对照组不同时间点均可见不同程度的肺纤维化。对照组坏死程度高于实验组。其中,实验组第4天和第6天组织修复最明显,而对照组不同时点肺间质纤维化比较明显。5免疫组织化学结果表明,与对照组相比,实验组第4、6天VEGF在肺间质纤维化中的表达率升高明显减少（P〈0.05）。结论rHuANG-1作用于小鼠肺间质纤维化后第4~6天可作为血管正常化时间窗,可能与VEGF相关。

NK细胞对A549细胞的β-catenin信号通路影响

目的:研究NK细胞对肺腺癌细胞系A549的杀伤作用.方法:无菌采集健康人外周血,培养NK细胞,对A549细胞进行杀伤活性的实验,检测NK对A549的杀伤活性,同时用Western blot检测A549细胞中β-catenin的表达.结果:NK对A549的杀伤率为82.64%,β-catenin的条带变浅,蛋白表达量逐渐降低.结论:NK对A549具有杀伤力,同时能够阻断A549细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,可成为免疫治疗肺癌的一种新方法.

IL-21对NK细胞表型和功能的影响

目的为了研究表达白细胞介素-21(IL-21)对自然杀伤细胞(NK)细胞的扩增的数量、表型和功能的影响。方法以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,实验组加入IL-21,在体外培养条件下使NK细胞大量的扩增。采用流式细胞仪检测NK细胞表型。NK细胞作用到K562细胞,对NK细胞的杀伤性进行功能分析,^(51)Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果 IL-21加入到PBMC后,培养体系经过23 d的刺激后,IL-21诱导PBMC扩增,CD56+CD16+CD3-细胞数量比对照组增加了2.6倍,对照组CD56+CD16+CD3-细胞的纯度为26.5%±1.7%,实验组扩增后是73.9%±2.1%。细胞毒实验表明,在NK效应细胞:K562靶细胞为10∶1和20∶1时,实验组明显高于对照组。结论本方法以单纯的添加细胞因子IL-21的方法,能够实现NK细胞体外扩增,建立了更优化的NK细胞体外扩增方法,且扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤活性较好。本实验对于NK的大量扩增和临床应用具有一点的指导价值。

雷氏大疣蛛毒素对间充质干细胞增殖的影响

探究雷氏大疣蛛毒素对间充质干细胞增殖的影响。用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理间充质干细胞,通过细胞增殖实验(MTS)法测定毒素对间充质干细胞增殖的影响,倒置显微镜观察间充质干细胞的形态学变化,台盼蓝拒染观察间充质干细胞的数量变化。MTS法、倒置显微镜和台盼蓝拒染均得到低浓度的蜘蛛毒素作用于间充质干细胞后细胞数量增加;中浓度的毒素作用于间充质干细胞后,细胞数量与对照组差不多;高浓度的蜘蛛毒素作用于细胞后,细胞数量明显减少。雷氏大疣蛛毒素低浓度促进细胞生长,高浓度抑制细胞生长。

雷氏大疣蛛毒素对神经胶质瘤U87的抑制作用

直观的观察雷氏大疣蛛毒素促进神经胶质瘤U87凋亡的形态学变化。首先用蛋白印迹法检测合适的雷氏大疣蛛毒素浓度处理U87细胞,再用该浓度毒素处理U87细胞不同时间;用100pg/m L的雷氏大疣蛛毒素作用48 h诱导神经胶质瘤U87细胞凋亡,然后用倒置相差显微镜,Gimsa染色法,吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法以及流式细胞法,从最直观的形态学上观察雷氏大疣蛛毒素促进神经胶质瘤U87凋亡的形态学变化。实验组的细胞出现很明显的凋亡小体,细胞膜不会破裂,细胞质不会流出,细胞核含有固缩核片段等细胞凋亡的形态学上的特征。雷氏大疣蛛毒素作用神经胶质瘤U87细胞后的形态学的变化,基本包括了细胞凋亡的主要的形态学特征。说明雷氏大疣蛛毒素是通过促进神经胶质瘤U87细胞凋亡从而抑制细胞的增殖。