UGT2B7基因SNP rs7439366影响霉酚酸酯代谢的体外研究

目的体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT2B7)基因单核苷酸多态性(SNP)rs7439366对霉酚酸酯(MMF)代谢的影响。方法采用基因重组、定点突变技术构建UGT2B7基因rs7439366位点不同等位基因的过表达载体,Lipo2000转染法将重组载体转入HEK293细胞,采用LC/MS/MS系统检测霉酚酸(MPA)代谢产物7-O-葡醛酸苷(MPAG)24h的生成量来评估转染不同等位基因细胞的酶活性。结果成功构建p IRES2-EGFP-prom(T)和p IRES2-EGFP-prom(C)重组过表达载体并转染至HEK293细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示携带C等位基因的突变型UGT2B7转化MPA的酶活性降低,24h产物MPAG的生成量为野生型的63.3%(P<0.001)。结论 UGT2B7基因SNP rs7439366可影响对MMF的代谢能力,是导致患者间MMF代谢差异的因素之一。

UGT1A10基因SNP rs10187694对吗替麦考酚酯代谢的影响

目的体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT1A10)基因SNP rs10187694多态位点G/A变异对吗替麦考酚酯(MMF)代谢的影响,明确该位点变异是否与MMF个体代谢差异有关。方法采用基因重组、定点突变技术,构建UGT1A10基因SNP rs10187694位点含有不同等位基因的重组过表达载体,POLO 3000转染法将重组过表达载体转染入HEK293细胞,采用液相色谱-质谱联用仪(LC/MS/MS)系统,检测霉酚酸(MPA)代谢产物7-O-葡醛酸苷(MPAG)的生成量,以评估转染不同等位基因HEK293细胞中酶的活性。结果成功构建pIRES2-EGFP-prom(G)和pIRES2-EGFP-prom(A)重组过表达载体,并转染HEK293细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示,携带A等位基因的突变型UGT1A10代谢MMF产生MPAG的能力降低,其24 h MPAG的生成量为(226.00±14.57)nmol/L,而野生型的生成量为(269.00±14.07)nmol/L,UGT1A10突变型MPAG的生成量是野生型的84.00%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UGT1A10基因SNP rs10187694位点G/A突变可影响MMF代谢产物MPAG的生成,可能是造成不同个体MMF代谢差异的重要原因之一。

肿瘤-睾丸抗原联蛋白α2在肝细胞癌中的表达及临床意义的多组学研究

目的:借助多组学策略观察肿瘤-睾丸抗原联蛋白α2(catenin alpha 2,CTNNA2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨其在HCC免疫治疗中的潜在价值及临床意义。方法:分析CTNNA2在159例乙型肝炎病毒(HBV)相关HCC和配对癌旁组织中,mRNA和蛋白的表达水平及差异,并进一步采用免疫蛋白质组学检测与主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex,MHC-Ⅰ)结合的CTNNA2抗原多肽。采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)验证33对HCC和癌旁组织cDNA及12种HCC细胞株中CTNNA2的表达情况,同时探讨CTNNA2参与肿瘤调控的可能机制。结果:转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-Seq)定量转录组学和串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学结果均提示,CTNNA2在HCC组织中显著高表达。RNA-seq结果提示,CTNNA2表达阳性率为80.5%,较癌旁表达高11.24倍(P<0.001),TMT定量蛋白组学显示,HCC癌组织中CTNNA2表达阳性率为54.7%,较癌旁表达高2.66倍(P<0.001)。经免疫蛋白质组学检测,本研究发现30种可能与MHC-Ⅰ结合的CTNNA2抗原多肽。结论:多组学研究结果提示,CTNNA2在HCC中高表达,CTNNA2可能是新的肝癌疫苗靶分子。

体外研究UGT2B7基因SNP rs28365062对霉酚酸酯代谢的影响

目的:体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT2B7)基因SNP rs28365062对霉酚酸酯(MMF)代谢的影响,明确该位点变异是否与MMF副作用具有潜在关系。方法:采用基因重组、定点突变技术构建UGT2B7基因SNP rs28365062不同等位基因过表达载体,POLO3000转染法将重组过表达载体转染HEK293细胞,采用液相色谱-质谱联用仪(LC/MS/MS)系统检测霉酚酸(MPA)代谢产物--酰基化葡萄糖醛酸化物(Ac MPAG)24小时的生成量来评估转染不同等位基因细胞的酶活性。结果:成功构建过表达载体p IRES2-EGFP-prom(A)和p IRES2-EGFP-prom(G)并转染至HEK293细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示携带G等位基因的突变型UGT2B7代谢MMF产生Ac MPAG的能力降低,产物Ac MPAG 24小时的生成量仅为野生型的18.60%(P<0.001)。结论:UGT2B7基因SNP rs28365062可显著影响MMF代谢产物Ac MPAG的生成,可能是导致病人对MMF产生不同程度副作用的因素之一。

以隐匿瘢痕实施腹腔镜阑尾切除术一例报告

腹腔镜阑尾切除术是治疗急慢性阑尾炎的常规方法。本文报道了上海交通大学附属第一人民医院收治的急性阑尾炎患者1例。患者男性,40岁,因"右下腹持续性绞痛"住院。CT平扫检查提示阑尾增粗伴周围渗出,考虑急性阑尾炎。在全身麻醉下行经隐匿部位进腹腔的阑尾切除术。患者术后瘢痕隐匿,恢复良好,于3 d后出院。