磷脂酶A1催化水解大豆油研究

通过正交试验获得了磷脂酶A1催化水解大豆油的最佳水解条件:水解温度35℃、加酶量26U/g、加水量40%,水解时间8h。在此条件下,以KOH计,水解体系上层油层酸值达65.51mg/g。当用0.1%的氯化钙水溶液作为水解反应物时,和蒸馏水相比,钙离子对维持磷脂酶A1多次循环利用的残余活力有促进作用。水解反应残余活力的磷脂酶A1再加上50%的新添加酶,表现出很强的催化水解活力,酶回收使用6次时,残余酶活力仍然有初次使用活力的86.88%。

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化水解油脂机理研究(Ⅰ)——磷脂酶A1(Lecitase Ultra)组成及酶学特性

采用凝胶色谱、凝胶电泳和生物质谱分析了磷脂酶A1（Lecitase Ultra）（PLA1）的主要组成，结果表明PLA1主要由4种同工酶组成，这4种同工酶在氨基酸序列上与棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）的脂肪酶高度吻合。测得PLA1水解大豆油的最适pH为6．8，最适温度为40℃。PLA1在pH4～8之间，温度低于45℃下具有良好的稳定性，在pH3以下和pH10以上不稳定。

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化水解油脂机理研究(Ⅱ)——立体选择性及水解进程

通过比较磷脂酶A1(Lecitase Ultra)(PLA1)和胰脂酶(pancreatic lipase,PL)水解大豆油释放出的脂肪酸组成,推断PLA1催化水解甘油三酯(TAG)具有Sn-1,3位立体选择性。测定了PLA1催化水解大豆油的水解平衡常数。通过分析不同水解时间水解产物的变化,推断反应初期TAG按照1,2-DAG(甘油二酯)水解路线水解,DAG中以1,2-DAG含量为主,随着1,2-DAG含量增加,水解同时按1,3-DAG路线进行,1,3-DAG含量开始增加。在反应后期由于1,3-DAG更容易水解,1,3-DAG浓度逐渐下降,水解反应以1,3-DAG路线水解为主。

反相高效液相色谱法测定甘油二酯含量研究

用分子蒸馏和柱层析的方法制备了大豆油甘油二酯（DAG）的标准样品,通过高效液相-电喷雾质谱联用（HPLC-ESI-MS）和薄层色谱法（TLC）验证了标准样品的纯度。用反相高效液相色谱（RP-HPLC）在UV=210 nm做大豆油DAG的标准曲线,在质量浓度范围1.0～12.0 mg/mL,大豆油DAG标准曲线线性良好。通过加样回收试验表明,加样回收率在104%～109%之间,RSD在0.69%～5.19%之间。并用该方法分析了大豆油、分子蒸馏DAG样品中的DAG。