UPLC-LTQ-Orbitrap-MS法快速分析鬼箭羽中的化学成分

利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术结合文献报道的鬼箭羽已知化学成分及其裂解规律快速鉴定鬼箭羽药材中的化学成分。利用文献中鬼箭羽化学成分的分子式、相对分子质量、碎片离子等信息建立鬼箭羽快速识别数据库,依据化合物的精确分子质量、色谱保留时间、特征碎片离子等信息对已知成分进行验证;对于鬼箭羽中未知成分,通过总结同类化合物的质谱裂解规律,并查阅相关文献确定其相对分子质量、特征碎片离子、色谱保留时间等信息,并进行结构表征。实验共鉴定得到65种成分,包括36种黄酮类、4种酚酸类、7种三萜类、12种脂肪族和6种其他类成分,其中,有28种化合物是首次在鬼箭羽中发现。该方法可以快速、全面地分析鬼箭羽药材中的化学成分,可为鬼箭羽药材的质量控制研究奠定基础。

活血解毒方治疗糖尿病视网膜病和周围神经病变的谱效关系研究

目的观察活血解毒方治疗糖尿病视网膜病及周围神经病变的谱效关系,探究活血解毒方的药效物质基础。方法建立活血解毒方的HPLC指纹图谱,制备糖尿病大鼠模型,测定给药后大鼠的血糖、运动神经传导速度与视网膜中央动脉血流速度,采用相关分析与回归分析评价活血解毒方的主要药效成分。结果活血解毒方显著增加视网膜中央动脉血流速度,加快运动神经传导速度。活血解毒方主要贡献成分来自三七和黄连,其中三七总皂苷和小檗碱与糖尿病视网膜病和周围神经病变重要相关。结论活血解毒方可显著改善糖尿病大鼠视网膜病和周围神经病变,且三七和黄连起主要作用。

不同化学工艺制备的复方血栓通提取物的药效比较

目的采取不同的化学工艺制备3种复方血栓通提取物,观察高糖环境培养的视网膜血管内皮细胞功能的变化,比较不同提取物的药效。方法根据《中华人民共和国药典》制备复方血栓通,溶于水后依次通过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。将视网膜血管内皮细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、模型组(25 mmol/L葡萄糖)以及给药组(25 mmol/L葡萄糖+不同剂量复方血栓通提取物)。给药后,通过CCK-8实验检测细胞活力;通过Transwell实验检测细胞迁移能力;通过Matrigel实验检测细胞体外成管能力。结果复方血栓通正丁醇提取物能有效抑制细胞迁移和体外内皮管道形成;乙酸乙酯提取物能够小幅度降低细胞迁移数目,但不抑制细胞内皮管道形成;石油醚提取物药效最差,对细胞功能无影响。结论复方血栓通正丁醇提取物药效最佳,为改善复方血栓通的制备工艺提供了实验依据。

过表达降钙素基因相关肽(CGRP)改善糖尿病小鼠周围神经病变

目的观察降钙素基因相关肽(CGRP)对糖尿病小鼠周围神经病变的影响,探讨过表达CGRP能否改善糖尿病小鼠周围神经病变。方法建立糖尿病小鼠模型,根据小鼠体质量和血糖水平随机分为模型组、 CGRP过表达(Ad-CGRP)组、空载体腺病毒(Ad)阴性对照组,另设正常对照组。Ad-CGRP组以及Ad阴性对照组小鼠左侧后肢肌肉注射Ad-CGRP或者阴性对照Ad,正常组及模型组小鼠注射同等体积的生理盐水。给药4周后,实时定量PCR检测CGRP mRNA水平, Western blot法检测CGRP蛋白水平;智能热板仪检测疼痛潜伏期,生理信号采集处理系统检测神经传导速度,激光多普勒血流仪检测神经血流情况。结果与正常组比较,模型组小鼠的CGRP mRNA和蛋白水平均降低、血糖明显升高,疼痛潜伏期延长,运动神经传导速度降低,神经血流量减少。与模型组比较, Ad-CGRP组小鼠的CGRP mRNA和蛋白水平均显著增加,疼痛潜伏期缩短,神经传导速度增快,神经血流量增加; Ad阴性对照组均无明显改变。结论过表达CGRP促进神经血管扩张,增加血流,改善糖尿病周围神经病变。

基于网络药理学的复方血栓通治疗糖尿病视网膜病的药理机制研究

利用网络药理学发现复方血栓通治疗糖尿病视网膜病的药理机制。采用TCMSP软件检索复方血栓通的活性成分,并且得到其活性成分对应的靶点;然后通过OMIM、TTD、pharm Gkb、Di GSe E和GAD5个数据库检索糖尿病视网膜病相关靶点;两者取交集得到37个相同的靶点。用Systems Dock在线分子对接工具验证结果。使用DAVID软件对37个靶点进行GO注释分析和KEGG通路分析。采用Cytoscape 3.6.1软件建立活性成分-靶点-通路网络模型。网络药理学研究提示,复方血栓通可能通过血管内皮生长因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路和Toll样受体信号通路等多个通路治疗糖尿病视网膜病,体现了中药复方多成分、多靶点、多通路的特点。此研究为进一步阐释复方血栓通治疗糖尿病视网膜病的药理机制提供了理论依据。

骆驼蓬水提物对高糖作用下视网膜血管内皮细胞的调控作用及其机制

目的探讨骆驼蓬水提物对高糖作用的视网膜血管内皮细胞的调控作用及其对Hippo信号通路的影响。方法将视网膜血管内皮细胞分为5组:正常组(葡萄糖浓度为5. 5 mmol/L)、模型组和骆驼蓬高、中、低剂量组(葡萄糖浓度为25 mmol/L),骆驼蓬高、中、低剂量组再分别加入250、200、150 mg/L骆驼蓬水溶液。通过CCK-8法测定各组细胞的细胞活力,通过Transwell法检测细胞迁移数目,Western Blot法检测各组细胞TEA结构域转录因于1(TEAD1)与大肿瘤抑制基因1(Lats1)蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组细胞活力增加,迁移数目增多;与模型组相比,骆驼蓬不同剂量均可降低细胞活力、抑制细胞迁移(P <0. 05),差异有统计学意义。与正常组相比,模型组中TEAD1的蛋白表达水平升高,Lats1的蛋白表达水平降低;与模型组比较,骆驼蓬不同剂量组TEAD1蛋白表达水平降低,Lats1的蛋白表达水平升高(P <0. 05),差异有统计学意义。结论骆驼蓬可能通过调节Hippo信号通路阻碍高糖作用下的视网膜血管内皮细胞的细胞活力与迁移能力,从而调节视网膜血管内皮细胞的功能。